朱曉琳 尚宇

（1 大連市中心醫(yī)院病理科，遼寧 大連 116000；2 大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧 大連 116000）

乳腺癌是女性最為常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率較高，發(fā)病率僅次子宮癌，對于女性的威脅較大。乳腺癌病變較特殊，中晚期時存在明顯的病灶轉(zhuǎn)移情況，腋下、甲狀腺等位置的淋巴結(jié)均可能存在局部浸潤的情況，此時治療措施受限，僅能經(jīng)放化療延續(xù)生命，而且治療效果有限。而乳腺癌早期能實現(xiàn)較好的臨床轉(zhuǎn)歸，因該階段內(nèi)病灶并未轉(zhuǎn)移，僅需通過乳腺切除治療或予以保乳手術(shù)治療，均能消除癌變細(xì)胞，延長乳腺癌患者的生存期，因而予以乳腺癌早期鑒別診斷至關(guān)重要[1]。乳腺癌均需要進(jìn)行病理檢查以便為臨床治療提供數(shù)據(jù)參考。病理檢查中，標(biāo)本染色是檢查的關(guān)鍵，染色后在特定條件下標(biāo)本會出現(xiàn)不同的顏色，以此提示是否存在乳腺癌。以往的常規(guī)染色措施有穩(wěn)定性不足的情況，會造成檢查結(jié)果的異常，不利于提高乳腺癌的檢出準(zhǔn)確率[2]。免疫組織化學(xué)染色作為病理檢查的重要方法之一，在臨床上占有重要意義，在進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色的過程中，不同性質(zhì)的乳腺細(xì)胞會形成不同的顏色，能準(zhǔn)確鑒別乳腺癌，可把握癌癥治療的時機(jī)[3]。但操作者的質(zhì)量控制水平均會對試驗結(jié)果造成影響，在研究中需由同一位檢驗人員完成乳腺標(biāo)本組織的染色處理，以維持檢查穩(wěn)定性，使乳腺癌患者得到準(zhǔn)確且及時的治療。因此本文通過我院于2017年10月至2018年10月進(jìn)行治療的乳腺癌患者50例，評定乳腺癌進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色的臨床效果以及質(zhì)量控制的方式。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將我院于2017年10月至2018年10月進(jìn)行治療的乳腺癌患者50例作為本次研究對象，取兩份標(biāo)本，將其分成免疫組織化學(xué)染色組和常規(guī)組。其中患者的年齡最大68歲，最小35歲，平均年齡（48.00±12.2）歲；體質(zhì)量最低為46 kg，體質(zhì)量最高為74 kg，平均體質(zhì)量（60.31±2.53）kg；BMI指數(shù)最低為17 kg/m2，BMI指數(shù)最高為28 kg/m2，平均BMI指數(shù)（22.79±1.66）kg/m2；病程最短為3個月，最長為9個月，平均病程（6.41±1.53）個月。

納入依據(jù)：經(jīng)過診斷確診為原發(fā)性高血壓[2]；經(jīng)過醫(yī)院倫理會批準(zhǔn)，且患者及其家屬對研究均屬于知情、配合的狀態(tài)，同意書已簽署。排除依據(jù)：存在嚴(yán)重的肝腎功能不齊全；其他癌癥，精神障礙等患者。

1.2 方法

先準(zhǔn)備試驗中所需要的用品：磷酸緩沖鹽溶液，第一抗體為免抗人雌激素受體，免抗人孕激素受體[4]，免抗人CerbB-2單克隆抗體，第二抗體選擇快速免疫組化Elivision試劑盒，DAB顯色試劑盒。

