劉傾城,黃萬(wàn)兵,黃曉潤(rùn),桂陽(yáng),劉宏宇,朱國(guó)勝*

（1.貴州省農(nóng)作物品種資源研究所，貴州 貴陽(yáng) 550006；2.貴州省食用菌育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550006；3.貴州省食用菌現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資源育種功能實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550006）

黃裙竹蓀（Dictyophora muhicolor）是擔(dān)子菌 亞門（Basidiomy cotina）、腹 菌綱（Gasteromycetes）、鬼筆目（Phallales）、鬼筆科（Phallaceae）、竹蓀屬（Dictyophora）的藥食兩用珍稀食用菌［1］。黃裙竹蓀竹蛋一般呈卵狀或球形，棕色或紫紅色；菌柄為高8～12 cm的圓柱形且呈淡黃色，中空，海綿質(zhì)；菌幕由菌蓋下方展開，完全展裙后達(dá)6.5～8.0 cm，呈淡黃色鐘型，且菌幕上分布有規(guī)則的3～4 cm網(wǎng)眼；菌蓋高3～4 cm，鐘形，表面覆有微臭粘性的棕褐色孢體［2-3］。黃裙竹蓀多生長(zhǎng)于竹林下的腐殖土、腐竹根或枯竹枝上，多分布于廣西、貴州、云南等地區(qū)［4］。黃裙竹蓀具有良好的防腐作用，同時(shí)作為藥食兩用的真菌，在治療細(xì)菌性腸炎、腳氣病等方面具有很好療效［5］。長(zhǎng)期以來(lái)，對(duì)黃裙竹蓀的研究主要圍繞其形態(tài)學(xué)、生物學(xué)特性、人工馴化栽培等方面，在藥用價(jià)值上有少量研究報(bào)道［6］，但鮮見對(duì)黃裙竹蓀營(yíng)養(yǎng)生理特性的研究報(bào)道。為黃裙竹蓀營(yíng)養(yǎng)生理學(xué)特性研究和菌種選育提供理論依據(jù)，探索不同碳氮源對(duì)黃裙竹蓀菌絲生長(zhǎng)的影響，篩選出黃裙竹蓀母種生長(zhǎng)最適宜的碳源和氮源。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 黃裙竹蓀Dm-L1，由貴州省食用菌育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2 培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖10 g、蛋白胨2.5 g、酵母浸粉0.5 g、磷酸二氫鉀0.9 g、硫酸鎂1.8 g、全粉31 g、瓊脂10 g、蒸餾水1 000 mL。

碳源培養(yǎng)基：分別用果糖10 g、甘露糖10.1 g、乳 糖9.5 g、蔗 糖9.5 g、麥 芽 糖9.5 g、可溶性淀粉9.1 g、紅糖9.5 g代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的葡萄糖。

氮源培養(yǎng)基：分別用草酸銨4.52 g、尿素0.96 g、硫酸銨2.11 g、酵母浸粉4.7g、蛋白胨2.8 g代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的酵母浸粉和蛋白胨的總量。

1.2 方法

試驗(yàn)設(shè)置8種碳源培養(yǎng)基和5種氮源培養(yǎng)基，每種培養(yǎng)基重復(fù)5次。將各碳源培養(yǎng)基和氮源培養(yǎng)基經(jīng)高溫滅菌后倒入90 mm一次性培養(yǎng)皿中，待冷卻凝固后，用直徑10 mm打孔器取黃裙竹蓀接種塊種于培養(yǎng)皿中央，放置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行避光培養(yǎng)，采用十字劃線法標(biāo)記剛萌發(fā)時(shí)的菌落直徑，培養(yǎng)21 d后記錄菌絲直徑并停止劃線，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速度并觀察菌絲生長(zhǎng)勢(shì)。

菌絲生長(zhǎng)速度=（最后一次所測(cè)菌落直徑—接種塊直徑）/培養(yǎng)天數(shù)×2。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同碳源培養(yǎng)基黃裙竹蓀的菌絲生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)勢(shì)

從表1可知，不同碳源培養(yǎng)基的黃裙竹蓀菌絲生長(zhǎng)速度存在差異，表現(xiàn)為可溶性淀粉＞果糖＞葡萄糖＞蔗糖＞乳糖＞甘露糖＞紅糖＞麥芽糖。可溶性淀粉作為碳源時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度最快，為0.898 mm/d，與果糖、葡萄糖培養(yǎng)基無(wú)顯著差異，但極顯著高于以甘露糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖和紅糖為碳源的培養(yǎng)基；果糖和葡萄糖作為碳源培養(yǎng)基時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度與麥芽糖培養(yǎng)基存在顯著差異，但與其他碳源培養(yǎng)基無(wú)顯著差異；其余5種碳源培養(yǎng)基之間均無(wú)顯著差異。從生長(zhǎng)勢(shì)看，除乳糖外的其他碳源培養(yǎng)基的黃裙竹蓀菌絲生長(zhǎng)勢(shì)無(wú)明顯差異，均表現(xiàn)為氣生菌絲較為豐富、健壯、潔白、菌落完整且邊緣整齊，而乳糖作為碳源時(shí)黃裙竹蓀菌絲的生長(zhǎng)勢(shì)較差（圖1）。結(jié)合黃裙竹蓀在不同碳源培養(yǎng)基的菌絲生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)勢(shì)看，黃裙竹蓀較為適宜的碳源培養(yǎng)基為可溶性淀粉，其次是果糖和葡萄糖，而乳糖作為碳源培養(yǎng)基時(shí)，其生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)勢(shì)表現(xiàn)均較差。

