陳茜茜 伊 琳 滕政杰 黎永祥 寇雨順 李夢瑤 徐 靜

甘肅中醫(yī)藥大學中西醫(yī)結合學院，甘肅蘭州 730000

甲狀腺癌是頭頸部最常見的惡性腫瘤。隨著甲狀腺癌發(fā)病率與檢出率的增加，其已位列我國腫瘤發(fā)病增長率第1 位。目前，甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是國內外醫(yī)學界的研究熱點，如BRAF 基因突變、RAS 基因突變、RET/PTC基因重排、微RNA（microRNA，miRNA）差異表達等，其中對miRNA 差異表達理論的關注度較高。本文擬對PTC 相關miRNA 的研究進展做一綜述。

1 甲狀腺癌及甲狀腺乳頭狀癌

甲狀腺癌是對發(fā)生于甲狀腺濾泡上皮、濾泡細胞及甲狀腺間質的惡性腫瘤的統(tǒng)稱。甲狀腺腫大或結節(jié)是最常見的癥狀，其次腫瘤可壓迫氣管、食管后出現(xiàn)呼吸困難、吞咽障礙等癥狀，也可侵犯喉返神經導致聲音嘶啞。甲狀腺癌有4 種病理類型，分別為乳頭狀癌、濾泡狀癌、未分化癌及髓樣癌，其中PTC 約占成人甲狀腺癌的60%和兒童甲狀腺癌的全部。

PTC 分化好、惡性程度低，腫瘤生長緩慢，屬于高分化型腺癌，可局限存在數(shù)年，故易忽略。盡管PTC 有惰性生物學特性，但當發(fā)生甲狀腺外侵犯時，其預后較差。

1.1 PTC 的發(fā)病機制

PTC 的發(fā)病與輻射、遺傳、激素、高碘及地域環(huán)境等因素密切相關，但系統(tǒng)的發(fā)病機制尚不清楚。研究者在基因水平對PTC 的發(fā)病機制進行了研究，在約95%的腫瘤中發(fā)現(xiàn)基因改變。BRAF 突變和重排是主要的基因改變；BRAF 突變也被證實在PTC 中發(fā)揮重要作用。切爾諾貝利事故后兒童PTC 基因重排頻率高，點突變頻率低。這些研究表明基因表達在PTC 的發(fā)生發(fā)展中起至關重要的作用。同時，miRNA 及長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）對PTC 的細胞生物學及基因表達調控也起重要作用。

1.2 PTC 的診斷

甲狀腺超聲在PTC 的診斷、評估方面具有不可比擬的優(yōu)勢，其可以明確結節(jié)的存在與否、性狀、判斷有無鈣化及血供。但甲狀腺超聲只能初評甲狀腺結節(jié)的良惡性，不能明確診斷，更無法判斷是否有淋巴結轉移。另外，甲狀腺細針穿刺活檢術（fine needle aspiration biopsy，F(xiàn)NAB）在甲狀腺癌的診斷中廣泛運用。但FNAB 作為一項有創(chuàng)檢查，有術中出血、穿刺標本不合格等不足之處，且FNAB 對直徑＜5mm 的結節(jié)進行穿刺時存在困難。不論是超聲還是FNAB 在PTC 診斷中均有局限性。因此，有必要找到敏感的生物學指標，對疾病進行診斷及評估。

2 甲狀腺乳頭狀癌與微RNA

2.1 miRNA 的定義與生物學意義

miRNA 是一類內源性基因編碼的長度為21～23個核苷酸的非編碼單鏈小RNA 分子，其通過堿基配對原則與信使RNA（messenger RNA，mRNA）進行互補配對，通常與靶mRNA 的3＇UTR 互補配對，轉錄后水平調控靶基因的表達。miRNA 是一類高度保守的基因家族，大多數(shù)哺乳動物基因可以轉錄多種同源性miRNA，同一個核苷酸位點上有相同的高保守系列，即種子系列，該系列保證miRNA 與靶基因mRNA 堿基嚴格配對。miRNA 在細胞的增殖、凋亡等生命活動中起重要調控作用，每個不同的miRNA不僅作用于一個靶基因，也可同時作用于多個靶基因，一個靶基因可受多個miRNA 調控。研究報道約30%的人類編碼蛋白質基因受miRNA 的調控。

