王金慧，胡 哲，李帥杰，張澤楠，王曉鈞

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，黑龍江哈爾濱 150069)

馬病毒性動(dòng)脈炎(Equine viral arthritis,EVA)是由馬動(dòng)脈炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)引起的一種馬屬動(dòng)物傳染病，主要侵害動(dòng)物的呼吸系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)。發(fā)生EAV感染時(shí)，大部分為亞臨床癥狀。急性感染的動(dòng)物可能會(huì)有一系列臨床癥狀的出現(xiàn)，比如發(fā)熱、抑郁和呼吸窘迫等。EAV感染可引起孕馬流產(chǎn)，感染母馬的流產(chǎn)率在10%～70%之間。原發(fā)感染后，有70%的種馬可以被持續(xù)感染，并通過(guò)精液排毒，有時(shí)會(huì)變成終生帶毒[1-2]。以馬病毒性動(dòng)脈炎癥狀為特征的疾病最先暴發(fā)于美國(guó)俄亥俄州Bucyrus附近的標(biāo)準(zhǔn)化育種場(chǎng)，從該育種場(chǎng)流產(chǎn)胎兒的肺中分離到第一株EAV,命名為Bucyrus株[3]。后來(lái)該病在全世界流行，血清學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)在北美、南美、歐洲、澳大利亞和非洲都發(fā)生過(guò)EAV感染。在美國(guó)，成年標(biāo)準(zhǔn)種馬EAV的血清陽(yáng)性率達(dá)70%～90%[4]。據(jù)我國(guó)2012年文獻(xiàn)報(bào)道，華南地區(qū)賽馬EAV的血清陽(yáng)性率為26%，華中地區(qū)賽馬的血清陽(yáng)性率為0，東北地區(qū)役用馬的血清陽(yáng)性率為8.26%，西北地區(qū)役用馬的血清陽(yáng)性率為7.55%[5]。近年來(lái)，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，馬匹貿(mào)易交流日益頻繁以及馬病無(wú)疫區(qū)建設(shè)的需要，馬病毒性動(dòng)脈炎的診斷越來(lái)越受到關(guān)注。

EAV為單股正鏈RNA病毒，屬于套式病毒目、動(dòng)脈炎病毒科。其基因組編碼多種結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白，其中，結(jié)構(gòu)蛋白GP5為主要產(chǎn)生中和抗體的蛋白。非結(jié)構(gòu)蛋白N蛋白是產(chǎn)生抗體最多的蛋白也是最保守的蛋白[6]。GP5蛋白和N蛋白成為血清學(xué)檢測(cè)和病原學(xué)檢測(cè)的主要靶標(biāo)蛋白。血清學(xué)檢測(cè)和病原學(xué)檢測(cè)都是實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)技術(shù)，本文對(duì)EAV實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行綜述。

1 檢測(cè)技術(shù)

1.1 病毒分離鑒定

當(dāng)懷疑老齡馬死于EAV感染時(shí)，可以從肺、肝和脾，特別是消化道外周淋巴組織中分離病毒。在流產(chǎn)和死胎病例中，胎盤、淋巴網(wǎng)和胎兒組織都可以成為病毒的復(fù)制場(chǎng)所[7]。短期和長(zhǎng)期攜帶EAV的種馬則需取其精液進(jìn)行病毒分離。病毒分離可使用選定的細(xì)胞系，例如RK-13(ATCC CCL-37)、LLC-MK2(ATCC CCL-7)和原代馬或兔腎細(xì)胞。在低病毒感染性的樣本中，使用高傳代的RK-13細(xì)胞可提高EAV的分離率。不同樣本的接種前處理不同，拭子樣本用0.45 μm的濾膜過(guò)濾除菌，若樣本是全血?jiǎng)t取外周血單核細(xì)胞進(jìn)行病毒分離。將樣品處理好后接種于RK-13單細(xì)胞層中，每天堅(jiān)持觀察是否出現(xiàn)細(xì)胞病變(CPE)，CPE變通常在2 d～6 d內(nèi)出現(xiàn)，若沒(méi)有可見(jiàn)CPE，培養(yǎng)上清液在5 d～7 d后接種到RK-13單層細(xì)胞中。EAV分離株可以通過(guò)RT-PCR或?qū)崟r(shí)RT-PCR等來(lái)鑒定。病毒分離是OIE批準(zhǔn)的EAV檢測(cè)“金標(biāo)準(zhǔn)”[4]，適合用于EAV感染后疾病暴發(fā)的確診。但是該方法耗時(shí)長(zhǎng)，對(duì)樣品要求較高，不適用于大規(guī)模檢測(cè)。