準(zhǔn)備完成之后，進(jìn)行標(biāo)本的制作，提取患者乳腺標(biāo)本，進(jìn)行提取的時候?qū)⑵浞殖蓛煞荩环葸M(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，另一份進(jìn)行常規(guī)的染色處理，提取的步驟如下：先利用含量為10%的甲醛溶液（福建石化集團(tuán)三明化工有限責(zé)任公司綜合廠，國藥準(zhǔn)字H35021355）進(jìn)行固定[5-6]，之后提取病變的組織，先用酒精進(jìn)行梯度的脫水處理，利用二甲苯透明，以58%的石蠟進(jìn)行浸蠟，在溫度為60 ℃的石蠟進(jìn)行包埋，將標(biāo)本制作成蠟塊，利用一次性的刀片將石蠟切片，切片的厚度在2～3 μm，在溫度為40 ℃的水中將切片展開，可以在水中加入適量的乙醇，這樣能夠讓切片更有張力，還能充分的展開，沒有褶皺的情況，之后將已經(jīng)處理過的載玻片載體進(jìn)行呈放，以溫度為65 ℃的烤箱進(jìn)行處理，時間為1～4 h。

免疫組織化學(xué)染色組進(jìn)行染色的方法為：進(jìn)行切片烤片之后梯度酒精已經(jīng)脫蠟脫水，利用蒸餾水清洗，之后用磷酸緩沖鹽溶液浸泡2 min，重復(fù)3次，同時將含量為3%的過氧化氫浸泡5～10 min[7]，這樣能夠清除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。經(jīng)磷酸緩沖鹽溶液浸泡3次后，高壓鍋內(nèi)裝載磷酸緩沖鹽溶液，加熱到沸騰，將切片放在耐高溫的塑料切片架上，并且將切片架放進(jìn)鍋內(nèi)，并將鍋蓋蓋上，將壓力閥扣上，持續(xù)加熱一直到出現(xiàn)噴氣，從開始噴氣開始計算1～2 min，將壓力鍋從水源移開，冷卻到常溫，再將切片取出，這樣能夠確保切片中不含有生物素，減少因生物素造成的非特異性的背景染色的情況。利用磷酸緩沖鹽溶液清洗切片2次之后，滴加第一抗工作液，保持37 ℃ 1 h，再利用磷酸緩沖鹽溶液清洗切片2次滴入第二抗工作液，同樣為37 ℃，15～20 min后，利用磷酸緩沖鹽溶液清洗切片3次，加入DAB進(jìn)行顯色處理，復(fù)染并封片。常規(guī)組進(jìn)行HE染色，以此作為對照組。

質(zhì)量控制：在標(biāo)本染色期間，為減少外界因素對染色結(jié)果造成的影響，需在同一環(huán)境下儲存乳腺病變標(biāo)本，由同一位檢驗人員完成乳腺標(biāo)本的染色。在檢查期間，還需保持無菌操作，防止手部攜帶污染物造成的染色結(jié)果異常。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 測評對比兩組不同的染色方式的結(jié)果以及免疫組織化學(xué)染色組的染色結(jié)果，兩種檢測方式的顯色結(jié)果。

1.3.2 測評兩組的染色質(zhì)量，評估維度有染色均勻度、染色效率、染色準(zhǔn)確度等，共有100分，0～59分即染色質(zhì)量差，60～79分即染色質(zhì)量可，80～89分即染色質(zhì)量良，90～100分即染色質(zhì)量優(yōu)。染色質(zhì)量良與染色質(zhì)量優(yōu)之和為染色優(yōu)良率。

1.3.3 測評兩組染色滿意度，內(nèi)容包括顯色情況、染色結(jié)果、診斷結(jié)果、使用價值等，各項均10分，由乳腺癌患者自主評分，0～4分，對免疫組織染色不滿意，5～7分，對免疫組織染色相對滿意，8～10分，對乳腺組織染色很滿意。滿意與很滿意之和為乳腺癌患者的滿意度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 本次試驗所有的患者數(shù)據(jù)均采用計算機(jī)軟件SPSS20.00進(jìn)行處理，計數(shù)資料以（%）的形式表示兩組不同的染色方式的結(jié)果、免疫組織化學(xué)染色組的染色結(jié)果，并且進(jìn)行χ2檢驗，組間對比P＜0.05，即可證實數(shù)據(jù)間差異較大。