2.2 miRNA 在PTC 中的表達

近年來，miRNA 被認為是甲狀腺癌最具潛能的新型生物學標志物之一，也是癌基因和抑癌基因在轉錄、翻譯過程中的關鍵分子。miRNA 的異常表達與腫瘤細胞的侵襲、轉移、凋亡、預后及療效評估等密切相關，且對良惡性結節(jié)的早期鑒別也有作用。研究報道m(xù)iRNA-211/222 是區(qū)分甲狀腺結節(jié)良惡性的有效指標。此外，血漿外泌體miR-485-3p 可區(qū)分高、低危型PTC。另有研究證實miR-219與EYA2的關系，并表明miR-219 下調EYA2 基因以抑制PTC細胞的存活。越來越多的證據(jù)顯示miRNA 的差異表達與PTC 密切相關。在PTC 患者血清中發(fā)現(xiàn)3 種miRNA（miR-25-3p、miR-296-5p、miR-92a-3p）表達上調，且通過Logistic 回歸分析建立了3 個miRNA組合，發(fā)現(xiàn)診斷性能優(yōu)于單個miRNA。另外，免疫逃逸是免疫治療欠佳及癌癥快速發(fā)展的原因之一，PTC 常伴瘤內淋巴細胞浸潤。主要組織相容性復合體Ⅰ類相關蛋白A（major histocompatibility complex class Ⅰ chain-related proteins A，MICA）及其受體自然殺傷分子2 成員D（natural killer group 2 member D，NKG2D）是抗腫瘤防御的主要執(zhí)行者。MICA 和NKG2D 在PTC 中的表達伴隨著相關淋巴細胞的浸潤，并受miR-146b-5p 的調節(jié)，在PTC 中過表達miR-146b-5p 可下調MICA-NKG2D 的表達，從而降低腫瘤細胞的免疫原性。miR-146b-5p 靶向調控MICA-NKG2D 可能是甲狀腺癌細胞逃避免疫應答的途徑之一。

2.2.2 miRNA 在PTC 中的診斷價值 盡管甲狀腺癌的診斷工具取得顯著性進展，如液體活檢等，但在某些情況下仍不精準。因此，新生標志物的早期識別至關重要。miRNA 的評估可被認為是等效的甲狀腺癌篩查工具，利用miRNA 進一步研究PTC 的發(fā)病機制，可能為潛在的治療靶點帶來新的見解。Liu等通過Meta分析評估m(xù)iRNA對PTC的診斷價值，發(fā)現(xiàn)miR-222和miR-146b可能是診斷亞洲人群PTC的主要候選者。最近，結合生物信息學預測和雙熒光素酶分析發(fā)現(xiàn)，miR-3121-3p 與 Rap1GAP 的3＇UTR 結合，通過抑制Rap1GAP 從而上調絲裂原激活的蛋白激酶途徑促進細胞遷移、侵襲及增殖，可作為一種潛在的診斷標準。Wen 等檢測了119例PTC 患者和100 例正常人血清外泌體miR-29a 的表達水平，發(fā)現(xiàn)表達差異明顯，此外，miR-29a 低表達的患者復發(fā)風險極高，故血清miR-29a 外泌體可作為PTC 前期診斷和評估預后的潛在生物學指標。

2.2.3 miRNA 在PTC 的預后及復發(fā)中的調控 為探索新的PTC 預后標志物，Sun 等研究發(fā)現(xiàn)miR-127在預后不良的PTC 組織細胞中表達上調，miR-127和TNM 分期被認為是PTC 的兩個獨立預后指標。預測系統(tǒng)在復發(fā)風險和甲狀腺癌發(fā)生的基因表達可變性方面的局限性，揭示發(fā)現(xiàn)新的生物標志物的必要性。目前發(fā)現(xiàn)miR-146b、miR-221 和miR-222 可作為PTC 的潛在預后標志物。與正常甲狀腺、結節(jié)性甲狀腺腫大相比，PTC 中miR-146b、miR-181a、miR-187、miR-221 和miR-222 均高表達。miR-221和miR-222 與腫瘤復發(fā)顯著相關，因此miR-221 和miR-222 可作為預測預后的指標。

3 微RNA與長鏈非編碼RNA的關聯(lián)性研究

lncRNA 和miRNA 均為蛋白質非編碼RNA（non-coding RNA，ncRNA），參與調控生命活動的不同過程。lncRNA 是競爭性內源RNA（competitive endogenous RNA，ceRNA）網絡的主要組成部分，lncRNA 通過競爭miRNA，像海綿一樣緩沖并削減其干涉靶基因mRNA 編碼蛋白的能力，所以miRNA作為關聯(lián)節(jié)點與lncRNA 和mRNA 共同構成ceRNA網絡。一項研究發(fā)現(xiàn) 6 個腫瘤特異性 lncRNA（CCAT1、SYNPR、SFTA1P、HOTAIR、HCG22 和CLDN10）在PTC 確診患者中表達，驗證它們對預后有重要意義，為進一步了解lncRNA-miRNAceRNA 網絡和闡明PTC 的分子機制提供了數(shù)據(jù)。

有研究分析PTC 組織和癌旁組織的差異表達基因和lncRNA，在此基礎上構建ceRNA 網絡，發(fā)現(xiàn)5 個HUB 基因在網絡中的表達有顯著差異，12 條lncRNA-miRNA-mRNA 通路可能參與PTC 的病理生理過程。

