王玉先，張紅漫，朱麗英，江 凌，黃 和

（1.南京工業(yè)大學(xué) 生物與制藥工程學(xué)院，江蘇 南京211800；2.南京工業(yè)大學(xué) 化學(xué)與分子工程學(xué)院，江蘇 南京211800；3.南京工業(yè)大學(xué) 食品與輕工學(xué)院，江蘇 南京211800；4.南京工業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 南京211800）

目前，抗生素濫用所引起的細(xì)菌耐藥問題已持續(xù)對公共衛(wèi)生產(chǎn)生重大威脅，因此迫切需要開發(fā)新型抗菌劑來替代傳統(tǒng)抗生素。納米抗菌材料（nanoantimicrobial materials）是一類或自身具有抑菌作用，或能作為載體提高抗菌劑給藥的有效性和安全性的材料，如石墨烯、碳納米管等非金屬納米材料以及金、銀、銅等為主的金屬納米材料。這些納米材料具有尺寸分散、比表面積大和高反應(yīng)活性等特點(diǎn)，一方面可以通過物理化學(xué)作用破壞細(xì)胞膜的完整性，另一方面可以產(chǎn)生大量的活性氧（ROS），從而抑制細(xì)菌、真菌等微生物的生長和繁殖［1］，因此越來越多的研究者致力于開發(fā)新型納米抗菌材料來治療細(xì)菌引起的感染性疾病。

目前，金屬納米材料因其特殊的物理化學(xué)性質(zhì)廣泛應(yīng)用于催化［2］、傳感［3］和生物醫(yī)學(xué)［4］等領(lǐng)域。金屬納米材料根據(jù)其尺寸大小可分為兩個尺度范圍：納米顆粒（NPs）和納米團(tuán)簇（NCs）［5］。NPs具有獨(dú)特的光學(xué)性質(zhì)、電學(xué)性質(zhì)、催化性質(zhì)以及良好的穩(wěn)定性，粒徑為10～100 nm；NCs是由少則數(shù)個、多則上百個原子組成的粒徑小于3 nm的團(tuán)簇。NCs這類超小納米粒子表現(xiàn)出獨(dú)特的電子（與費(fèi)米波長相當(dāng)）和光學(xué)性質(zhì)（熒光發(fā)射可調(diào)、光致發(fā)光和光穩(wěn)定性等），具有強(qiáng)大的量子尺寸效應(yīng)［6］。Xue等［7］研究發(fā)現(xiàn)，金屬納米材料能夠穿透細(xì)胞壁進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，與蛋白質(zhì)上的巰基反應(yīng)，引發(fā)細(xì)胞內(nèi)的酶失活、代謝紊亂。而Niu等［8］發(fā)現(xiàn)，金屬納米材料能破壞微生物的電子、物質(zhì)傳輸系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)，從而產(chǎn)生抗菌效應(yīng)。由于傳統(tǒng)的金屬納米顆粒對人體正常細(xì)胞存在毒副作用，這限制了其在臨床中的應(yīng)用，而M NCs由于具有超小的類分子結(jié)構(gòu)，容易被腎臟清除出體外，大大降低了材料自身的毒副作用。新加坡國立大學(xué)的謝建平教授團(tuán)隊(duì)在不同分子量M NCs的設(shè)計、合成及性能方面進(jìn)行了詳細(xì)的研究［9－10］，這些M NCs對不同種類細(xì)菌均表現(xiàn)出廣譜性的抗菌性能，進(jìn)一步擴(kuò)大了這類超小M NCs在生物醫(yī)學(xué)和環(huán)境工程中的應(yīng)用。此后，更多的研究者開始關(guān)注這類新型納米抗菌材料。

