鄧安富， 陳友波， 李 輝*， 姚 婷， 黃雨瑤

(1. 高原山地動物遺傳育種與繁殖教育部重點實驗室，貴州貴陽550025； 2. 貴州省動物遺傳育種與繁殖重點實驗室，貴州貴陽550025； 3. 貴州大學動物科學學院，貴州貴陽550025)

石斛具有增強T淋巴細胞殺死腫瘤細胞的能力，抑制腫瘤細胞的增殖、入侵和遷移，對于癌癥的治療應用前景廣闊[1]。宓文佳等[2]研究表明，石斛提取物可降低糖尿病小鼠的空腹血糖，并能有效改善小鼠的毛色、體溫、活動量、生活質(zhì)量和口服糖耐量。施子棣等[3]研究發(fā)現(xiàn)，石斛多糖可以增加小鼠胸腺和脾臟等免疫器官的重量，通過增加T細胞與B細胞增殖，從而增加抗體含量，增強細胞免疫和體液免疫。為減少濫用抗生素造成的危害，我國自2020年1月1日起全面禁止在飼料中添加抗生素。本研究以赤水金釵石斛粉作為飼料添加劑，研究不同比例的添加量對赤水烏骨雞血液免疫指標的影響，為開發(fā)利用綠色、無公害的中藥類飼料添加劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料和分組(1)試驗用石斛為貴州赤水金釵石斛，購自遵義赤水市金釵石斛產(chǎn)業(yè)開發(fā)有限公司。(2)隨機選取赤水竹鄉(xiāng)雞養(yǎng)殖有限公司飼養(yǎng)的生長狀況基本一致的60日齡赤水烏骨雞360只，采用完全隨機試驗設計分為4個組，每組90只，每組設6個重復，每個重復15只，分裝于5個雞籠，每籠3只，3層籠養(yǎng)。對照組飼喂基礎飼糧；試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別在基礎日糧中采用逐級混勻的方式添加0.07%、0.14%、0.21%質(zhì)量比例的赤水金釵石斛粉(見表1)。預飼期15 d，正飼期90 d。

表1 試驗分組

1.2 主要試劑和儀器非抗凝普通采血管、離心機、電子天平、無菌離心管、各免疫指標檢測試劑盒(購自南京建成生物工程研究所)、PowerWaveXS型全波長酶標儀(Bio-tek Instruments.Inc.USA)。

1.3 試驗日糧及營養(yǎng)成分根據(jù)美國NRC《雞營養(yǎng)需要(1994版)》及中國《雞飼養(yǎng)標準(NY/T 33—2004)》配制玉米-豆粕型基礎日糧，日糧組成及營養(yǎng)水平見表2。

表2 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎)

1.4 飼養(yǎng)管理采用3層全階梯式籠養(yǎng)，乳頭自動飲水器，自然光照結合人工補充光照16 h，自然通風，定期清理糞污，保持舍內(nèi)清潔衛(wèi)生。疫病防控按照種雞場防疫規(guī)定進行，定期檢查試驗雞的健康狀況并記錄死亡數(shù)。

1.5 樣品采集和檢測

1.5.1 樣品采集試驗結束后隨機選取48只雞(每個重復2只，每個處理組12只)，用非抗凝普通采血管翅下靜脈采血5 mL，靜置30 min后離心機3 000 r/min 離心15 min，分離出血清，將血清分裝到無菌離心管中，密封放入-20 ℃冰箱里保存。

1.5.2 樣品測定(1)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定血清中的免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、干擾素γ(IFN-γ)、白細胞介素12(IL-12)含量；采用比色法測定血清中的總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量。以上指標均按照試劑盒及酶標儀操作步驟進行測定。(2)空腹稱量150齡健康試驗雞活體重，屠宰后分離胸腺、脾臟、法氏囊，剔除表面脂肪，濾紙吸干血水，電子天平稱重，統(tǒng)計其絕對重量并計算免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)(mg/g)=免疫器官鮮重(mg)÷活體重(g)

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計應用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，結果以“平均數(shù)±標準差”表示。各組試驗數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，采用Duncan法進行組間多重比較。

2 結果與分析

2.1 雞血清免疫指標測定結果由表3可見：與對照組相比，飼料中添加0.07%石斛粉(試驗Ⅰ組)可顯著提高雞血清中IFN-γ、ALB、IL-12的含量(P<0.05)；添加0.14%石斛粉(試驗Ⅱ組)可顯著提高雞血清中ALB的含量(P<0.05)；添加0.21%石斛粉 (試驗Ⅲ組)可提高雞血清中IgM、ALB、IL-12的含量，其中ALB含量顯著升高(P<0.05)。在各免疫指標中，ALB的含量隨著石斛粉添加量的增加呈現(xiàn)升高趨勢。

表3 各組雞血清免疫指標測定結果

2.2 雞免疫器官指數(shù)測定結果由表4可見：在赤水烏骨雞飼料中添加不同比例的石斛粉對脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)均無顯著影響(P>0.05)。

表4 各組雞免疫器官指數(shù)測定結果 mg/g

3 結論

飼料中添加0.07%、0.14%、0.21%質(zhì)量比例的石斛粉可在一定程度上提高赤水烏骨雞血清中免疫球蛋白M、干擾素γ、白細胞介素12的含量，顯著提高血清中白蛋白的含量，對免疫器官無不良影響。

4 討論

4.1免疫球蛋白可與石斛多糖結合發(fā)揮消滅外來病毒的生理作用，增強機體免疫力[4]。石斛的主要成分是多糖、黃酮、氨基酸等，具有抗氧化、降血糖、提高免疫力等功效。測定血清中的抗體效價是評價機體產(chǎn)生免疫力及免疫力強弱的主要方法[5]。血清中免疫球蛋白能與外來抗原發(fā)生特異性反應從而保護機體不受傷害，其含量的高低可在一定程度上反映機體抗病力的強弱，是評價機體免疫能力強弱常用的檢測指標之一[6]。已有相關研究表明，枸杞多糖、棗多糖、杜仲多糖、人參提取物、黑靈芝多糖等中藥提取物可提高動物的免疫機能[7～11]。本研究以中藥金釵石斛作為研究對象，結果表明在飼料中添加一定量的金釵石斛粉可在一定程度上提高赤水烏骨雞血清中免疫球蛋白M、干擾素γ、白細胞介素12的含量，顯著提高血清中白蛋白的含量，增強赤水烏骨雞的免疫能力。

4.2脾臟、胸腺、法氏囊是禽類發(fā)揮免疫功能的主要免疫器官，其器官指數(shù)可在一定程度上反映禽類的免疫功能，是評價禽類免疫功能的重要指標[12]。相關研究發(fā)現(xiàn)，在基礎飼糧中添加人參葉多糖飼喂肉仔雞，可不同程度地提高肉仔雞的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)[13]。本研究結果表明，在赤水烏骨雞日糧中添加不同比例石斛粉對赤水烏骨雞的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)均無顯著影響，這與張煥新等[14]對小鼠的研究結果相似。