1.2 抗原捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

國(guó)際上針對(duì)EAV病原的檢測(cè)方法比較少，戚亭等[8]利用EAV N蛋白的2株單克隆抗體建立了抗原捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(AC-ELISA)，其原理是先將捕獲抗體加到固相載體上，加入待檢抗原與之結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，再加入檢測(cè)抗體并利用底物顯色。該方法對(duì)EAV的最低檢測(cè)限度可達(dá)36 PFU，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒的定量分析，實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒抗原的快速檢測(cè)。

1.3 病毒核酸檢測(cè)技術(shù)

1.3.1 實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 熒光定量可以通過(guò)收集反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的熒光信號(hào)來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)擴(kuò)增過(guò)程，并對(duì)樣本的初始模板含量進(jìn)行定量。根據(jù)產(chǎn)生熒光信號(hào)物質(zhì)的不同，該方法可分為染料法和探針?lè)?。?shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-qPCR)敏感性高，特異性強(qiáng)，被廣泛應(yīng)用于病毒檢測(cè)。 Balasuriya U B R等[9]、Westcot D G等[10]和Manko S等[11]先后根據(jù)開(kāi)放閱讀框7(ORF7)的保守基因序列設(shè)計(jì)引物和探針，分別建立檢測(cè)EAV的RT-qPCR方法。以上3種方法均被OIE列為推薦的EAV檢測(cè)方法。Westcot D G等建立的方法敏感性與病毒分離相當(dāng)。Balasuriya U B R等和Manko S等建立的方法(T1和T2)最低檢測(cè)限度分別為10個(gè)分子的病毒RNA和0.68 PFU/mL的病毒樣本。Lu Z C等[12]利用T1和T2兩種方法檢測(cè)不同類型的樣本以比較它們的敏感性。檢測(cè)155份組織培養(yǎng)上清樣本，與病毒分離相比，T1的檢出率為100%，T2的檢出率為95.2%。T1敏感性高于T2。檢測(cè)300份精液樣本，與病毒分離相比，T1的檢出率為93.4%，T2的檢出率為42.6%。T1的敏感性要高于T2，但仍然低于病毒分離。Miszczak F等[13]結(jié)合兩種不同的核酸提取方法以進(jìn)一步比較T1和T2在檢測(cè)精液樣本中的敏感性。通過(guò)選擇不同的核酸提取試劑和PCR反應(yīng)試劑，T1的敏感性可以達(dá)到病毒分離的敏感性水平，甚至是更為敏感的水平。Hans A等[14]把基本無(wú)偏差擴(kuò)增與OIE推薦的RT-qPCR方法結(jié)合起來(lái)。首先把提取的樣本RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，用Phi29聚合酶進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增，然后按照OIE推薦的RT-qPCR方法進(jìn)行檢測(cè)，這種結(jié)合可以提高檢測(cè)EAV RNA的敏感性，且沒(méi)有損失特異性。改進(jìn)后的方法適用于檢測(cè)精液和流產(chǎn)胎兒樣本，特別是病毒滴度很低的樣本。杜建[15]和梁成珠[16]先后根據(jù)EAV N蛋白設(shè)計(jì)引物和探針，建立了TaqMan探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光定量RT-qPCR，后者建立的方法最低可檢測(cè)到5 PFU/100 μL。胡月[17]針對(duì)ORF7區(qū)域設(shè)計(jì)了1對(duì)引物，建立了Eva Green RT-qPCR檢測(cè)方法，該方法能檢測(cè)出EAV的最低毒價(jià)為101.5TCID50/mL，能檢測(cè)到的最低拷貝數(shù)為10拷貝/μL?？傊?，熒光定量PCR具有敏感性高，特異性強(qiáng)，結(jié)果判讀簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，是目前廣泛應(yīng)用于檢測(cè)的方法之一。然而，不可否認(rèn)的是，該反應(yīng)的進(jìn)行要利用昂貴的儀器，對(duì)操作人員的要求較高，可能正是因此限制了其在部分資源匱乏地區(qū)的應(yīng)用。