1 金屬納米團(tuán)簇的合成及性質(zhì)研究進(jìn)展

金屬納米團(tuán)簇（M NCs）是一種以金屬為核，表面被不同有機(jī)配體修飾的納米材料，是介于原子和納米顆粒之間的過渡態(tài)［5］，具有精確的原子組成及結(jié)構(gòu)，配體保護(hù)的M NCs可以用［Mn（SR）m］q表示（m、n和q分別為M NCs中的金屬原子M、配體SR以及凈電荷的數(shù)目）。M NCs根據(jù)合成路徑的不同可分為“自下而上”和“自上而下”兩種方法［11］，前者通常是金屬離子（Mn＋）在還原劑（如NaBH4）存在下被還原成金屬原子（M0），然后再在配體上逐漸成核生長，形成所需尺寸的M NCs。目前，“自下而上”工藝是制備M NCs最廣泛使用的方法，具有產(chǎn)率高、合成時間短和反應(yīng)過程簡單等特點(diǎn)，但控制好還原動力學(xué)是形成高質(zhì)量M NCs的關(guān)鍵?！白陨隙隆惫に噭t是通過配體對大尺寸納米顆粒的蝕刻作用合成超小尺寸的納米簇，該過程需要一個特定的反應(yīng)環(huán)境來促進(jìn)可控的蝕刻反應(yīng)，因此，與“自下而上”相比，“自上而下”工藝更耗時且產(chǎn)率低。目前，常用于合成金屬納米團(tuán)簇的有機(jī)配體以巰基為主，因?yàn)榕潴w中的硫原子與金屬原子之間可以形成強(qiáng)的共價鍵，可對M NCs起到良好的保護(hù)作用。許多具有精確原子數(shù)目的NCs已經(jīng)被報道，如以Au、Ag、Cu、Pt和Pd等為核的精確原子納米團(tuán)簇以及由這些金屬復(fù)合物形成的二元或多元納米團(tuán)簇［12］。針對不同金屬原子的納米團(tuán)簇的特點(diǎn)，分別對其常用的合成方法及性質(zhì)進(jìn)行了介紹。

1.1 金納米團(tuán)簇（Au NCs）

Au NCs是M NCs中穩(wěn)定性最好的材料之一。最初，人們利用Au原子與S原子之間強(qiáng)的共價作用力，選擇含巰基的生物分子為穩(wěn)定劑，在適當(dāng)?shù)臈l件下還原Au3＋來制備Au NCs［13］。通過這種方法，一方面人們可以選擇合適的配體來調(diào)節(jié)Au NCs的光學(xué)性質(zhì)；另一方面可以獲得低毒性的納米材料，使Au NCs具有良好的生物學(xué)應(yīng)用價值［14］。Murray團(tuán)隊(duì)的Huang等［15］利用硫醇分子作為配體合成的Au NCs粒徑約為1.8 nm，激發(fā)波長為780 nm。隨后，Link等［16］以谷胱甘肽（GSH）為保護(hù)劑合成含有28個金原子的納米簇。自此以后，越來越多的精確原子Au NCs也相繼被成功制備出來，如

除了這些含巰基的小分子外，一些生物大分子也常被用作合成Au NCs的配體。如：Ying等［24］以牛血清白蛋白為穩(wěn)定劑和還原劑，發(fā)展了一種綠色方法合成出了發(fā)紅色熒光的Au NCs，其量子產(chǎn)率能達(dá)到6%；Thomas［25］還嘗試?yán)肈NA分子中的胞嘧啶與金屬原子之間的強(qiáng)親和力來制備DNA穩(wěn)定的納米團(tuán)簇，獲得了具有藍(lán)色熒光的Au NCs；Liu等［26］也使用不同的DNA模板成功合成出了熒光Au NCs。

1.2 銀納米簇（Ag NCs）

Ag NCs與Au NCs的相似處在于都能夠通過含巰基的配體在還原劑的作用下形成納米簇，不同之處在于Ag NCs更容易使用不同的模板來合成。但是，Ag NCs易受外界條件的影響，導(dǎo)致穩(wěn)定性差，尤其是大氣中的O2和溶液中一些電子受體的氧化作用。因此，有關(guān)Ag NCs的研究主要集中在如何提高其穩(wěn)定性以及量子產(chǎn)率［27］。Zheng等［28］以羥基封端的聚酰胺-胺型樹枝高分子（PAMAM）為配體，利用羥基來俘獲Ag＋從而形成水溶性穩(wěn)定的Ag NCs，其發(fā)射波長為533～648 nm，具有良好的光穩(wěn)定性。Yuan等［29］以超支化聚乙烯亞胺（hPEI）為配體，在抗壞血酸的還原下成功合成了藍(lán)綠色熒光發(fā)射的Ag NCs，該NCs具有很好的pH穩(wěn)定性。

