向丹丹，牛鳳鶴

（南陽(yáng)市第二人民醫(yī)院，河南 南陽(yáng) 473000）

產(chǎn)前羊水穿刺檢測(cè)多用于血清學(xué)檢測(cè)、影像學(xué)診斷存在明顯異常孕婦，可明確染色體質(zhì)量，評(píng)估胎兒健康程度，對(duì)保證孕育質(zhì)量具有積極意義[1-2]。羊水細(xì)胞染色體核型檢驗(yàn)為胎兒染色體異常診斷金標(biāo)準(zhǔn)。但在取樣過(guò)程中易受樣本污染而影響檢測(cè)質(zhì)量，且羊水穿刺操作時(shí)間較長(zhǎng)、技術(shù)要求較高，難以滿(mǎn)足孕婦快速診斷需求；同時(shí)此種診斷技術(shù)對(duì)染色體分辨率較低，影響診斷效果[3]。隨著基因?qū)W的發(fā)展，在產(chǎn)前羊水細(xì)胞檢測(cè)中，基因組拷貝數(shù)變異測(cè)序（CNV-Seq）技術(shù)應(yīng)用頻率逐漸提升，對(duì)致病性CNVs檢出靈敏度高，但對(duì)部分染色體結(jié)構(gòu)異常診斷檢出率相對(duì)有限[4]。為此，本次研究選取于我院接受羊水穿刺檢測(cè)孕婦59例為研究對(duì)象，探究以上兩種檢測(cè)方案的臨床價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年1月—2021年6月期間于我院接受羊水穿刺檢查孕婦59例，年齡18～42歲，平均（29.12±3.33）歲；孕周18～28周，平均（20.25±3.24）周；孕次1～5次，平均（2.63±0.30）次；產(chǎn)次0～3次，平均（1.82±0.30）次。

納入標(biāo)準(zhǔn)：唐氏篩查高風(fēng)險(xiǎn)者；年齡≥35歲；無(wú)創(chuàng)DNA高風(fēng)險(xiǎn)者；超聲檢查顯示鼻骨缺失、脈絡(luò)叢囊腫、腸管增寬、頸部透明層厚度≥2.5 mm者；孕期不良接觸者；既往染色體異常兒孕育史者；其他懷疑染色體異常孕婦。排除標(biāo)準(zhǔn)：有干細(xì)胞、移植手術(shù)治療史者；1年內(nèi)輸血史者；多胎；無(wú)明確產(chǎn)前指征者。

1.2 方法 收集孕婦30 mL羊水樣本，分為3份（2份12 mL，1份6 mL），其中2份12 mL羊水樣本進(jìn)行羊水細(xì)胞G顯帶核型雙線(xiàn)培養(yǎng)，6 mL樣本羊水細(xì)胞DNA提取后，完成高通量基因測(cè)序檢測(cè)。

羊水細(xì)胞染色體核型檢測(cè)方法：樣本加入15 mL試管中，離心（1500 r/min，10 min），棄去上清液，分別加入0.5 mL培養(yǎng)基混勻制備單細(xì)胞懸液，接種于兩個(gè)T25無(wú)菌細(xì)胞培養(yǎng)皿中，細(xì)胞培養(yǎng)條件：37℃、5% CO2；培養(yǎng)9 d時(shí)第一次換液；培養(yǎng)瓶中存在15個(gè)以上分散均勻、貼壁生長(zhǎng)的克隆細(xì)胞，以圓形、折光性強(qiáng)分裂細(xì)胞為主時(shí)，加秋水仙堿進(jìn)行細(xì)胞處理，并進(jìn)行G顯帶（分辨率＞10 M）操作；對(duì)顯帶后細(xì)胞染色體以MetaSystems全自動(dòng)染色體掃描分析儀進(jìn)行核型掃描。

CNV-Seq技術(shù)檢測(cè)方法：取6 mL羊水樣本，離心（1500 r/min，10 min），棄上清液，提取50 ng基因組DNA為模板構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)，純化DNA文庫(kù)濃度（≥10 pM）后，應(yīng)用BGISEQ-500測(cè)序儀進(jìn)行樣本細(xì)胞低深度高通量測(cè)序，獲得染色體Z值及全部＞100 Kb染色體基因組拷貝數(shù)變異；將獲得＞100 Kb染色體基因組拷貝變異與在線(xiàn)人類(lèi)孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)、人類(lèi)染色體變異數(shù)據(jù)庫(kù)等數(shù)據(jù)庫(kù)中已有數(shù)據(jù)比對(duì)，結(jié)果依據(jù)美國(guó)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)與基因組學(xué)會(huì)（ACMG）指南為標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 觀察指標(biāo) （1）比較兩種檢驗(yàn)方法的檢測(cè)成功率和對(duì)異常染色體陽(yáng)性檢出率。（2）比較兩種檢測(cè)中未能有效檢出的檢測(cè)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以x± s 表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法未能有效檢出的檢測(cè)結(jié)果比較CNV-Seq技術(shù)對(duì)染色體結(jié)構(gòu)異常未能成功檢出，羊水細(xì)胞染色體核型對(duì)致病性未知CNVs未能成功檢出。見(jiàn)表1。