小核仁RNA 宿主基因22（SNHG22）是調控卵巢癌的lncRNA。研究發(fā)現(xiàn)SNHG22 作為miRNA 海綿直接與miR-429 相互作用調節(jié)ZEB1 的表達，證實SNHG22、miR-429 和ZEB1 在PTC 細胞中形成一個相互作用的促癌調控網絡，通過ceRNA 機制調節(jié)PTC 進展。提示SNHG22/miR-429/ZEB1 通路可能是一個新的診斷治療靶點。此外，另一小核仁RNA 宿主基因3（SNHG3）被證實在PTC 中可作為ceRNA 與miR-214-3p 結合，靶向調節(jié)PSMD10 的表達，影響PTC 的發(fā)生進展。也有研究提示SNHG12 與miR-16-5p 同樣參與PTC 的進展。

研究發(fā)現(xiàn)敲除HOTTIP可抑制PTC細胞的增殖、侵襲和遷移及體內的成瘤作用，此外，HOTTIP 通過調節(jié)miR-637，下調AKT1 的表達并抑制PTC 細胞的增殖、侵襲和遷移。另外，miR-744-5p 可抑制lncRNA HOTTIP 促進PTC 增殖和下調細胞凋亡的能力。提示lncRNA HOTTIP 是一種潛在的PTC 癌基因，有望成為惡性腫瘤的治療靶點。

miRNA 與lncRNA 相互作用的調控網絡對PTC的發(fā)生發(fā)展及預后有至關重要的作用。TRIM29 是miR-761 在PTC 細胞中的直接下游靶點，lncRNA HOXA11調節(jié)的miR-761通過靶向TRIM29抑制PTC的進展。新近發(fā)現(xiàn)的lncRNA LINC01510 通過調控miR-335 及其靶點SHH 干預PTC 的診療。也有研究表明ABHD11-AS1 通過miR-199a-5p/SLC1A5 作為ceRNA 在PTC 中發(fā)揮惡性作用。此外，新發(fā)現(xiàn)的lncRNA n384546 也被證實是一個致癌的lncRNA，n384546/miR-145-5p/AKT3 通路與PTC 的進展有關，可能成為PTC 患者潛在的治療靶點。

4 微RNA與甲狀腺癌其他類型的相關性研究

約占10%的濾泡性甲狀腺癌（follicular thyroid carcinoma，F(xiàn)TC）由于沒有包膜和血管侵犯，難以與甲狀腺瘤區(qū)別。研究提示CRABP1、FABP4 和HMGA2 是可能區(qū)分濾泡性腺瘤和濾泡癌的最強候選基因。lncRNA-人類白細胞抗原復合體 P5（human leucocyte antigen complex P5，HCP5）在FTC中高表達，并促進FTC 細胞的增殖、遷移、侵襲，且HCP5 可作為miR-22-3p、miR-186-5p 和miR-216a-5p的ceRNA，在FTC 的發(fā)生發(fā)展過程中起調節(jié)作用。

未分化甲狀腺癌（anaplastic thyroid carcinoma，ATC）是一種罕見的甲狀腺癌，病死率極高。HCP5是一種lncRNA，已被證實與多種癌癥有關。Chen等通過檢測HCP5 和miR-128-3p 的表達水平，發(fā)現(xiàn)HCP5 直接與miR-128-3p 結合并調節(jié)其表達，低表達的HCP5 通過上調miR-128-3p 降低ATC 細胞活力，誘導細胞凋亡。提示可通過敲除HCP5 在ATC中發(fā)揮抗腫瘤作用。也有研究發(fā)現(xiàn)miR-199a-5p 過表達在體外抑制ATC 細胞的遷移和侵襲，在體內抑制肺轉移。均可為ATC 的治療提供新的思路。

甲狀腺髓樣癌（medullary thyroid cancer，MTC）是一種罕見的源于濾泡旁細胞的無痛生長的侵襲性惡性腫瘤，目前治療困難。關于miRNA 的調控機制還不完全清楚。既往研究表明，干細胞標記物CD133 的表達與MTC 的侵襲性有關。CD133 的表達可能輔助識別預后不良的MTC 患者；識別并能確定高危MTC患者病情進展的標志物對臨床治療和預后至關重要。

5 展望

甲狀腺癌有很多病理亞型，其中PTC 最為常見。PTC 屬于高分化型腺癌，好發(fā)于女性群體，其進展慢，難察覺，惡性程度低，預后較好，但易發(fā)生淋巴結轉移，故早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療顯得格外重要。miRNA 的差異性表達在PTC 的疾病診斷、評估及預后復發(fā)等方面有較大價值，此外，lncRNA 與miRNA 之間可通過競爭性結合而互相調控，進而影響腫瘤細胞的功能。預計在不遠的將來，隨著對miRNA、lncRNA 及其他生物標志物的深入探討，對疾病的認識及診治會更準確、更透徹。