蛋白質(zhì)由于其自身含有多個結(jié)合位點(diǎn)，也常被應(yīng)用到Ag NCs的合成中。Narayanan等［30］合成了糜蛋白酶穩(wěn)定的Ag NCs，該納米簇激發(fā)波長為500 nm，發(fā)射波長為680 nm，具有出色的光穩(wěn)定性。Cui等［31］利用人工合成的多肽序列制備了一系列Ag NCs，該納米簇在不同堿性條件下能夠發(fā)出藍(lán)色和紅色的熒光。

DNA與Ag＋之間也存在相互作用，即Ag＋與胞嘧啶之間的強(qiáng)親和力，使得DNA成為合成Ag NCs的很好模板。Richards等［32］使用不同DNA模板合成出不同發(fā)光顏色的Ag NCs，發(fā)現(xiàn)Ag NCs的光穩(wěn)定性隨著激發(fā)波長的增加而逐漸減弱。最近，Wang課題組的Guo等［33］發(fā)現(xiàn)雜交后的雙鏈DNA也可以形成穩(wěn)定的熒光Ag NCs。

1.3 銅納米簇（Cu NCs）

與Au NCs和Ag NCs相比，Cu NCs的相關(guān)研究并不多。事實(shí)上，與貴金屬相比，銅具有價格低廉和高導(dǎo)電率的優(yōu)勢。同時，Cu NCs也具有M CNs所共有的特性，因此，Cu NCs在生物成像、生物傳感等方面也有著廣闊的應(yīng)用前景［34］。盡管如此，Cu NCs的合成方法還是較少，這主要是由于Cu NCs很容易被氧化且制備過程中的尺寸大小難以控制。同金、銀納米簇的制備一樣，含巰基的配體仍然可以與Cu2＋形成Cu—S鍵。Wei等［35］以2-巰基-5-丙烷基嘧啶為配體，通過NaBH4的還原得到具有雙發(fā)射波長的Cu NCs。一些生物大分子（如多肽、蛋白質(zhì)和DNA等）也能作為配體為Cu2＋提供結(jié)合位點(diǎn)形成穩(wěn)定的Cu NCs［36－37］。

1.4 其他金屬納米團(tuán)簇

除了上述常見的3種金屬納米團(tuán)簇之外，以鉑、鈀金屬為中心的M NCs被相繼合成出來。Kawasaki等［38］以及Hyotanishi等［39］分別用金屬鉑和金屬鈀，采用綠色一步法合成出了相應(yīng)的M NCs，其合成方法與前面的類似，只是將HAuCl4換成了H2PtCl6和PdCl2。目 前，Inouye團(tuán) 隊(duì) 的Tanaka等［40］使 用NaBH4為還原劑，以PAMAM為穩(wěn)定劑成功合成出水溶性的Pt NCs，該納米簇在360 nm紫外燈照射下發(fā)出強(qiáng)的藍(lán)色熒光。

2 主要金屬納米團(tuán)簇的抗菌性能研究現(xiàn)狀

2.1 單一金屬納米團(tuán)簇的抗菌效應(yīng)

由細(xì)菌引起的傳染病是全世界最重要的衛(wèi)生挑戰(zhàn)之一，每年困擾著數(shù)百萬人［41］。目前，M NCs被廣泛開發(fā)用于抑制和減少有害細(xì)菌的生長，其中，Ag NCs由于Ag＋與微生物界面間獨(dú)特的化學(xué)特性而在抗菌方面的應(yīng)用最廣泛。Setyawati等［42］以谷胱甘肽（GSH）修飾不同氧化狀態(tài)的Ag NCs（Ag＋和Ag0），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，具有豐富Ag＋的Ag NCs對革蘭氏陰性菌（P.aeruginosa、E.coli）和革蘭氏陽性菌（B.subtilis、S.aureus）都具有明顯的抑菌作用。Jin等［43］以二氫硫辛酸（DHLA）為配體，修飾后的Ag NCs對革蘭氏陰性菌（E.coli）的抑制作用明顯高于革蘭氏陽性菌（S.aureus）。Li等［44］從生物氧化代謝機(jī)制角度出發(fā)，以核黃素（RF）修飾Ag NCs，形成的RF@Ag NCs不僅可以產(chǎn)生高水平的ROS，還能夠破壞細(xì)胞膜的完整性，從而殺死細(xì)菌。

