管凡荀，高鵬飛，湯亞云，劉書(shū)余，朱雅麗，謝愷舟,

（1.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225009；2.教育部農(nóng)業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品安全國(guó)際合作聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，江蘇揚(yáng)州 225009）

氟喹諾酮類藥物（fluoroquinolone，F(xiàn)Qs）屬于第三、四代喹諾酮類藥物（quinolones，QNs）。氟原子的引入增加了QNs的脂溶性，使得組織滲透性增強(qiáng)、半衰期延長(zhǎng)，進(jìn)而拓寬了抗菌譜、增強(qiáng)了抗菌活性。另外，特殊的作用機(jī)理確保了FQs與其他抗生素基本不存在交叉耐藥性。但研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)Qs會(huì)造成肌腱斷裂以及神經(jīng)損傷等持久且不可逆轉(zhuǎn)的毒副作用[1?2]。因此，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局和歐洲藥品管理局均建議限制FQs的使用[3]。

酰胺醇類藥物，又名氯霉素類藥物（chloramphenicols，CAPs），是由氯霉素衍生出的一類廣譜抗菌藥，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌均有抑制作用。但在長(zhǎng)期使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，氯霉素會(huì)導(dǎo)致再生障礙性貧血等多種毒副作用[4]，已被多國(guó)禁止作為獸藥使用。甲砜霉素（thiamphenicol，TAP）和氟苯尼考（florfenicol，F(xiàn)F）是氯霉素的衍生物，對(duì)苯環(huán)上的羥基進(jìn)行了取代，大大減少了氯霉素相關(guān)的毒副作用[4?5]，但依然具有較低的血液毒性和胚胎毒性。

液相色譜和液質(zhì)聯(lián)用法具有靈敏度高、準(zhǔn)確性強(qiáng)、重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)，在藥物檢測(cè)方面應(yīng)用廣泛，是這兩類獸藥殘留檢測(cè)的常用方法。雖然我國(guó)和歐盟均對(duì)這兩類獸藥的最大殘留限量（maximum residue limit，MRL）進(jìn)行了明確規(guī)定[6?7]，但這兩類獸藥殘留超標(biāo)現(xiàn)象屢禁不止。本文匯總了國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局2021年7月至2022年7月發(fā)布的國(guó)家食品安全監(jiān)督抽檢結(jié)果，在畜禽產(chǎn)品中FQs與CAPs不合格的批次數(shù)超過(guò)不合格總批次數(shù)的一半，尤其在禽蛋中這兩類藥物的不合格批次數(shù)占總批次數(shù)的69.8%，因此檢測(cè)和監(jiān)管中需要格外注意這兩類獸藥。隨著食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的不斷更新，要求檢測(cè)的獸藥種類數(shù)目也在不斷增多，發(fā)展快速有效、簡(jiǎn)便實(shí)用且覆蓋面廣的獸藥多殘留分析方法尤其重要[8]。

目前，F(xiàn)Qs與磺胺類、四環(huán)素類、硝基咪唑類等獸藥的多殘留同時(shí)檢測(cè)已有多個(gè)國(guó)內(nèi)和國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)，但FQs與CAPs的同時(shí)檢測(cè)方法卻鮮有報(bào)道，因此如何優(yōu)化并完善這兩類獸藥在動(dòng)物源性食品中的同時(shí)檢測(cè)方法是目前亟待解決的問(wèn)題。本文綜述了近十年來(lái)FQs與CAPs殘留的樣品前處理方法以及液相色譜和液質(zhì)聯(lián)用法的研究進(jìn)展，具體論述了納米材料吸附劑的應(yīng)用情況，總結(jié)了FQs與CAPs各檢測(cè)方法的檢測(cè)條件與優(yōu)缺點(diǎn)，以期為動(dòng)物源性食品中獸藥殘留檢測(cè)新方法的建立提供理論基礎(chǔ)。

1 樣品前處理技術(shù)