表1 兩種方法未能有效檢出的檢測(cè)結(jié)果比較

2.2 兩種檢測(cè)方法對(duì)異常染色體陽(yáng)性檢出率比較 CNV-Seq技術(shù)檢測(cè)成功率為100.00%，羊水細(xì)胞染色體核型檢出率為98.31%，兩組比較，P＞0.05；CNV-Seq技術(shù)陽(yáng)性率為20.34%，羊水細(xì)胞染色體核型陽(yáng)性率為16.95%，兩組比較，P＞0.05。見(jiàn)表2。

表2 兩種檢測(cè)方法對(duì)異常染色體陽(yáng)性檢出率比較[ n（%）]

3 討論

羊水穿刺獲得胎兒細(xì)胞后，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞遺傳學(xué)-染色體G顯帶核型分析，為產(chǎn)檢中高危孕婦主要檢測(cè)方法。但在其檢測(cè)中，操作較為繁瑣，對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員專(zhuān)業(yè)技術(shù)要求較高[5]，細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中易受到污染，實(shí)驗(yàn)要求較嚴(yán)格，難以滿(mǎn)足批量檢測(cè)的要求，結(jié)果檢出時(shí)間較長(zhǎng)，一般需要孕婦等待兩周左右。等待結(jié)果期間會(huì)使孕婦產(chǎn)生較大的心理壓力，難以滿(mǎn)足臨床診斷需求[6]。

隨著分子生物快速發(fā)展，CNV-Seq技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用頻率逐漸提升，通過(guò)高通量基因測(cè)序技術(shù)（NGS），對(duì)羊水中胎兒細(xì)胞進(jìn)行低深度高通量基因測(cè)序，并與基因庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，以發(fā)現(xiàn)樣本中基因拷貝變異情況[7]。與羊水細(xì)胞染色體核型檢測(cè)辦法相比，CNV-Seq技術(shù)的主要優(yōu)勢(shì)為能夠?qū)崿F(xiàn)全基因覆蓋；一次上機(jī)可完成≥80份樣本檢測(cè)，可滿(mǎn)足批量檢測(cè)需求；操作相對(duì)簡(jiǎn)單，完成報(bào)告時(shí)間較短，一般2～3 d即可出檢測(cè)結(jié)果，滿(mǎn)足產(chǎn)婦快速檢出需求；檢測(cè)樣本量較低，檢測(cè)精密度較高[8]。

本次研究中，對(duì)59例接受羊水穿刺檢驗(yàn)孕婦進(jìn)行以上兩種檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，兩種檢驗(yàn)方法在染色體異常陽(yáng)性檢出率及檢測(cè)成功率比較中，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明在羊水樣本檢驗(yàn)中CNVSeq技術(shù)可獲得與羊水細(xì)胞染色體核型檢驗(yàn)相似的檢驗(yàn)結(jié)果，證實(shí)CNV-Seq技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的重要性。但在研究中發(fā)現(xiàn)，CNV-Seq技術(shù)對(duì)染色體結(jié)構(gòu)異常未能成功檢出，分析其原因?yàn)椋喝旧w平衡易位、倒位時(shí)，并未發(fā)生遺傳物質(zhì)丟失、增加情況，因此，無(wú)法通過(guò)CNV-Seq技術(shù)成功檢出；而羊水細(xì)胞染色體核型通過(guò)細(xì)胞遺傳學(xué)-染色體G顯帶核型分析，可對(duì)不同染色結(jié)構(gòu)異常情況有效檢出。因此，在對(duì)染色體結(jié)構(gòu)檢查中，需以羊水細(xì)胞染色體核型結(jié)果為主。本次研究結(jié)果顯示，羊水細(xì)胞染色體核型對(duì)致病性未知CNVs未能成功檢出，分析其原因?yàn)椋簝煞N檢測(cè)技術(shù)均能夠成功檢測(cè)染色體非平衡性、非整倍體染色體異常情況，而與羊水細(xì)胞染色體核型比較，CNV-Seq技術(shù)可檢出更多致病染色體異常；同時(shí)CNV-Seq技術(shù)對(duì)檢測(cè)基因覆蓋范圍更廣，低濃度樣本DNA均可被有效檢出，因此，能夠檢出更多致病基因型。李翠[9]在研究中發(fā)現(xiàn)，CNV-Seq技術(shù)、羊水細(xì)胞染色體核型對(duì)異常染色體檢出率比較中，未見(jiàn)明顯差異（16.67%vs19.04%），與本次研究結(jié)果相近，證實(shí)在產(chǎn)前羊水細(xì)胞基因?qū)W檢驗(yàn)中CNV-Seq技術(shù)具有積極檢驗(yàn)價(jià)值。但因兩種檢測(cè)辦法單獨(dú)檢驗(yàn)時(shí)，均存在一定局限性，因此在實(shí)際臨床檢驗(yàn)中，建議兩種檢測(cè)技術(shù)同時(shí)開(kāi)展，以保證檢驗(yàn)質(zhì)量。

綜上所述，在產(chǎn)前羊水穿刺檢測(cè)中，羊水細(xì)胞染色體核型、CNV-Seq技術(shù)檢測(cè)成功率及陽(yáng)性檢出率比較中無(wú)明顯差異，可以考慮兩種檢測(cè)辦法聯(lián)合實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)，提升檢測(cè)質(zhì)量。