金納米顆粒（Au NPs）具有更好的生物相容性、更好的熱穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性，并且對人體細(xì)胞的細(xì)胞毒性相當(dāng)?shù)?，Au NCs同樣具備了Au NPs的這些特性。最初，人們認(rèn)為Au原子由于其惰性而不具備抑菌作用，因此形成的金納米材料亦如此。但是，Xie團(tuán)隊(duì)的Zheng等［45］在設(shè)計合成具有精確原子數(shù)的Au NCs上做了大量工作，其中以二巰基丙酸（MHA）為配體的Au24（MHA）18表現(xiàn)出抑菌作用，打破了人們對金納米材料無抗菌性的傳統(tǒng)認(rèn)識。為了進(jìn)一步考察Au NCs表面性質(zhì)對細(xì)菌的作用，Zheng等［46］研究金納米簇表面配體化學(xué)所產(chǎn)生的抑菌作用時發(fā)現(xiàn)含有豐富—COOH基團(tuán)的配體（MAB和MBA）表現(xiàn)出比含有—NH2基團(tuán)的配體（Cys）更強(qiáng)的抑菌作用。Zheng等［47］以不同結(jié)構(gòu)的巰基吡啶為配體，合成了一系列帶不同電荷的Au NCs，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，帶正電荷的Au NCs對超級細(xì)菌（耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，MRSA）表現(xiàn)出強(qiáng)的抑制作用。

2.2 金屬納米團(tuán)簇聯(lián)合抗菌物質(zhì)增強(qiáng)抗菌效應(yīng)

抗生素是目前臨床上治療細(xì)菌感染的主要藥物，但往往需要較高的濃度才能發(fā)揮作用，這樣就導(dǎo)致抗生素的殺菌效率低、生物毒性大，限制了其在臨床上的進(jìn)一步應(yīng)用。將納米材料與某些具有殺菌作用的藥物聯(lián)合使用，已成為一種提高抗菌效應(yīng)的有效方法。Kalita等［48］研究了一種溶菌酶為配體的Au NCs（AUNC -L），并在其表面功能修飾β-內(nèi)酰胺類抗生素氨芐西林（Amp），從而得到一種高效的抗菌雜化物（AUNC -L-Amp），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這種抗菌雜化材料不僅恢復(fù)了耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）對Amp的敏感性，而且表現(xiàn)出對非耐藥菌株高效的抗菌活性；在小鼠動物模型中，腹腔注射該雜化材料可消除系統(tǒng)性MRSA感染，局部應(yīng)用可根除糖尿病大鼠難治性創(chuàng)面MRSA感染，加速愈合過程。Zheng等［49］將谷胱甘肽（GSH）穩(wěn)定的Ag NCs與達(dá)托霉素（Dap）結(jié)合，形成的抗菌復(fù)合物（Dap-Ag NCs）表現(xiàn)出比簡單物理混合的Dap＋Ag NCs更強(qiáng)的破壞細(xì)胞膜的能力，從而起到抑菌的效果?？咕氖蔷哂袕V譜抗菌活性的一類天然多肽，與傳統(tǒng)抗生素不同的是抗菌肽主要通過直接破壞細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性來殺滅細(xì)菌。因此，將天然抗菌肽與納米材料有效結(jié)合為開發(fā)新型高效的抗菌藥物提供了新的可能。Wang等［50］以桿菌肽為模板合成了3種新型水溶性的M NCs來包裹Au、Ag或Cu原子，形成的抗菌M NCs不僅表現(xiàn)出不同的熒光特性，更重要的是M NCs與桿菌肽的高效協(xié)調(diào)作用顯著增強(qiáng)了對S.aureus的抗菌效果，實(shí)現(xiàn)了成像與抗菌于一體的多功能抗菌復(fù)合材料的制備。