1.3.2 恒溫隔絕PCR 恒溫隔絕PCR(insulated isothermal PCR,iiPCR)是一種基于POCKITTM系統(tǒng)的方法，這是在通過(guò)管底端加熱的毛細(xì)管中完成的。這種方法需要通過(guò)凝膠電泳進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)，限制了iiPCR的應(yīng)用。后來(lái)進(jìn)一步發(fā)展為基于TaqMan探針的iiPCR系統(tǒng)，把光學(xué)檢測(cè)模塊集成到iiPCR裝置中，用于檢測(cè)探針產(chǎn)生的熒光信號(hào)。此外，它還提供了使用默認(rèn)算法自動(dòng)解釋結(jié)果的功能，可直接得到陰性和陽(yáng)性結(jié)果，無(wú)需按照RT-qPCR分析的要求進(jìn)行手動(dòng)數(shù)據(jù)分析。Carossino M等[18]針對(duì)EAV基因高保守區(qū)ORF7設(shè)計(jì)引物，建立一種RT-iiPCR方法可以檢測(cè)精液和組織樣本中的病原，用此方法檢測(cè)125個(gè)精液樣本，敏感性和特異性分別為100%和98.33%。檢測(cè)122個(gè)流產(chǎn)胎兒、馬駒和攜帶EAV種馬的組織樣本，其敏感性和特異性分別為98.31%和92.06%。對(duì)EAV RNA最低檢測(cè)限度為10個(gè)拷貝。此方法耗費(fèi)時(shí)間少(<1 h)，操作簡(jiǎn)單，適合應(yīng)用于馬場(chǎng)的臨床檢測(cè)。便于對(duì)流產(chǎn)疫情的快速診斷和賽馬場(chǎng)呼吸道疾病快速診斷。

1.3.3 套式PCR 套式PCR是利用2對(duì)PCR引物對(duì)DNA進(jìn)行擴(kuò)增的方法，第2對(duì)引物的位置設(shè)計(jì)在目的片段的內(nèi)部，結(jié)合到第1對(duì)引物擴(kuò)增的片段上開(kāi)始第2輪擴(kuò)增，提高了PCR反應(yīng)的特異性。Gilbert S A等[19]根據(jù)EAV ORF1b基因序列的高保守區(qū)設(shè)計(jì)了套式PCR引物。最低檢測(cè)限度可能小于0.25 PFU/mL或2.5 PFU/mL。此方法相對(duì)于病毒分離試驗(yàn)來(lái)說(shuō)，檢測(cè)88份精液樣本，敏感性和特異性分別為100%和97%，適合用于低病毒含量的樣本檢測(cè)。操作時(shí)應(yīng)小心避免氣溶膠造成環(huán)境污染。

1.3.4 逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增 逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(RT-LAMP)是一種利用特殊設(shè)計(jì)的引物和具有鏈置換活性的的DNA聚合酶在60 ℃～65 ℃恒溫條件下，進(jìn)行核酸擴(kuò)增的方法?？梢栽诜磻?yīng)液中加入pH指示劑，直接通過(guò)顏色變化來(lái)判斷是否發(fā)生擴(kuò)增。黃素文[20]針對(duì)M基因設(shè)計(jì)了特異性引物，建立了EAV的RT-LAMP檢測(cè)方法。該方法的敏感性為12 pg，特異性良好，1 h即可完成反應(yīng)。RT-LAMP方法耗費(fèi)時(shí)間少，不需要昂貴的儀器，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判讀簡(jiǎn)單，適合用于EAV的核酸快速檢測(cè)，但也要注意氣溶膠污染造成的假陽(yáng)性。