表1 不同碳源培養(yǎng)基黃裙竹蓀菌的絲生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)勢(shì)

圖1 不同碳源培養(yǎng)基的黃裙竹蓀菌絲生長(zhǎng)勢(shì)

2.2 不同氮源培養(yǎng)基黃裙竹蓀的菌絲生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)勢(shì)

從表2可知，不同氮源培養(yǎng)基的黃裙竹蓀菌絲生長(zhǎng)速度存在差異，表現(xiàn)為尿素＞硫酸銨＞蛋白胨＞酵母提取物＞草酸銨。尿素作為氮源培養(yǎng)基時(shí)的菌絲生長(zhǎng)速度最快，為2.540 mm/d，極顯著高于其他氮源培養(yǎng)基；草酸銨、蛋白胨、酵母提取物作為氮源培養(yǎng)基時(shí)，黃裙竹蓀的菌絲生長(zhǎng)速度無(wú)顯著差異，但均顯著低于以硫酸銨為氮源的培養(yǎng)基。從生長(zhǎng)勢(shì)看，尿素和硫酸銨作為氮源培養(yǎng)基時(shí)，黃裙竹蓀菌絲生長(zhǎng)勢(shì)最好，表現(xiàn)為氣生菌絲豐富、健壯、潔白、菌落完整且邊緣整齊；蛋白胨和酵母提取物次之，均能形成完整的菌落；草酸銨為氮源時(shí)黃裙竹蓀菌絲生長(zhǎng)勢(shì)最差，氣生菌絲稀疏且?guī)缀醪豢梢?，無(wú)法形成完整菌落（圖2）。結(jié)合黃裙竹蓀菌絲在不同氮源培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)勢(shì)看，黃裙竹蓀較為適宜的氮源培養(yǎng)基為尿素，其次是硫酸銨，而以草酸銨為氮源時(shí)，其菌絲生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)勢(shì)菌表現(xiàn)均較差。

表2 不同氮源培養(yǎng)基黃裙竹蓀的菌絲生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)勢(shì)

圖2 不同氮源培養(yǎng)基的黃裙竹蓀菌絲生長(zhǎng)勢(shì)

3 結(jié)論與討論

黃裙竹蓀在供試的8種碳源培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，表明其生長(zhǎng)可利用的碳源類型廣泛，對(duì)不同碳源的同化吸收主要體現(xiàn)在菌絲生長(zhǎng)速度上，表現(xiàn)為可溶性淀粉＞果糖＞葡萄糖＞蔗糖＞乳糖＞甘露糖＞紅糖＞麥芽糖，而在生長(zhǎng)勢(shì)上無(wú)明顯差異。結(jié)合菌絲生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)勢(shì)表現(xiàn)認(rèn)為，可溶性淀粉是8種碳源培養(yǎng)基中最適宜黃裙竹蓀菌絲生長(zhǎng)的碳源，這與前人對(duì)食用菌碳源的研究結(jié)果一致［7-8］，從側(cè)面反映出黃裙竹蓀中淀粉酶的活性較高，在培養(yǎng)基中添加可溶性淀粉能有效促進(jìn)黃裙竹蓀菌絲生長(zhǎng)。試驗(yàn)結(jié)果還表明，黃裙竹蓀對(duì)有機(jī)氮源和無(wú)機(jī)氮源均可有效利用，但在同化吸收上存在極顯著差異，在不同氮源培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)速度表現(xiàn)為尿素＞硫酸銨＞蛋白胨＞酵母提取物＞草酸銨。從生長(zhǎng)勢(shì)看，以尿素和硫酸銨為氮源的培養(yǎng)基上黃裙竹蓀菌絲生長(zhǎng)勢(shì)最好，其次是以蛋白胨和酵母提取物為氮源的培養(yǎng)基，最差的是以草酸銨為氮源的培養(yǎng)基。結(jié)合菌絲生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)勢(shì)得出，與其他氮源培養(yǎng)基相比，尿素為氮源培養(yǎng)基時(shí)，黃裙竹蓀的菌絲生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)勢(shì)均呈現(xiàn)出極顯著優(yōu)勢(shì)，是5種供試氮源培養(yǎng)基中的最佳選擇。這一結(jié)果與前人研究結(jié)果不同，現(xiàn)有的食用菌對(duì)氮源利用研究結(jié)果表明，多數(shù)食用菌對(duì)尿素的利用較差，以尿素作為氮源培養(yǎng)基時(shí)菌絲甚至出現(xiàn)停滯生長(zhǎng)狀態(tài)，這可能與尿素經(jīng)高壓滅菌后，其分解過(guò)程中產(chǎn)生的物質(zhì)有關(guān)［9］。因此，黃裙竹蓀在尿素利用上的特異性以及尿素是否能被黃裙竹蓀直接利用，有待進(jìn)一步研究驗(yàn)證。