樣品前處理是獸藥殘留檢測(cè)必不可少的步驟，不當(dāng)?shù)臉悠非疤幚砜赡軐?dǎo)致目標(biāo)物提取不完全或提取后的樣品存在共提物，會(huì)對(duì)目標(biāo)物的測(cè)定造成干擾，降低檢測(cè)的準(zhǔn)確性，因此如何快速且高效地完成復(fù)雜樣品中多種獸藥殘留的提取、凈化及富集是液相色譜和質(zhì)譜法必須解決的問(wèn)題。常見(jiàn)的獸藥殘留前處理方法包括液液萃?。╨iquid-liquid extraction，LLE）、固相萃?。╯olid-phase extraction，SPE）、Qu-EChERS（quick，easy，cheap，effective，rugged，safe）方法和加速溶劑萃?。╝ccelerated solvent extraction，ASE）等。

1.1 液液萃取

LLE是利用各組分在不相容溶劑中溶解度不同，而將目標(biāo)物從樣品基質(zhì)中分離出來(lái)的前處理方法。乙腈等有機(jī)溶劑常被用作萃取劑，其適用范圍廣，對(duì)大部分獸藥殘留都有很好的提取效果。除萃取劑外，溫度和壓力直接影響到各組分在水相和有機(jī)相中的溶解度，也是LLE方法所要考慮的因素。Barreto等[9]采用低溫凈化對(duì)萃取液進(jìn)行處理，只需要經(jīng)過(guò)乙腈萃取、低溫凈化和離心上清液三個(gè)步驟就能有效分離出牛肉、豬肉、禽肉和魚(yú)肉中9種FQs殘留，加標(biāo)回收率為79%～115%，RSD為2.6%～15.4%。Xiao等[10]以0.2%氫氧化銨水溶液作為萃取溶劑，中等壓力，200 ℃條件下，對(duì)禽組織中的CAP、TAP、FF和氟苯尼考胺（florfenicol amine，F(xiàn)FA）進(jìn)行亞臨界水萃取，所得加標(biāo)回收率為86.8%～101.5%，RSD小于7.7%，提取效果較好。亞臨界水萃取技術(shù)是近十年來(lái)剛剛興起的一項(xiàng)前處理技術(shù)，暫時(shí)沒(méi)有相應(yīng)的商業(yè)化設(shè)備，這不利于標(biāo)準(zhǔn)化方法的建立。

分散液液微萃取（dispersive liquid-liquid microextraction，DLLME）是Rezaee等[11]提出的一種液相微萃取技術(shù)。DLLME的操作流程如圖1所示，在樣品溶液中加入萃取劑和分散劑后，因?yàn)榉稚┑淖饔?，萃取劑和水相不?huì)分層，而是形成萃取劑、分散劑和樣品溶液三者的乳濁液。將乳濁液離心后，利用注射器收集底層萃取物，即可實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物的提取。分散劑的使用，使萃取劑以微小液滴的形式在樣品溶液中散開(kāi)，增加了水相和萃取劑之間的接觸表面積，從而提高了萃取效率。孫鵬等[12]以離子液體作為萃取劑采用DLLME提取液態(tài)奶中FQs殘留，加標(biāo)回收率在83.9%～98.8%，RSD為4.6%～5.4%。相較于常規(guī)有機(jī)溶劑，離子液體更加綠色環(huán)保，具有廣闊的應(yīng)用前景。Karami-Osbooa等[13]采用DLLME提取牛奶中CAP和FF殘留，通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，當(dāng)0.4 mL氯仿用作分散劑時(shí)，所得回收率最高，為69.1%～79.4%，RSD小于15%?？傊?，盡量減少提取過(guò)程中有機(jī)溶劑的消耗，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟，是當(dāng)前LLE方法的發(fā)展趨勢(shì)。