2 血清學(xué)診斷技術(shù)

2.1 病毒中和試驗(yàn)

馬動(dòng)脈炎病毒的病毒中和試驗(yàn)(virus neutralization test,VNT)可用于疑似樣本和EAV暴發(fā)的確認(rèn)。目前廣泛應(yīng)用的中和試驗(yàn)程序是由美國(guó)農(nóng)業(yè)部國(guó)家獸醫(yī)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室建立的，建議用CVL-Bucyrus作為參考毒株，在RK-13細(xì)胞中進(jìn)行試驗(yàn)。McCollum W H[21]提出了一種噬斑減少中和試驗(yàn)。Fukunaga Y等[22]研究發(fā)現(xiàn)在病毒懸液中加入100 mL/L的豚鼠血清，可以提高免疫后任何階段的中和試驗(yàn)滴度。VNT可以用于馬病毒性動(dòng)脈炎的診斷，流行病學(xué)監(jiān)測(cè)，國(guó)際貿(mào)易檢測(cè)，免疫接種前、后的抗體檢測(cè)。此方法的優(yōu)點(diǎn)為敏感性高，特異性強(qiáng)，但需要較強(qiáng)的操作能力，并且耗費(fèi)的時(shí)間較長(zhǎng)，而且其敏感性會(huì)受多種因素影響，其中EAV病毒株的來(lái)源和傳代史對(duì)VNT的檢測(cè)結(jié)果影響比較大。

2.2 血凝和血凝抑制試驗(yàn)

含有血紅素結(jié)構(gòu)的抗原可與雞或者人等的紅細(xì)胞發(fā)生血凝(hemagglutination,HA)。加入該抗原的抗體，則會(huì)抑制紅細(xì)胞的凝集，這種現(xiàn)象稱為血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)反應(yīng)。Kubota T等[23]發(fā)現(xiàn)了EAV的HA現(xiàn)象。用感染Bucyrus毒株的RK-13細(xì)胞培養(yǎng)物作為抗原，發(fā)現(xiàn)可以使小鼠紅細(xì)胞凝集，但是凝集滴度低。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，用吐溫-80乙醚(TE)處理細(xì)胞或者用TE處理細(xì)胞上清液獲得的抗原凝集價(jià)高于未用TE處理的抗原凝集價(jià)。用TE處理過(guò)的細(xì)胞得到的抗原可使ddY小鼠、Balb/c小鼠和雞紅細(xì)胞分別在4 ℃、室溫和37 ℃發(fā)生凝集，而不能使馬、牛、豚鼠、沙土鼠、鵝和10日齡雞胚紅細(xì)胞發(fā)生凝集。將血清和抗原分別在37 ℃孵育1 h、4 ℃孵育24 h或48 h，然后用HI測(cè)定感染Bucyrus病毒株的馬血清中的抗體效價(jià)。結(jié)果表明,血清HA抗原混合物在4 ℃孵育24 h時(shí)，HI檢測(cè)的敏感性最高。檢測(cè)結(jié)果與中和試驗(yàn)相比，HI最早檢測(cè)出抗體的時(shí)間比中和試驗(yàn)晚1周，且檢測(cè)出的抗體滴度比中和試驗(yàn)略低[23]。

