張亞妮 殷子斐 杜 娟 程彬彬

（海軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院中醫(yī)腫瘤科，上海 200433）

細(xì)胞生物學(xué)是生命科學(xué)的一門重要樞紐學(xué)科與前沿學(xué)科[1]，其實(shí)驗(yàn)方法已成為基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)研究不可或缺的技術(shù)。海軍軍醫(yī)大學(xué)中醫(yī)學(xué)八年制開設(shè)的課程實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)，是用科學(xué)實(shí)驗(yàn)的方法來(lái)研究和發(fā)展中醫(yī)學(xué)的一門科學(xué)，是溝通中醫(yī)基礎(chǔ)理論、中醫(yī)藥臨床療效與現(xiàn)代生命科學(xué)基礎(chǔ)研究中間不可替代的橋梁[2]，是培養(yǎng)學(xué)生中醫(yī)藥科學(xué)研究素質(zhì)以及綜合創(chuàng)新能力的一門學(xué)科[3,4]，細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究是其中重要的教學(xué)內(nèi)容之一。筆者近年來(lái)一直承擔(dān)這部分的教學(xué)任務(wù)，對(duì)教學(xué)內(nèi)容與方法積累了一定的經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)談?wù)勼w會(huì)。

1 精簡(jiǎn)理論教學(xué)內(nèi)容 提綱挈領(lǐng) 緊密結(jié)合實(shí)驗(yàn)

醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)是生命科學(xué)的一個(gè)重要分支，其研究領(lǐng)域相當(dāng)廣泛，研究?jī)?nèi)容也十分豐富。海軍軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)課程開設(shè)時(shí)間為大四學(xué)年，學(xué)生已經(jīng)學(xué)習(xí)過(guò)細(xì)胞生物學(xué)這門課程，有一定的知識(shí)儲(chǔ)備，所以本課程以了解和掌握實(shí)驗(yàn)技術(shù)，為今后的科研工作打好基礎(chǔ)為重點(diǎn)。由于課時(shí)有限，理論部分務(wù)求簡(jiǎn)明扼要、提綱挈領(lǐng)，并緊密結(jié)合科研需求，圍繞重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，主要目的是幫助學(xué)生回憶梳理知識(shí)要點(diǎn)，夯實(shí)理論基礎(chǔ)，更好地理解實(shí)驗(yàn)原理，從而更好地掌握技術(shù)方法?；诖耍窘萄惺以诨纠碚摬糠謱?duì)細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)和功能僅進(jìn)行了簡(jiǎn)要的回憶和概括，而將重點(diǎn)放在細(xì)胞的增殖分化和衰老死亡中，并著重講解細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的概念和過(guò)程，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)部分打好理論基礎(chǔ)。對(duì)于相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及調(diào)控機(jī)制，則鼓勵(lì)學(xué)生通過(guò)課外查閱文獻(xiàn)拓展認(rèn)識(shí)加深了解，一方面節(jié)省了課堂時(shí)間，另一方面可激發(fā)學(xué)生主動(dòng)學(xué)習(xí)的興趣，鼓勵(lì)他們自主了解學(xué)科發(fā)展的前沿。

2 拓展視野與突出重點(diǎn) 特色相結(jié)合

在介紹細(xì)胞生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)這部分內(nèi)容時(shí)，一方面，盡量全面地向?qū)W生介紹細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域中經(jīng)典的、應(yīng)用比較廣泛的各種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，以期開拓視野、提高認(rèn)知；另一方面，做到主次分明，突出重點(diǎn)難點(diǎn)，對(duì)于學(xué)生已有基礎(chǔ)的重復(fù)性的內(nèi)容如顯微鏡技術(shù)，或在科研實(shí)踐中應(yīng)用相對(duì)局限的內(nèi)容如放射自顯影技術(shù)等，僅做簡(jiǎn)單介紹，重點(diǎn)講解的內(nèi)容有如下幾個(gè)技術(shù)。