圖1 分散液液微萃取操作流程圖Fig.1 Flow chart of liquid-liquid microextraction

1.2 固相萃取

SPE是利用固相吸附劑對(duì)不同物質(zhì)的吸附能力不同，而將目標(biāo)物從樣品基質(zhì)中分離出來(lái)的前處理方法。納米材料是以處在納米范圍內(nèi)的物質(zhì)為基本結(jié)構(gòu)單位所構(gòu)成的材料，因其高表面積比、獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)等特點(diǎn)，在被用作固相萃取，尤其是磁性固相萃?。╩icro-solid phase extraction，MSPE）的吸附劑，較其他材料具有明顯的優(yōu)勢(shì)，是近年來(lái)食品安全檢測(cè)的研究熱點(diǎn)。MSPE的操作流程如圖2所示，將磁性吸附劑加入樣品溶液，待磁性吸附劑與目標(biāo)物充分結(jié)合后，借助外界磁場(chǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)磁性吸附劑和樣品溶液的分離，然后再用合適的洗脫液將目標(biāo)物從吸附劑上洗脫下來(lái)，以供檢測(cè)分析[14]。MSPE操作簡(jiǎn)單，不需要裝填SPE柱，只需借助外界磁場(chǎng)，就可以對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行分離，已實(shí)現(xiàn)對(duì)嬰幼兒肉類食品中FQs殘留的自動(dòng)化在線樣品處理[15]。

圖2 磁性固相萃取操作流程圖Fig.2 Flow chart of magnetic solid phase extraction

與傳統(tǒng)吸附劑相比，納米材料超高的表面積比，大大提高了它的吸附性能，增強(qiáng)了對(duì)目標(biāo)物的提取能力。Bagheri等[16]將磁性二維金屬有機(jī)框架用于測(cè)定牛奶中FQs殘留，經(jīng)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）測(cè)得OFL、環(huán)丙沙星（ciprofloxacin，CIP）、諾氟沙星（norfloxacin，NOR）的檢測(cè)限（limit of detection，LOD）分別為0.012，0.009，0.016 ng/mL，回收率在95%～105%，RSD小于5%，且并未觀察到其他化合物的干擾作用。適當(dāng)?shù)男揎椖苁辜{米材料和目標(biāo)物特異性結(jié)合，顯著提高了檢測(cè)的選擇性和靈敏性。Huang等[17]基于一段能同時(shí)特異性識(shí)別CAPs殘留的DNA序列，制作了相應(yīng)磁性適配體，并結(jié)合HPLCDAD測(cè)得該吸附劑對(duì)CAP、TAP和FF的飽和萃取容量分別為2.82、2.56和2.72 μg/g，并且證明了其對(duì)兩性離子有很弱的非特異性吸附，不會(huì)干擾對(duì)目標(biāo)物的檢測(cè)。所得牛奶中CAP、TAP和FF的定量限（limit of quantification，LOQ）為0.40～0.55 ng/mL。強(qiáng)吸附能力和高選擇性使得納米材料在物質(zhì)分離的同時(shí)，能夠完成對(duì)目標(biāo)物的富集作用。此外，納米材料通常能被重復(fù)利用，有利于減少實(shí)驗(yàn)成本。He等[18]開(kāi)發(fā)了一種以磁性石墨烯作為吸附劑結(jié)合HPLC測(cè)定牛肉、雞肌肉、雞蛋中7種FQs殘留的檢測(cè)方法，并且證明了該材料的高吸收能力（>6800 ng）、高富集因子（68～79倍）和高重復(fù)性（>40次），所得回收率為82.4%～108.5%，RSD為1.6%～3.4%。除了上述材料外，磁性共價(jià)有機(jī)框架[19]、磁性有機(jī)聚合物[20]和分子印跡聚合物[21]等納米材料也均被應(yīng)用于FQs與CAPs殘留檢測(cè)中，并取得了不錯(cuò)的分離效果。