一些陽離子化合物由于其帶正電可以通過靜電作用黏附于帶負(fù)電的細(xì)菌表面，然后通過改變細(xì)菌表面的電位以及破壞細(xì)胞膜蛋白從而導(dǎo)致細(xì)菌的死亡。Xie等［51］以谷胱甘肽為還原劑，通過一鍋法合成了包括季銨鹽（QA）、Nona -精氨酸肽（R9）和轉(zhuǎn)錄反激活肽（TAT）在內(nèi)的帶正電荷的功能化Au NCs，通過測定其在革蘭氏陽性菌（S.aureus、MRSA）、革蘭氏陰性菌（E.coli）和多重耐藥E.coli中的最低抑菌濃度（MIC）后發(fā)現(xiàn)：QA -Au NCs對4種靶向細(xì)菌表現(xiàn)出較好的抗菌效果，這可以歸因于QA -Au NCs表面的正電荷可以促進(jìn)靜電吸附到帶負(fù)電荷的細(xì)菌細(xì)胞膜上；QA -Au NCs引起了S.aureus膜完整性的破壞，膜通透性的增加和膜電位的耗散；QA -Au NCs還可以促進(jìn)活性氧（ROS）的產(chǎn)生，最終導(dǎo)致細(xì)菌死亡。Xu等［52］研究具有抗菌能力的聚乙烯亞胺（PEI）封端的銀納米簇（PEIAg NCs）的抗菌活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PEI-Ag NCs具有較高的抗菌能力，而且降低PEI的分子量可以顯著提高PEI-Ag NCs的抗菌性能。

2.3 金屬納米團(tuán)簇與其他納米材料復(fù)合增強(qiáng)抗菌效應(yīng)

單一的M NCs雖然在一定程度上已經(jīng)具備良好的抗菌效果，但也存在一定的局限性，如一些金屬材料價格昂貴，對正常細(xì)胞的毒理學(xué)與安全性問題還有待進(jìn)一步研究。因此，研究開發(fā)具有協(xié)同殺菌作用的納米復(fù)合物成為研究的熱點(diǎn)。殼聚糖（CS）是一種具有良好生物相容性和自然可降解的生物大分子，其自身具有抗菌作用并對哺乳動物表現(xiàn)出低的細(xì)胞毒性作用，因此廣泛應(yīng)用于細(xì)菌感染性的傷口愈合。Girija等［53］研究了一種基于超小Au NCs和CS自組裝的抗菌納米聚集體，與單一組分的納米材料相比，該聚集體對E.coli和S.aureus均表現(xiàn)出更強(qiáng)的抗菌活性，但對哺乳動物細(xì)胞的存活率卻無影響，而且這些納米聚集體能夠促進(jìn)傷口的愈合，這為開發(fā)和設(shè)計用于治療傷口感染的抗菌納米聚集體提供了新思路。Mishra等［54］制備了PEG修飾的殼聚糖水凝膠膜，并將Ag＋吸附在多孔膜結(jié)構(gòu)中，這些Ag＋在配體保護(hù)下被還原成約3 nm的Ag NCs，從而得到Ag NCs@PEG- CS復(fù)合材料，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)：Ag NCs的存在不僅可以提高膜的力學(xué)穩(wěn)定性，而且還降低了它們在溶菌酶和H2O2存在下的降解敏感性；體外抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該復(fù)合材料可以抵御細(xì)菌生物被摸的形成，從而起到抵抗細(xì)菌感染的作用。

