趙勝杰 尼 博 盛 敏*

1.河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，鄭州 450000；2.中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東 青島 266032

牛結(jié)核病是由牛分支結(jié)核桿菌引起的一種慢性消耗性人獸共患病，在我國(guó)被列為二類動(dòng)物疫病，是威脅動(dòng)物與人類健康和生命安全的重要傳染病之一[1]。牛結(jié)核病對(duì)養(yǎng)牛業(yè)尤其是奶牛業(yè)的影響非常嚴(yán)重。家畜中以奶牛最易感，牛感染牛分支結(jié)核桿菌后，可引起肺結(jié)核、乳房結(jié)核、腸結(jié)核等，臨床癥狀與感染部位有關(guān)[2]。病菌可通過(guò)患病牛的鼻分泌物、唾液、糞便、乳汁等傳染給其它牛，健康牛在被污染的環(huán)境中可通過(guò)呼吸道和消化道感染，懷孕母牛也會(huì)通過(guò)胎盤(pán)傳播給胎兒，同時(shí)也可以通過(guò)交配感染[3]。結(jié)核菌素皮膚反應(yīng)是遲發(fā)型細(xì)胞超敏反應(yīng)，抗原進(jìn)入機(jī)體使機(jī)體的免疫T 淋巴細(xì)胞致敏，并大量分化增殖，當(dāng)已致敏的機(jī)體再次遭受到抗原入侵時(shí)，致敏淋巴細(xì)胞就會(huì)與之結(jié)合，引起變態(tài)反應(yīng)性炎癥。因此，對(duì)牛只進(jìn)行結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)可以判斷牛只是否感染結(jié)核分枝桿菌。因飼養(yǎng)密度大、牛只流動(dòng)頻繁，規(guī)?；?chǎng)結(jié)核病感染率顯著高于散養(yǎng)戶[4]，通過(guò)對(duì)規(guī)模牛場(chǎng)進(jìn)行結(jié)核病監(jiān)測(cè)，掌握牛群結(jié)核病流行情況和分布特點(diǎn)，對(duì)結(jié)核病的科學(xué)防控和公共衛(wèi)生安全具有重大意義。

1 材料與方法

1.1 材 料

本次調(diào)查共檢測(cè)規(guī)模牛場(chǎng)168 個(gè)，檢測(cè)活牛9 295 頭。其中：檢測(cè)肉牛場(chǎng)18 個(gè)，肉牛1 020 頭；檢測(cè)奶牛場(chǎng)149 個(gè)，奶牛8 275 頭。檢測(cè)所用牛型結(jié)核分枝桿菌提純結(jié)核菌素（purified protein derivative，PPD）購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，生產(chǎn)批號(hào)為202001。

1.2 方 法

結(jié)核病檢測(cè)采用牛結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)，操作步驟和結(jié)果判定按照《GB/T 18645-2002 動(dòng)物結(jié)核病診斷技術(shù)》標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。將牛只頸側(cè)中部上1/3 處被毛剃去，直徑約10 cm，用游標(biāo)卡尺測(cè)量術(shù)部中央皮皺厚度，并做好記錄。將牛型結(jié)核分枝桿菌PPD 稀釋成每毫升含2 萬(wàn)IU 的稀釋液，以75%酒精消毒剃毛后的術(shù)部，然后在剃毛后的術(shù)部皮內(nèi)注射0.1 mL 稀釋好的牛型結(jié)核分枝桿菌PPD。皮內(nèi)注射72 h 后，仔細(xì)觀察局部有無(wú)熱痛、腫脹等炎性反應(yīng)，并用游標(biāo)卡尺測(cè)量皮皺厚度，做好記錄。局部有明顯炎性反應(yīng)，皮厚差≥4 mm 的，結(jié)果判定為陽(yáng)性；局部炎性反應(yīng)不明顯，2 mm≤皮厚差＜4 mm的，結(jié)果判定為疑似；無(wú)炎性反應(yīng)，皮厚差＜2 mm的，結(jié)果判定為陰性。對(duì)疑似反應(yīng)牛只應(yīng)立即在頸部另一側(cè)以同一批PPD 同一劑量進(jìn)行第2 次皮內(nèi)注射，再經(jīng)72 h 后觀察反應(yīng)結(jié)果。對(duì)陰性反應(yīng)牛和疑似反應(yīng)牛只，應(yīng)于皮內(nèi)注射后96 h 和120 h 再分別觀察1 次，以防個(gè)別牛只出現(xiàn)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