2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)利用抗原與其特異性抗體結(jié)合的基本免疫學(xué)概念，可以檢測(cè)抗原或液體樣本中的抗體。將抗原或抗體結(jié)合在固相載體中，通常在96孔微量板中，再用酶標(biāo)記的抗原抗體檢測(cè)生物分子與之結(jié)合，利用酶的顯色反應(yīng)產(chǎn)生可見(jiàn)的顏色變化或熒光，指示抗原抗體是否存在[24]。Cho H J等[25]用病毒感染的細(xì)胞上清進(jìn)行差速離心，再用Trition X-100處理，制備出高效抗原。利用此抗原和EAV GP5蛋白的單克隆抗體建立阻斷ELISA檢測(cè)馬血清中的抗體。相比于中和實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)320份樣本，該方法的敏感性為99.4%。檢測(cè)517份樣品，特異性為97.7%。由于中和抗體滴度高的血清會(huì)受前帶反應(yīng)的影響，因此用阻斷ELISA方法檢測(cè)時(shí)，應(yīng)在血清樣本未稀釋和稀釋10倍兩種情況下進(jìn)行。Chung C等[26]將上述ELISA方法中用到的GP5蛋白中和域單克隆抗體替換為GP5蛋白的非中和域單克隆抗體，檢測(cè)246份中和試驗(yàn)陽(yáng)性樣本，敏感性為95.5%。檢測(cè)2 223份中和試驗(yàn)陰性樣本特異性為99.8%。該方法在應(yīng)用時(shí)，仍不會(huì)受到血清暴露于非EAV生物制劑的影響，可以檢測(cè)EAV疫苗免疫馬和EAV感染馬中的特異性抗體。他們又用陰離子色譜交換法代替差速離心法純化抗原，其敏感性為98.2%，特異性為99.5%。相比于Chung C等[27]改進(jìn)后的方法，提高了敏感性，而特異性沒(méi)有改變，使得該方法與病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的一致率提高30%～40%。Nugent J等[28]根據(jù)EAV毒株Bucyrus GP5蛋白的81-106氨基酸建立間接ELISA方法，敏感性為96.75%，特異性為95.6%。 Metza G E等[29]根據(jù)阿根廷EAV基因序列，設(shè)計(jì)表達(dá)GP5蛋白C表位(67-90氨基酸)作為包被抗原，建立了檢測(cè)EAV抗體的間接ELISA方法。該方法Cut Off的OD值定為0.5時(shí)，敏感性和特異性分別為95.65%和80.43%。因此，選擇不同病毒株或者病毒株的不同肽段可能與特異性差異有關(guān)。

在我國(guó)，杜建[15]表達(dá)純化出EAV N蛋白，并以此蛋白作為包被抗原建立了間接ELISA方法，但是由于缺少馬EAV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清，該方法是在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物水平上建立的，并未應(yīng)用到本體動(dòng)物。梁成珠等[30]以GP5蛋白作為包被抗原建立了間接ELISA方法，該方法的特異性良好。應(yīng)用該方法和西班牙進(jìn)口試劑盒INGEZIM-ARTERITIS檢測(cè)180份血清，結(jié)果表明兩種檢測(cè)方法的符合率為95.6%。該方法與病毒中和試驗(yàn)相比，檢測(cè)900份血清樣本的符合率為94.1%。黃素文[20]利用N蛋白建立一種間接ELISA檢測(cè)EAV抗體，檢測(cè)557份樣品結(jié)果與病毒中和試驗(yàn)一致。趙世華[31]用N蛋白作為包被抗原，N蛋白的單克隆抗體作為競(jìng)爭(zhēng)抗體，建立了競(jìng)爭(zhēng)ELISA，但是該方法的敏感性較低。ELISA方法作為實(shí)驗(yàn)室常用的抗體檢測(cè)方法之一，敏感性高、特異性強(qiáng)和高通量的特點(diǎn)，適合用于流行病學(xué)監(jiān)測(cè)。

2.4 免疫熒光試驗(yàn)