1.3 QuEChERS

QuEChERS方法于2003年首先由Anastassiades等[22]提出，是一種在分散固相萃取（dispersive solidphase extraction，DSPE）基礎(chǔ)上建立的前處理方法。QuEChERS方法的操作流程如圖3所示，粉碎后的樣品經(jīng)提取和鹽析過(guò)程后，利用分散固相萃取原理，加入吸附劑與絕大多數(shù)雜質(zhì)相互作用，通過(guò)離心將雜質(zhì)與目標(biāo)物分離，即可達(dá)到凈化的效果。根據(jù)目標(biāo)物的不同，對(duì)應(yīng)前處理過(guò)程中所使用的提取溶劑、鹽、吸附劑的種類和用量也會(huì)有所差異。在鹽析劑的選擇上，Lehotay[23]提出的乙酸鈉緩沖鹽版本和文獻(xiàn)[24]提出的檸檬酸鈉緩沖鹽版本作為美國(guó)和歐盟的標(biāo)準(zhǔn)方法，將pH維持在5左右，可以有效防止目標(biāo)物的電離和降解，已被世界各地的許多實(shí)驗(yàn)室作為常規(guī)方法采用。

圖3 QuEChERS方法操作流程圖Fig.3 Flow chart of QuEChERS

吸附劑組合的選擇直接關(guān)系到QuEChERS方法的凈化效果，常用的吸附劑主要包括N-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA）、十八烷基硅烷（C18）、石墨化炭黑（graphitized carbon black，GCB）等。韓臣波[25]以50 mg PSA和100mg NH2作為吸附劑，用于提取牛奶中6種FQs殘留，所得回收率為88.2%～106.2%，RSD小于10%，準(zhǔn)確度滿足實(shí)際檢測(cè)要求。Liu等[26]探討了不同吸附劑組合對(duì)牛奶和蜂蜜中CAP、TAP、FF殘留回收率的影響，最終發(fā)現(xiàn)當(dāng)加入0.35 g C18吸附劑和0.5 g Z-Sep吸附劑時(shí)，回收率最高，均高于90%，日內(nèi)RSD均低于9.1%（n=3），日間RSD均低于8.7%（n=3）。納米材料作為一種新型吸附劑，也可以用于QuEChERS方法。但目前，該類檢測(cè)方法多局限于水果蔬菜中農(nóng)藥和真菌毒素的殘留檢測(cè)[27?30]，用于動(dòng)物源性食品中獸藥殘留檢測(cè)的報(bào)道較為少見(jiàn)[24]。

1.4 加速溶劑萃取

加速溶劑萃取是一種通過(guò)較高的溫度和壓力來(lái)增強(qiáng)溶劑溶解目標(biāo)物能力的自動(dòng)萃取技術(shù)。魏丹等[31]在前處理過(guò)程中，先用ASE提取水產(chǎn)品中10種FQs，而后直接使用MSPE進(jìn)行凈化，省去了離心和過(guò)濾的過(guò)程，大大縮短了試驗(yàn)時(shí)間，加標(biāo)回收率為81.6%～105.8%，RSD為4.2%～13.6%。Wang等[32]采用ASE方法，在80 ℃、1500 psi條件下，使用堿性甲醇溶液萃取禽蛋中的TAP、FF和FFA殘留，所得回收率為90.31%～107.79%，RSD為1.46%～3.4%。雖然同樣是改變溫度和壓力來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的提取，但不同于LLE中所提到亞臨界流體萃取技術(shù)，ASE方法自動(dòng)化程度高、操作簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好，在節(jié)約溶劑的同時(shí)還能減少人為誤差造成的影響。綜上所述，動(dòng)物源性食品中FQs與CAPs殘留不同樣品前處理方法優(yōu)缺點(diǎn)比較，見(jiàn)表1。

表1 動(dòng)物源性食品中FQs與CAPs殘留不同樣品前處理方法優(yōu)缺點(diǎn)比較Table 1 Comparison of advantages and disadvantages of different sample pretreatment methods for FQs and CAPs residues in animal food

2 液相色譜法

2.1 高效液相色譜法

液相色譜法（liquid chromatography，LC）是以液體作為流動(dòng)相的色譜法，該方法適用于難揮發(fā)、熱穩(wěn)定性差、大分子物質(zhì)的定量定性分析。高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）在液相色譜的基礎(chǔ)上加上了高壓輸液泵，以克服流動(dòng)相通過(guò)固定相時(shí)產(chǎn)生的壓降，保證流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速或壓力輸送到色譜系統(tǒng)，從而提高了分離效率。