2020 年共對(duì)來(lái)自河南省168 個(gè)規(guī)模牛場(chǎng)的9 295 頭活牛進(jìn)行了牛型結(jié)核菌素PPD 皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)檢測(cè)，檢出陽(yáng)性場(chǎng)點(diǎn)16 個(gè)，陽(yáng)性活牛73 頭，平均場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率分別為9.52%和0.79%。

2.2 不同種類牛群感染情況

按肉牛和奶牛對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：肉牛群體中未檢出結(jié)核陽(yáng)性個(gè)體；奶牛群體中，結(jié)核場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率分別為10.74%和0.88%。2020 年河南省不同牛群結(jié)核病流行情況見(jiàn)表1。

表1 2020 年河南不同牛群結(jié)核病流行情況

2.3 不同規(guī)模奶牛場(chǎng)感染情況

將所調(diào)查奶牛場(chǎng)按存欄量大小劃分為≤500頭、501～1 000 頭和＞1 000 頭3 個(gè)等級(jí)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行群間分布統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示：存欄量≤500 頭的規(guī)模奶牛場(chǎng)結(jié)核病場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率分別為13.75%和1.30%，存欄量介于501～1 000頭的奶牛場(chǎng)結(jié)核病場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率分別為9.68%和0.54%，存欄量＞1 000 頭的大規(guī)模奶牛場(chǎng)結(jié)核病場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率分別為5.26%和0.52%。存欄量≤500 頭的規(guī)模奶牛場(chǎng)場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率均為最高，不同存欄量規(guī)模奶牛場(chǎng)個(gè)體陽(yáng)性率和場(chǎng)群陽(yáng)性率均隨存欄量的上升呈下降趨勢(shì)；不同規(guī)模場(chǎng)點(diǎn)場(chǎng)群陽(yáng)性率差異顯著；1 000 頭以上場(chǎng)點(diǎn)的個(gè)體陽(yáng)性率顯著低于500 頭以下場(chǎng)點(diǎn)，且與501～1 000 頭場(chǎng)點(diǎn)無(wú)顯著差異（表2）。

表2 2020 年河南省不同規(guī)模奶牛場(chǎng)結(jié)核病流行情況

2.4 不同區(qū)域奶牛場(chǎng)感染情況

將所調(diào)查奶牛場(chǎng)按其所在地域分為豫東、豫西、豫南、豫北和豫中5 個(gè)區(qū)域，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行空間分布統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示：在本次調(diào)查中，豫東、豫南和豫中地區(qū)無(wú)結(jié)核陽(yáng)性牛只檢出；豫西地區(qū)規(guī)模奶牛場(chǎng)結(jié)核病場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率均為最高，分別為66.67%和8.48%，顯著高于其他區(qū)域；豫北地區(qū)規(guī)模奶牛場(chǎng)結(jié)核病場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率分別為10.53%和0.89%（表3）。

表3 2020 年河南省不同區(qū)域奶牛場(chǎng)結(jié)核病流行情況

3 討 論

從規(guī)模牛場(chǎng)結(jié)核病分布情況來(lái)看，河南省牛群結(jié)核病具有一定的群間分布特征。規(guī)模奶牛場(chǎng)結(jié)核病平均個(gè)體陽(yáng)性率和場(chǎng)群陽(yáng)性率分別為0.88%和10.74%，而規(guī)模肉牛場(chǎng)在本次檢測(cè)中未檢出結(jié)核病陽(yáng)性個(gè)體，這可能與肉牛養(yǎng)殖周期短且流動(dòng)相對(duì)較少有關(guān)；奶牛群體中，存欄量在500 頭以下的奶牛場(chǎng)結(jié)核病個(gè)體陽(yáng)性率和場(chǎng)群陽(yáng)性率均為最高，且隨存欄量增加，個(gè)體陽(yáng)性率和場(chǎng)群陽(yáng)性率均呈逐漸下降趨勢(shì)。這可能與不同規(guī)模奶牛場(chǎng)對(duì)引種、生物安全和凈化等工作的重視程度和管理水平不同有關(guān)[2]。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，河南省牛群結(jié)核病具有明顯的空間分布特征，陽(yáng)性牛只主要分布在豫西和豫北地區(qū)，其中豫西地區(qū)奶牛結(jié)核病感染情況尤為嚴(yán)重，場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率高達(dá)66.67%和8.48%。