免疫熒光是一種重要的免疫化學(xué)技術(shù)，通過(guò)與熒光標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，可以檢測(cè)和定位組織和細(xì)胞中的多種抗原。根據(jù)試驗(yàn)范圍和使用的特異性抗體不同，可以分為直接免疫熒光檢測(cè)和間接免疫熒光檢測(cè)[32]。Starik E等[33]表達(dá)純化出EAV N蛋白并獲得針對(duì)該蛋白的單克隆抗體，用異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)標(biāo)記該抗體，利用此抗體建立直接免疫熒光檢測(cè)方法，可以用于檢測(cè)EAV。該方法敏感性高，當(dāng)進(jìn)行EAV病毒分離試驗(yàn)CPE未出現(xiàn)或者CPE弱時(shí)，可用該方法做進(jìn)一步診斷。

2.5 熒光微球免疫試驗(yàn)

熒光微球是指在表面或者內(nèi)部含有熒光物質(zhì)，受到外界光源刺激能激發(fā)出熒光的固相球體。在很多領(lǐng)域發(fā)揮重要作用，在生物檢測(cè)領(lǐng)域尤為廣泛?？梢詰?yīng)用熒光微球?qū)崿F(xiàn)對(duì)微生物、蛋白、基因和生物小分子的檢測(cè)[34]。Go Y Y等[35]建立了熒光微球免疫分析方法，利用大腸埃希氏菌表達(dá)了全長(zhǎng)基因GP5、M和N,以及編碼這些蛋白的部分序列GP51-116,GP575-112,GP555-98,M88-162和N1-69。將重組表達(dá)的蛋白與熒光聚苯乙烯微球結(jié)合，用Luminex xMap 100設(shè)備進(jìn)行分析。在重組表達(dá)的這8段序列中，利用GP555-98蛋白建立的方法與病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)的結(jié)果一致率最高。應(yīng)用建立的方法與病毒中和試驗(yàn)進(jìn)行比較，共檢測(cè)2 500份樣品，敏感性和特異性為92.6%和92.9%。雖然此方法的敏感性低于病毒中和試驗(yàn)，但是其耗費(fèi)時(shí)間短， 對(duì)檢測(cè)人員要求低，適合于資源匱乏的地區(qū)使用，對(duì)于養(yǎng)殖場(chǎng)的現(xiàn)場(chǎng)快速監(jiān)測(cè)也具有重要意義。

3 總結(jié)

馬病毒性動(dòng)脈炎自1953年在美國(guó)俄亥俄州首次暴發(fā)后，后續(xù)有多國(guó)報(bào)道發(fā)生該病。目前中國(guó)尚未有地區(qū)發(fā)生大規(guī)模感染，但是由于國(guó)際貿(mào)易越來(lái)越頻繁和賽馬業(yè)的繁榮發(fā)展，對(duì)EAV的防控越來(lái)越重要。在臨床應(yīng)用中，需根據(jù)實(shí)際情況選擇和結(jié)合不同的檢測(cè)方法，才能得到真實(shí)可靠的結(jié)果。病毒分離鑒定是OIE認(rèn)定的檢測(cè)EAV的金標(biāo)準(zhǔn)，但是該方法花費(fèi)的時(shí)間長(zhǎng)，不適合對(duì)該病的監(jiān)測(cè)，更適合用于成年馬發(fā)生急性感染和母馬流產(chǎn)時(shí)進(jìn)行的檢測(cè)方法。分子生物學(xué)檢測(cè)方法敏感性高，耗時(shí)少，如熒光定量PCR、RT-LAMP、恒溫隔絕PCR和套式PCR等各種檢測(cè)方法，已經(jīng)得到了普遍的應(yīng)用。在血清學(xué)檢測(cè)方法中，中和試驗(yàn)是OIE指定的確認(rèn)方法，但成本高、耗時(shí)費(fèi)力，所以該方法可以作為ELISA初篩后陽(yáng)性血清抗體的確診方法。ELISA為最常用的檢測(cè)方法，適用于大規(guī)模監(jiān)測(cè)。目前我國(guó)對(duì)EAV抗體的檢測(cè)主要依賴于國(guó)外的試劑盒。相信隨著對(duì)EAV研究的不斷深入，新的敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便并且具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的檢測(cè)方法會(huì)不斷出現(xiàn)，這也是未來(lái)研究EAV檢測(cè)方法的重要方向。