M NCs除了與有機(jī)分子形成復(fù)合材料之外，還能與一些無機(jī)材料形成納米復(fù)合物。Liu等［55］采用一鍋法合成了高分散的Ag NCs修飾的介孔SiO2納米顆粒（Ag NC -MSNs），這種新型的納米復(fù)合材料具有廣譜性的抗菌作用，抗菌能力比Ag NP和Ag NP修飾的SiO2（Ag NP -MSNs）分別提高了17倍和27倍，而且這種復(fù)合材料能夠長期有效地釋放Ag＋，達(dá)到緩控釋放藥物的目的。Zheng等［56］設(shè)計了一種順磁性金屬離子鈥（Ho3＋）配位化合氧化石墨烯納米片（GO）的復(fù)合材料（Ho -GO），并將Au NCs結(jié)合在Ho-GO表面形成三元復(fù)合材料（Ho-GO-Au），結(jié)果發(fā)現(xiàn)：這種新型的復(fù)合材料一方面能夠排列形成具有高密度的鋒利邊緣，可高效地切割細(xì)菌的細(xì)胞膜，提升物理殺菌作用，再加上Ho-GO表面豐富的官能團(tuán)有利于它更好地與菌體接觸，從而產(chǎn)生更高水平的ROS以實(shí)現(xiàn)化學(xué)殺菌；另一方面，超小尺寸的Au NCs能夠進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)部，造成細(xì)菌代謝功能紊亂，誘使其產(chǎn)生大量ROS，同樣達(dá)到殺菌的目的。因此，這種新型三元復(fù)合材料可以結(jié)合GO和Au NCs具有的物理殺菌機(jī)制和化學(xué)殺菌機(jī)制，實(shí)現(xiàn)廣譜和高效地協(xié)同殺菌作用。

3 金屬納米團(tuán)簇的抗菌機(jī)制

與傳統(tǒng)的金屬納米材料抗菌機(jī)制一樣，M NCs一方面通過釋放金屬離子與細(xì)菌發(fā)生作用，另一方面通過材料自身的物理化學(xué)性質(zhì)破壞細(xì)菌的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，從而產(chǎn)生抗菌效應(yīng)。帶正電荷的金屬納米材料首先通過靜電作用附著在細(xì)菌膜表面，然后逐漸滲透到細(xì)菌體內(nèi)，通過改變膜的通透性來破壞細(xì)菌膜，進(jìn)而殺死細(xì)菌［57］。當(dāng)金屬納米材料的粒徑減小到NCs范圍，M NCs可以顯著提高其與細(xì)菌膜之間的相互作用，因此表現(xiàn)出更高的抗菌效應(yīng)［45，58］。在M NCs進(jìn)入細(xì)菌胞內(nèi)后，高效的類酶催化性質(zhì)可以通過影響菌體的氧化應(yīng)激能力進(jìn)一步發(fā)揮抗菌作用，如Au NCs可以上調(diào)氧化應(yīng)激相關(guān)代謝酶基因（narJ、narK）的表達(dá)，下調(diào)抗氧化應(yīng)激相關(guān)代謝酶基因（ilvC）的表達(dá)，從而產(chǎn)生高水平的ROS［45］。除此之外，細(xì)胞代謝和內(nèi)化在調(diào)節(jié)M NCs的抗菌活性方面也起著作用。因此，M NCs可通過膜損傷、氧化應(yīng)激以及代謝失活協(xié)同作用誘導(dǎo)細(xì)菌細(xì)胞死亡。

4 結(jié)論與展望

M NCs比傳統(tǒng)的納米顆粒具有更加與眾不同的光學(xué)、電學(xué)和化學(xué)性質(zhì)以及優(yōu)異的光穩(wěn)定性、良好的生物相容性，使得它們能夠作為新興的功能材料用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。特別是，這類材料所表現(xiàn)出的高效殺菌作用可解決目前抗生素濫用所導(dǎo)致的細(xì)菌耐藥性問題，因此受到研究者的青睞。盡管如此，M NCs還面臨著諸多問題。從材料本身來說，納米簇-保護(hù)基團(tuán)復(fù)合物的配位性質(zhì)決定了M NCs的穩(wěn)定性受到強(qiáng)競爭配體存在的影響，這就導(dǎo)致M NCs在復(fù)雜生物體內(nèi)的穩(wěn)定性受到挑戰(zhàn)。從功能角度來說，開發(fā)生物分子功能化的M NCs還處于起步階段，開發(fā)同時兼具診斷和治療功能的抗菌材料還需要進(jìn)一步研究，以達(dá)到應(yīng)用的目的。從抗菌效應(yīng)上來說，如何與其他材料復(fù)合來進(jìn)一步提升抗菌效果以及多角度探討抗菌機(jī)制也是具有突破性的發(fā)展方向?？傊?，M NCs的不斷發(fā)展將為臨床細(xì)菌感染的治療提供廣闊的應(yīng)用前景。