高效液相色譜常用的檢測(cè)器有二極管陣列檢測(cè)器（diode array detector，DAD）、紫外吸收檢測(cè)器（ultraviolet detector，UVD）、熒光檢測(cè)器（fluorescence detector，F(xiàn)LD）、電致化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器（electrogenerated chemiluminescence，ECL）等。

C18反相色譜柱在進(jìn)行物質(zhì)分離時(shí)，會(huì)將強(qiáng)極性組分洗脫出來(lái)，然后依次洗脫極性較弱的組分，常用于FQs與CAPs殘留的液相色譜檢測(cè)中。但不同于其他CAPs，F(xiàn)FA極性較強(qiáng)，在C18色譜柱上的保留時(shí)間短，并不能直接與其他CAPs進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)。謝愷舟等[33]在流動(dòng)相中加入十二烷基硫酸鈉與FFA生成弱極性離子對(duì)，從而增強(qiáng)樣品的疏水性，改善分離效果，將FF和FFA與樣品中其他組分完全分開(kāi)。Granja等[34]采用HPLC-UVD對(duì)魚(yú)肉中FF殘留進(jìn)行了測(cè)定，將FF全部轉(zhuǎn)化為FFA，以提高測(cè)定的準(zhǔn)確性，并用LC-MS/MS該方法的準(zhǔn)確性進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果顯示，F(xiàn)F的CCα為840 μg/kg，CCβ為879 μg/kg。

在流動(dòng)相的選擇上，乙腈具有洗脫能力強(qiáng)、吸光度小的特點(diǎn)，常被用作液相色譜檢測(cè)這兩類藥物殘留的有機(jī)相。FQs屬于兩性化合物，其解離狀態(tài)、熒光強(qiáng)度和溶解度與pH有直接關(guān)系，通常會(huì)在水相中加入甲酸、磷酸等酸性物質(zhì)，以維持樣品在流動(dòng)相中的電離狀態(tài)，增加FQs的響應(yīng)值，提高檢測(cè)方法靈敏度。Choi等[35]以磷酸（pH3）-乙腈作為流動(dòng)相，采用HPLC-FLD對(duì)豬、雞肌肉中沙拉沙星（sarafloxacin，SAR）殘留進(jìn)行檢測(cè)，所得LOD分別為1.1和1.7 μg/kg。Moema等[36]以0.1%甲酸水（pH2.74）-乙腈作為流動(dòng)相采用HPLC-DAD測(cè)得雞肝中4種FQs的LOD為5～19 μg/kg，LOQ為23～62 μg/kg，回收率為83%～102%。Li等[37]設(shè)計(jì)了一種簡(jiǎn)單穩(wěn)定的Ru（bpy）32+ECL檢測(cè)器，將Ru（bpy）32+修飾到電極表面，有效避免了傳統(tǒng)柱后加入給樣品帶來(lái)稀釋，造成色譜峰保留時(shí)間增加的缺點(diǎn)，以乙酸-乙酸鈉緩沖液（pH5.4）/乙腈作為流動(dòng)相，測(cè)得牛奶中4種FQs的LOD為0.006～0.02 μg/mL。另一方面，采用液相色譜法同時(shí)檢測(cè)FF和FFA殘留時(shí)，通常也會(huì)保證流動(dòng)相為酸性[38]，以改善FFA的出峰情況。

2.2 超高效液相色譜法

超高效液相色譜法（ultra performance liquid chromatography，UPLC）在HPLC基礎(chǔ)上，通過(guò)減小色譜柱粒徑、增加輸液泵壓力、采用高靈敏度檢測(cè)器等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，進(jìn)一步縮短了分析時(shí)間，減少了溶劑用量，降低了分析成本[39]。