2 結(jié)果

2.1 對比兩組不同的染色方式的結(jié)果 免疫組織化學(xué)染色組的診斷準(zhǔn)確率高于常規(guī)組，組間具有差異（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組不同的染色方式的結(jié)果對比[n（%）]

2.2 免疫組織化學(xué)染色組的染色結(jié)果 免疫組織化學(xué)染色組進(jìn)行ER、PR、CerbB-2、P53、Ki67檢測，陽性率分別為76.00%、56.00%、58.00%、72.00%、80.00%。見表2。

表2 免疫組織化學(xué)染色組的染色結(jié)果

2.3 兩種檢測方式的顯色結(jié)果 常規(guī)組染色后較為鮮艷，并且細(xì)胞核呈現(xiàn)出較為鮮明的藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)則能夠出現(xiàn)深淺不一的粉紅色，核仁為紅色。免疫組織化學(xué)染色組則能夠在鏡下看到病變的組織完整，未發(fā)現(xiàn)脫片情況，陽性以及陰性對比也比較明顯，陽性物質(zhì)的定位也較準(zhǔn)確，背景十分的干凈和清晰，細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和輪廓均能清晰的呈現(xiàn)，染色的結(jié)果也比較穩(wěn)定，ER、PR中切片為深褐色，CerbB-2下切片的細(xì)胞核為藍(lán)色，細(xì)胞膜為褐色。

2.4 兩組染色質(zhì)量優(yōu)良率 免疫組織化學(xué)染色組方案下的染色質(zhì)量優(yōu)良率為96.00%，常規(guī)組方案下的染色質(zhì)量優(yōu)良率為84.00%，免疫組織化學(xué)染色組高于常規(guī)組，P＜0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.5 兩組染色方式的滿意度 免疫組織化學(xué)染色組獲得的染色情況（98.00%）、染色結(jié)果（100.00%）、診斷結(jié)果（96.00%）、使用價值滿意度（98.00%）高于常規(guī)組（86.00%、90.00%、82.00%、84.00），P＜0.05。

表4 兩組染色質(zhì)量優(yōu)良率[n（%）]

表5 兩組染色方式的滿意度[n（%）]

3 討論

近些年，隨著各類不同的抗體進(jìn)行推廣和應(yīng)用，醫(yī)學(xué)者們逐漸意識到免疫組織化學(xué)染色對于病理的診斷，對臨床治療有著重要的意義。但需要注意的是，目前的免疫組織化學(xué)染色技術(shù)仍有著不足和缺陷[8]，因免疫組織化學(xué)染色的復(fù)雜性，在試驗的過程中還是會影響病理的檢測結(jié)果，因此在進(jìn)行檢測的過程中，需要進(jìn)行質(zhì)量控制，以此提高整體的診斷準(zhǔn)確率。