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)乃至整個(gè)生命科學(xué)研究中最基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)和技能[5]，也是一切細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，其重要性不言而喻。在講解中，教師大量運(yùn)用照片、視頻等豐富的教學(xué)手段，清楚明了地展示細(xì)胞培養(yǎng)的狀態(tài)、儀器設(shè)施、滅菌消毒的過(guò)程以及具體的操作細(xì)節(jié)[6]。比如，通過(guò)對(duì)比細(xì)菌、真菌、支原體等不同微生物污染的細(xì)胞培養(yǎng)的照片能夠讓學(xué)生直觀明確地認(rèn)識(shí)細(xì)胞污染，而細(xì)胞傳代、復(fù)蘇與凍存等操作視頻能夠在實(shí)驗(yàn)操作課前讓學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)流程有大致的了解，從而節(jié)省實(shí)驗(yàn)課時(shí)間，留給學(xué)生更多動(dòng)手操作的機(jī)會(huì)。同時(shí)，在講課中充分結(jié)合實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，用科研工作中培養(yǎng)失敗的真實(shí)案例不斷加深學(xué)生印象，使學(xué)生能更深刻地體會(huì)和掌握細(xì)胞培養(yǎng)中至關(guān)重要的無(wú)菌觀念以及操作要點(diǎn)。

2.2 流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)是高敏感度、高效率的細(xì)胞生物學(xué)研究方法和細(xì)胞定量分析技術(shù)，在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等眾多科研領(lǐng)域中應(yīng)用日益廣泛，發(fā)揮著重要作用[7]，以培養(yǎng)科研能力為目標(biāo)的中醫(yī)八年制學(xué)生，了解并初步掌握這個(gè)技術(shù)是十分必要的。由于涉及儀器參數(shù)眾多，檢測(cè)標(biāo)本的處理方法及操作比較復(fù)雜，學(xué)生很難在短時(shí)間內(nèi)充分理解掌握。教師主要通過(guò)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，幫助學(xué)生了解流式細(xì)胞儀的工作原理和流式細(xì)胞術(shù)的常規(guī)操作，主要目標(biāo)是讓學(xué)生能夠通過(guò)對(duì)結(jié)果圖的分析得出正確的結(jié)論。

2.3 血清藥理學(xué)中藥血清藥理學(xué)是20 世紀(jì)90 年代后期興起的一門中藥藥理體外實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，在中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究中有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，應(yīng)用日益廣泛[8]，因此，作為中醫(yī)專業(yè)的學(xué)生了解這項(xiàng)技術(shù)是十分必要和有益的。教師通過(guò)詳細(xì)介紹血清藥理學(xué)的起源、發(fā)展、內(nèi)容以及存在的問(wèn)題和展望，讓學(xué)生有比較全面的了解，并啟發(fā)他們思考這項(xiàng)技術(shù)在中醫(yī)藥研究中的意義和前景，鼓勵(lì)他們通過(guò)查閱文獻(xiàn)，了解目前對(duì)這項(xiàng)技術(shù)存在的一些爭(zhēng)議，培養(yǎng)學(xué)生科研創(chuàng)新意識(shí)。

3 優(yōu)化實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 夯實(shí)實(shí)驗(yàn)操作基本功 提高實(shí)驗(yàn)技能

實(shí)驗(yàn)操作無(wú)疑是本門課程中最重要的部分，它不僅是理論知識(shí)的具體實(shí)踐，更是學(xué)生實(shí)際動(dòng)手能力和創(chuàng)新能力培養(yǎng)的重要教學(xué)環(huán)節(jié)，是培養(yǎng)學(xué)生科研思維的關(guān)鍵[9]。由于課時(shí)限制，教師力求在有限的課時(shí)內(nèi)，將核心技術(shù)和基本技能傳授給學(xué)生，提高學(xué)生的實(shí)踐動(dòng)手能力和科研綜合素質(zhì)。基于此，本教研室將3 次實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容確定為細(xì)胞培養(yǎng)、MTT 比色法檢測(cè)細(xì)胞活性和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期與凋亡。這3 個(gè)實(shí)驗(yàn)側(cè)重點(diǎn)各有不同，細(xì)胞培養(yǎng)主要是訓(xùn)練學(xué)生的基本操作技能，培養(yǎng)良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣；MTT 實(shí)驗(yàn)是讓學(xué)生了解細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)如何在科研實(shí)踐中進(jìn)一步地應(yīng)用，要求學(xué)生在第一次實(shí)驗(yàn)掌握基本細(xì)胞培養(yǎng)操作的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步掌握細(xì)胞計(jì)數(shù)、鋪板等細(xì)胞實(shí)驗(yàn)技術(shù)以及能夠?qū)γ嘎?lián)儀檢測(cè)的光密度值（OD 值）結(jié)果進(jìn)行計(jì)算分析，得出細(xì)胞存活率（或藥物抑制率）；細(xì)胞周期和凋亡的檢測(cè)主要是讓學(xué)生認(rèn)識(shí)了解流式細(xì)胞儀，深入理解流式細(xì)胞儀的工作原理，正確讀懂分析流式細(xì)胞儀輸出的結(jié)果圖表。這樣的內(nèi)容安排，在培養(yǎng)學(xué)生的基本實(shí)驗(yàn)操作能力的同時(shí)可啟發(fā)學(xué)生的科研思維，鍛煉科研素養(yǎng)。