UPLC的各項(xiàng)性能均優(yōu)于HPLC，為了進(jìn)一步提高方法的準(zhǔn)確性，對(duì)樣品前處理的要求往往更高，以減少樣品基質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。Aufartová等[40]將微波輔助萃取與固相萃取結(jié)合，采用UPLC-FLD對(duì)魚(yú)肉樣品中5種FQs殘留進(jìn)行檢測(cè)，所得LOD為0.5～6 μg/kg，回收率為87.9%～111.5%，并將該方法成功應(yīng)用于實(shí)際樣品的檢測(cè)中。刁志祥等[41]建立了一種ASE-UPLC-FLD方法對(duì)豬肉中FF和FFA殘留進(jìn)行檢測(cè)，所得LOD分別為3.3和1.2 μg/kg，LOD分別為4.7和10.6 μg/kg，所有目標(biāo)物均能在5 min內(nèi)被檢測(cè)到，大大提高了檢測(cè)效率。

不同基質(zhì)中FQs與CAPs殘留的液相色譜檢測(cè)方法性能參數(shù)的比較見(jiàn)表2和表3。由于基質(zhì)、前處理方法、液相條件、藥物種類的不同，各方法的LOD、LOQ和回收率存在部分差異。由表2和表3可知，DAD和FLD方法的LOD和LOQ普遍高于UVD方法。DAD檢測(cè)器較傳統(tǒng)UVD檢測(cè)器相比，能夠給出各組分的紫外吸收曲線，在定性方面更加準(zhǔn)確。除CAP需要衍生外，其他藥物都具有熒光性質(zhì)，可以直接進(jìn)行熒光檢測(cè)，所以FLD檢測(cè)器常被應(yīng)用于這兩類獸藥的殘留檢測(cè)當(dāng)中。目前，還沒(méi)有FLD方法同時(shí)檢測(cè)FQs與CAPs殘留的相關(guān)報(bào)道。

表2 不同基質(zhì)中FQs殘留的液相色譜檢測(cè)方法性能參數(shù)的比較Table 2 Comparison of performance parameters of liquid chromatography detection methods for FQs in different matrices

表3 不同基質(zhì)中CAPs殘留的液相色譜檢測(cè)方法性能參數(shù)的比較Table 3 Comparison of performance parameters of liquid chromatography detection methods for CAPs in different matrices

3 液質(zhì)聯(lián)用法

質(zhì)譜分析法是將物質(zhì)離子化，通過(guò)質(zhì)量分析器測(cè)定離子的質(zhì)荷比，最終確定待測(cè)物質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量或分子結(jié)構(gòu)的分析方法。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法結(jié)合了色譜和質(zhì)譜技術(shù)，可對(duì)復(fù)雜基質(zhì)中的各個(gè)成分進(jìn)行定性和定量分析，在獸藥殘留檢測(cè)方面應(yīng)用尤為廣泛。

電噴霧離子源（electrospray ionization，ESI）是LC-MS最常配備的離子源，從色譜柱中分離出來(lái)的樣品會(huì)在離子源中被電離成離子，質(zhì)譜檢測(cè)器在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（multiple reaction monitoring，MRM）下對(duì)特定離子進(jìn)行監(jiān)測(cè)，從而達(dá)到檢測(cè)FQs與CAPs殘留的目的。目前，使用其他離子源的報(bào)道較少。CAP、TAP和FF需在負(fù)離子模式下進(jìn)行全掃描，F(xiàn)FA在負(fù)離子模式下不離子化，需在正離子模式下進(jìn)行全掃描。Alechaga等[55]采用UPLC-MS/MS測(cè)定動(dòng)物源性食品中CAPs殘留，詳細(xì)對(duì)比了不同pH值和色譜柱對(duì)FFA的峰形和保留時(shí)間的影響，最終確定pH為5時(shí)，使用苯基-己基柱能實(shí)現(xiàn)快速且有效的分離，所得CCα為0.1～121 μg/kg，CCβ為0.2～138 μg/kg。