質(zhì)量控制的方式包括：①制作高質(zhì)量的石蠟切片是整個檢測的基礎(chǔ)，組織是否固定好是影響試驗結(jié)果的因素之一。在試驗中乙醇的脫水盡可能從較低的濃度開始，這樣能夠避免組織過度收縮，并且在常溫下二甲苯的透明時間要小于30 min，這樣不會造成組織變脆。②免疫組織化學(xué)染色所使用的玻片，在試驗正式開始之前，必須要用飽和的重鉻酸鉀濃硫酸進(jìn)行浸泡，且時間不能少于3 d，浸泡完成之后，將其撈起用水清洗[9-11]，再用含量為95%的乙醇清洗一遍，晾干并涂上防脫片劑，將其烘干并備用。進(jìn)行裱片時，切片的片膜不能有氣泡，烤片的溫度也不能太低，時間不能太短，這樣很容易出現(xiàn)脫片的情況，倘若溫度太高，時間太長，還會對原先的抗原造成影響，烤片之后專用的二甲苯和乙醇進(jìn)行脫蠟和清洗，脫蠟需要徹底。同時進(jìn)行高溫高壓的時間也要控制得當(dāng)，時間太長會造成染色背景太深，并且磷酸緩沖鹽溶液也不能反復(fù)的進(jìn)行使用，使用的容量還必須是讓所有的切片都能浸泡到，在試驗的過程中不能讓切片干涸[12-13]。在顯色鏡的輔助下，時間控制在3～7 min，在陽性明確的區(qū)域出現(xiàn)黃色，即可馬上停止染色，這樣能夠阻止出現(xiàn)背景著色的情況，更有利于觀察。③提高特異性著色，降低非特異性的染色，以上兩點都是確保試驗質(zhì)量的關(guān)鍵，抗體作為免疫組織化學(xué)染色最重要的試劑，質(zhì)量既關(guān)乎到試驗結(jié)果的判定，也會影響臨床的診斷。因乳腺癌組織的淋巴細(xì)胞、脂肪細(xì)胞均會出現(xiàn)非特異性的染色，因此對于一抗的選擇，需要其特異性強(qiáng)的試劑，抗體最好使用即開即用類型[14-15]，這樣能夠避免在進(jìn)行稀釋的過程中進(jìn)行錯誤操作，或者稀釋太多，抗體失效，對試驗的結(jié)果造成影響。

本次試驗數(shù)據(jù)證實，免疫組織化學(xué)染色診斷準(zhǔn)確率優(yōu)于常規(guī)組（90.00%vs.60.00%），組間差異顯著，其結(jié)果說明了進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色準(zhǔn)確率較高，出現(xiàn)漏診或者誤診的可能性較小，在進(jìn)行試驗的過程中，需要嚴(yán)格的質(zhì)量控制，才能提高準(zhǔn)確率。另外本次試驗數(shù)據(jù)還證實，對免疫組織化學(xué)染色組的ER、PR、CerbB-2、P53、Ki67進(jìn)行檢測，陽性率分別為76.00%、56.00%、58.00%、72.00%、80.00%。通過ER、PR、CerbB-2、P53、Ki67的檢測，根據(jù)不同的顯色反應(yīng)能夠更為準(zhǔn)確的判定病情。但在免疫組織化學(xué)染色實施期間，仍可能出現(xiàn)診斷不準(zhǔn)確的問題。針對此類情況，需增強(qiáng)檢驗人員培訓(xùn)，讓其掌握乳腺標(biāo)本染色流程，并能根據(jù)相關(guān)要求嚴(yán)格落實染色措施，以減少外界因素造成的染色結(jié)果異常。在較穩(wěn)定的染色操作下，能控制染色質(zhì)量，檢查期間能觀察到清晰的顏色變化，可準(zhǔn)確檢出乳腺癌病變。本研究中，免疫組織化學(xué)染色組獲得的染色情況（98.00%）、染色結(jié)果（100.00%）、診斷結(jié)果（96.00%）、使用價值滿意度（98.00%）高于常規(guī)組（86.00%、90.00%、82.00%、84.00），P＜0.05。即免疫組織化學(xué)染色法可獲得更高的滿意度。常規(guī)染色過程中存在較多影響因素，均會降低染色質(zhì)量，對乳腺癌病理檢查結(jié)果的準(zhǔn)確度產(chǎn)生負(fù)面影響。而在免疫組織化學(xué)染色法落實過程中，雖然也有較多影響因素，但通過質(zhì)量控制后，能制作出高質(zhì)量的切片，保持較好的病灶染色度，精準(zhǔn)染色下能確定病灶情況，提高乳腺癌病理診斷準(zhǔn)確率，因而能獲得較高的染色滿意度。

綜上所述，乳腺癌進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色能夠降低出現(xiàn)錯診、漏診的情況，準(zhǔn)確率較高，臨床方案的確定可以根據(jù)其病理結(jié)果進(jìn)行制定，值得在臨床上推廣和應(yīng)用。