河南省規(guī)模奶牛場(chǎng)結(jié)核病感染情況調(diào)查[2]顯示：2018 年河南省奶牛結(jié)核病場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率分別為8.55%和1.36%；存欄量500 頭以下奶牛場(chǎng)結(jié)核病場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率分別為13.41%和2.86%，存欄量500 頭以上奶牛場(chǎng)結(jié)核病場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率分別為2.80%和0.08%；豫東、豫西、豫南、豫北和豫中5 個(gè)區(qū)域中，除豫南地區(qū)無(wú)陽(yáng)性個(gè)體檢出外，其他區(qū)域均有陽(yáng)性檢出，且豫西地區(qū)場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率均為最高。與2018 年相比，本次調(diào)查結(jié)果顯示：整體上，河南省奶牛結(jié)核病個(gè)體陽(yáng)性率有所下降，但場(chǎng)群陽(yáng)性率卻有所上升，個(gè)體陽(yáng)性率下降主要體現(xiàn)在存欄量500 頭以下奶牛場(chǎng)，存欄量500 頭以上奶牛場(chǎng)場(chǎng)群陽(yáng)性率及個(gè)體陽(yáng)性率較2018 年均有所上升。奶牛結(jié)核病分布區(qū)域縮小，但豫西地區(qū)感染情況仍然嚴(yán)重，且豫北地區(qū)場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率均有所上升。

目前，多數(shù)地區(qū)采用單純的牛型結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)作為臨床檢測(cè)牛結(jié)核病的標(biāo)準(zhǔn)，雖然其具敏感性高、操作簡(jiǎn)單和試劑成本低等特點(diǎn)，但與比較變態(tài)反應(yīng)和γ-干擾素試驗(yàn)相比，其特異性較差，此外還存在著勞動(dòng)強(qiáng)度大、檢測(cè)周期長(zhǎng)和結(jié)果判斷主觀性強(qiáng)等缺陷。牛γ 干擾素試驗(yàn)被認(rèn)為是除變態(tài)反應(yīng)以外的最具有應(yīng)用前途的一種新型試驗(yàn)方法，已經(jīng)成為很多發(fā)達(dá)國(guó)家的法定牛結(jié)核檢疫方法。γ-干擾素試驗(yàn)具有較好的敏感性和特異性，且與比較皮試具有很好的符合率[5]。將皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和γ-干擾素試驗(yàn)相結(jié)合可有效減少假陰性反應(yīng)，更有利于牛結(jié)核病的防控與凈化[6]。

奶牛結(jié)核病具有持續(xù)感染、普遍病程長(zhǎng)等特點(diǎn)，防控奶牛結(jié)核病必須定期開(kāi)展檢測(cè)工作，應(yīng)重點(diǎn)監(jiān)測(cè)乳用牛和種用牛，對(duì)產(chǎn)奶牛、種用牛進(jìn)行全覆蓋檢測(cè)，對(duì)肉牛、耕牛及其家畜進(jìn)行抽檢，對(duì)檢測(cè)確診為陽(yáng)性家畜應(yīng)按照相關(guān)技術(shù)規(guī)范進(jìn)行撲殺和無(wú)害化處理[7]。牛場(chǎng)應(yīng)堅(jiān)持自繁自養(yǎng)的原則，如果需要補(bǔ)充牛群，要做好引種檢疫，確定陰性者才可引進(jìn)，經(jīng)隔離觀察和再次檢疫后方可混群飼養(yǎng)[8]。

4 結(jié) 論

本次調(diào)查共檢測(cè)168 個(gè)規(guī)模牛場(chǎng)的9 295 頭活牛，其中：檢測(cè)肉牛場(chǎng)18 個(gè)，肉牛1 020 頭，未檢出結(jié)核陽(yáng)性牛只；檢測(cè)奶牛場(chǎng)149 個(gè)，奶牛8 275頭，奶牛結(jié)核病場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率分別為10.74%和0.88%。存欄量≤500 頭的規(guī)模奶牛場(chǎng)場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率均為最高，個(gè)體陽(yáng)性率和場(chǎng)群陽(yáng)性率均隨存欄量的上升呈下降趨勢(shì)。豫西和豫北地區(qū)感染情況較為嚴(yán)重，豫東、豫南和豫中地區(qū)在本次調(diào)查中無(wú)陽(yáng)性檢出。值得關(guān)注的是，與2018年相比，河南省奶牛結(jié)核病個(gè)體陽(yáng)性率下降，但場(chǎng)群陽(yáng)性率卻上升，流行范圍縮小，但個(gè)別區(qū)域內(nèi)場(chǎng)群陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率卻上升。河南省規(guī)模牛場(chǎng)結(jié)核病具有明顯的群間和空間分布特征，牛結(jié)核病主要流行于奶牛場(chǎng)群，尤其是存欄量≤500 頭的奶牛場(chǎng)群，需加強(qiáng)牛群流動(dòng)監(jiān)管，針對(duì)不同區(qū)域和場(chǎng)群制定相應(yīng)防控和凈化措施，按場(chǎng)群和區(qū)域來(lái)逐步推進(jìn)牛結(jié)核病的防控和凈化工作。