為避免測(cè)定結(jié)果受到基質(zhì)干擾或出現(xiàn)假陽(yáng)性現(xiàn)象，液質(zhì)聯(lián)用方法往往會(huì)通過(guò)改進(jìn)前處理方法、使用同位素內(nèi)標(biāo)來(lái)減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)定量的影響。Xu等[56]采用磁性吸附劑以降低獸藥殘留的基質(zhì)效應(yīng)，并采用穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)來(lái)校正豬肉基質(zhì)干擾導(dǎo)致的FQs目標(biāo)信號(hào)增強(qiáng)，最終使基質(zhì)效應(yīng)降低到88.4%～94.6%，所得回收率為88.6%～118.3%，RSD小于12.0%。Xie等[57]以d5-CAP為內(nèi)標(biāo)物，采用LC-ESIMS/MS對(duì)雞蛋中的CAP、TAP、FF和FFA殘留，測(cè)得LOD為0.04～0.5 μg/kg、LOQ為0.1～1.5 μg/kg。但同位素內(nèi)標(biāo)法也有其局限性，同位素內(nèi)標(biāo)價(jià)格昂貴，質(zhì)譜方法檢測(cè)的藥物越多，實(shí)驗(yàn)所付出的成本也就越高。

高分辨率質(zhì)譜能準(zhǔn)確分析出待測(cè)樣品中各成分的精確質(zhì)量數(shù)，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)化合物的分析和非目標(biāo)化合物的篩查，不需要標(biāo)準(zhǔn)品就能完成對(duì)獸藥殘留的測(cè)定。近年來(lái)，有關(guān)FQs與CAPs殘留的液相色譜高分辨率質(zhì)譜方法報(bào)道較少，Rocha等[58]比較了相同條件下三重四極桿質(zhì)譜（triple quadrupole tandem mass spectrometry，QqQ/MS）和飛行時(shí)間質(zhì)譜（time of flight mass spectrometry，TOF/MS）測(cè)定家禽肌肉和腎臟樣品中FQs殘留的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果表明，在定量方面，TOF/MS與QqQ/MS相比，無(wú)顯著差異；在定性方面，TOF/MS可以實(shí)現(xiàn)非靶向的高通量定性篩查，這是QqQ/MS所不能相比的。Xu等[56]采用三重四極線性離子阱質(zhì)譜（quadrupole-linear ion trap tandem mass spectrometry，Qtrap/MS）檢測(cè)復(fù)雜基質(zhì)中9種FQs殘留，測(cè)得LODs和LOQs分別為0.5和1.5 μg/kg，使用了MRM-IDA-EPI的掃描模式，在MRM進(jìn)行定量的同時(shí)，增強(qiáng)離子掃描（enhanced production scan，EPI）可提供所選定前體離子的二級(jí)質(zhì)譜圖，從而進(jìn)一步確認(rèn)FQs的存在，提高復(fù)雜樣品中多殘留檢測(cè)的定性能力。

不同基質(zhì)中FQs與CAPs殘留的液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法性能參數(shù)的比較見(jiàn)表4和表5。由表4和表5可知，兩類藥物都可以使用甲酸水溶液作為流動(dòng)相的水相，因?yàn)榧姿峥梢杂镁S持樣品在流動(dòng)相中的電離狀態(tài)，提高電離效果，從而增加響應(yīng)值。但部分研究[59?60]表明甲酸對(duì)負(fù)離子模式下的CAP、TAP、FF的信號(hào)響應(yīng)有抑制作用。另外，當(dāng)乙腈用作CAPs殘留檢測(cè)方法的流動(dòng)相時(shí)，F(xiàn)FA在色譜柱上的保留時(shí)間過(guò)短，且不能和雜質(zhì)有效分離，因此常用洗脫能力較弱的甲醇作為有機(jī)相。液質(zhì)聯(lián)用方法的LOD和LOQ普遍比液相色譜法低一個(gè)數(shù)量級(jí)，且能對(duì)更多基質(zhì)和獸藥殘留進(jìn)行同時(shí)測(cè)定，等度洗脫往往不能獲得令人滿意的效果，因此洗脫方式通常選用梯度洗脫。目前，已有動(dòng)物源性食品中FQs與CAPs殘留同時(shí)檢測(cè)的串聯(lián)質(zhì)譜方法報(bào)道[61?63]。