以細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)課為例，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)作為一切細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，是要求學(xué)生重點(diǎn)掌握的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，要求學(xué)生在一次課程中學(xué)會(huì)細(xì)胞傳代培養(yǎng)、凍存與復(fù)蘇的方法，完整地掌握細(xì)胞培養(yǎng)的基本過(guò)程。由于學(xué)生此前從未進(jìn)入過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)室，沒(méi)有接觸過(guò)無(wú)菌操作，本次課的目標(biāo)是希望他們通過(guò)這次課程體會(huì)到良好的操作習(xí)慣是保證細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵，因此，從進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室起，教師通過(guò)介紹基本構(gòu)造、設(shè)施、儀器、規(guī)章制度、生物安全等相關(guān)知識(shí)，以及示范操作時(shí)，不斷反復(fù)向?qū)W生強(qiáng)調(diào)操作規(guī)范，使學(xué)生樹立嚴(yán)格的無(wú)菌觀念；在學(xué)生獨(dú)立操作時(shí)，及時(shí)指出并糾正操作中的錯(cuò)誤或不規(guī)范行為；要求學(xué)生在實(shí)驗(yàn)報(bào)告中詳細(xì)記錄操作過(guò)程，結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果總結(jié)分析出現(xiàn)的問(wèn)題，以夯實(shí)基本功，提升學(xué)生細(xì)致嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲袘B(tài)度。

對(duì)于MTT 比色法檢測(cè)細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)，由于其完整的實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)，無(wú)法在一次課上完成，本教研室經(jīng)過(guò)精心設(shè)計(jì)和反復(fù)實(shí)踐，決定采用兩段操作的方法，由教員提前準(zhǔn)備不同稀釋度的細(xì)胞鋪板、培養(yǎng)并加入MTT 和三聯(lián)液，正式的實(shí)驗(yàn)課前半段著重讓學(xué)生學(xué)習(xí)和實(shí)踐細(xì)胞計(jì)數(shù)、鋪板等操作，同時(shí)進(jìn)一步熟悉鞏固上一次課學(xué)習(xí)的細(xì)胞傳代技術(shù)；后半段則采用提前準(zhǔn)備好的細(xì)胞培養(yǎng)板演示酶聯(lián)儀的檢測(cè)過(guò)程以及結(jié)果的計(jì)算和分析，將檢測(cè)得到的數(shù)據(jù)作為作業(yè)留給學(xué)生，要求他們?cè)趯?shí)驗(yàn)報(bào)告中寫出計(jì)算過(guò)程和結(jié)果。這樣的安排在大大節(jié)省時(shí)間的情況下讓學(xué)生了解到實(shí)驗(yàn)的全部過(guò)程，并學(xué)習(xí)掌握了關(guān)鍵操作技術(shù)和數(shù)據(jù)分析方法，取得了良好的教學(xué)效果。

細(xì)胞生物學(xué)是當(dāng)今生命科學(xué)的4 個(gè)前沿科學(xué)之一，其實(shí)驗(yàn)方法也隨著理論知識(shí)的更新而迅速發(fā)展，“細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)”在生命科學(xué)相關(guān)學(xué)科的教學(xué)中占有舉足輕重的地位，在中醫(yī)學(xué)專業(yè)也不例外。教師在教學(xué)中要讓學(xué)生了解細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用，拓展學(xué)生的科研視野，提升中醫(yī)人才科研素養(yǎng)和創(chuàng)新能力，培養(yǎng)與時(shí)代接軌的現(xiàn)代化中醫(yī)。為此，教師還需不斷在教學(xué)實(shí)踐中總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，探索更適應(yīng)新形勢(shì)的教學(xué)方法，實(shí)現(xiàn)教學(xué)目標(biāo)，保障教學(xué)質(zhì)量，提升教學(xué)效果。