表4 不同基質(zhì)中氟喹諾酮類藥物殘留的液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法性能參數(shù)的比較Table 4 Comparison of performance parameters of LC-MS/MS detection methods for FQs in different matrices

表5 不同基質(zhì)中酰胺醇類殘留的液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法性能參數(shù)的比較Table 5 Comparison of performance parameters of LC-MS/MS detection methods for CAPs in different matrices

4 小結(jié)與展望

樣品前處理是獸藥殘留檢測(cè)至關(guān)重要的環(huán)節(jié)，其萃取效果直接影響到檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度。MSPE、DLLME、ASE等方法作為近年來(lái)FQs與CAPs殘留的熱門(mén)前處理方法，是通過(guò)改變溫度、壓強(qiáng)、接觸表面積等因素，以達(dá)到提高萃取效率，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟，節(jié)約有機(jī)溶劑的目的。此外，這些方法可以相互結(jié)合，充分利用它們的優(yōu)勢(shì)，來(lái)進(jìn)一步提高樣品的回收率。色譜和色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法是獸藥殘留檢測(cè)的主要手段，較其他方法而言，有著強(qiáng)大的定性和定量能力，正向著自動(dòng)化、步驟簡(jiǎn)化和多殘留檢測(cè)的方向發(fā)展。HPLC-FLD和UPLC-FLD是氟喹諾酮類與酰胺醇類最為常見(jiàn)的液相色譜檢測(cè)方法，兩種藥物本身就具有熒光性質(zhì)，且FLD方法的LOD和LOQ低于DAD和UVD，因此FLD的相關(guān)報(bào)道較多。近年來(lái)，色譜質(zhì)譜串聯(lián)方法已發(fā)展較為成熟，能對(duì)復(fù)雜基質(zhì)中獸藥多殘留進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定，其LOD和LOQ通常比色譜法要低一個(gè)數(shù)量級(jí)，但在分析復(fù)雜樣品時(shí)，需要盡量減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)測(cè)量結(jié)果的干擾。

近十年來(lái)，納米材料結(jié)合固相萃取已取得了一些突破性的進(jìn)展，所報(bào)道的前處理方法較之前明顯增加，納米材料能與目標(biāo)物選擇性結(jié)合，進(jìn)而提高回收率，是液相色譜前處理方法的研究熱點(diǎn)。但仍存在著制備較為繁瑣、材料合成成本高、難以商業(yè)化生產(chǎn)的問(wèn)題，如何將該方法與快速檢測(cè)結(jié)合也有待后續(xù)研究。此外，動(dòng)物源性食品中獸藥多殘留及非目標(biāo)化合物的測(cè)定一直是液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的研究熱點(diǎn)，但因?yàn)閯?dòng)物源性食品基質(zhì)較為復(fù)雜、前處理方法各有優(yōu)劣，研發(fā)出標(biāo)準(zhǔn)化的方法較為困難。隨著全球?qū)ΛF藥殘留的管控愈發(fā)嚴(yán)格，將液質(zhì)聯(lián)用法應(yīng)用于獸藥多殘留檢測(cè)已成為了一種趨勢(shì)。雖然目前動(dòng)物源性食品中FQs與CAPs的液質(zhì)聯(lián)用方法報(bào)道較多，但當(dāng)前的研究多集中于三重四極桿質(zhì)譜對(duì)獸藥殘留的檢測(cè)。相信在未來(lái)具有更高質(zhì)量精度和靈敏度的高分辨質(zhì)譜也能被廣泛的運(yùn)用于獸藥殘留檢測(cè)中，同時(shí)建立起完善的數(shù)據(jù)庫(kù)，為檢測(cè)結(jié)果的確定提供數(shù)據(jù)支撐，這有利于我國(guó)提高獸藥殘留檢測(cè)效率，制定科學(xué)合理的殘留標(biāo)準(zhǔn)，打破國(guó)際貿(mào)易壁壘，保證進(jìn)出口食品安全。