【摘要】" 目的" 探討外周血炎癥細(xì)胞因子與腦動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄（cerebral atherosclerotic stenosis，CAS）的相關(guān)性。方法" 以2021年6月- 2023年3月醫(yī)院收治的急性腦梗死患者和腦小血管病患者為調(diào)查對(duì)象，根據(jù)頭顱MRA/CTA和DSA檢查結(jié)果將患者分為CAS組（病例組）和血管正常組（對(duì)照組）。采用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)血清細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè)，比較各細(xì)胞因子在兩組間分布情況。采用多因素Logistic回歸分析分析各因素與CAS的關(guān)系，并采用ROC曲線(xiàn)分析各因子水平對(duì)CAS的診斷效果。結(jié)果" 本研究共納入95名患者，單因素分析顯示，卒中史、白細(xì)胞介素-2（IL-2）、腫瘤壞死因子-α （TNF-α）、腫瘤壞死因子-γ（TNF-γ）與CAS有關(guān)（Plt;0.05）。多因素Logistic回歸分析結(jié)果表明IL-2（OR=1.083；95％CI： 1.004～1.167，P=0.038）、TNF-α（OR=1.076；95％CI： 1.009～1.147，P=0.025）與腦動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄有關(guān)。ROC曲線(xiàn)分析顯示，IL-2在13.08時(shí)（AUC=0.726，95%CI： 0.623～0.828， Plt;0.001）、TNF-α在12.78時(shí)（AUC=0.683，95%CI=0.577～0.789， P=0.002）有一定的診斷效能，但診斷的靈敏度較低（lt;50%），漏診率較高。結(jié)論" 血清中IL-2、TNF-α水平與腦動(dòng)脈粥樣硬化性血管狹窄有關(guān)，當(dāng)血清中IL-2、TNF-α水平升高，發(fā)生腦動(dòng)脈粥樣硬化性血管狹窄的危險(xiǎn)性增大。

【關(guān)鍵詞】" 腦動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄；腦梗死；炎癥細(xì)胞因子；腦小血管病

中圖分類(lèi)號(hào)" R743.1" " 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼" A" " 文章編號(hào)" 1671-0223（2023）22--04

Correlation analysis of inflammatory cytokines and cerebral arteriosclerosis stenosis Huang Shuangjiao， Ma Xiaoming， Sheng Shiying， Yuan Jie， Zhang Jiang， Liu Meng， Yue Chunxian. The First People's Hospital of Changzhou， Changzhou 213003， China

【Abstract】" Objective To investigate the relationship between inflammatory cytokines and cerebral atherosclerotic stenosis （CAS）. Methods" Patients with cerebral small vessel disease or acute infarction were collected from 2021.6 to 2023.3. Patients were divided into CAS group and normal vessel group according to MRA/CTA or DSA. Serum cytokines were measured by ELISA and the distribution of cytokines was compared between the two groups. Logistic regression analysis and ROC curve were used to judge the predictive value. Subgroup analysis was performed to compare the distribution of cytokines in different vascular conditions according to the presence of acute cerebral infarction. Multivariate logistic regression analysis was used to analyze the relationship between each factor and CAS， and ROC curve was used to analyze the diagnostic effect of each factor level on CAS. Results" A total of 95 patients were included in this study， and multivariate analysis showed that stroke history， interleukin-2 （IL-2）， tumor necrosis factor-α （TNF-α）， tumor necrosis factor-γ （TNF-γ） were associated with CAS （Plt;0.05）. The results of multivariate logistic regression analysis showed that IL-2 （OR=1.083; 95%CI： 1.004～1.167， P=0.038） and TNF-α （OR=1.076; 95%CI： 1.009～1.147， P=0.025） were associated with cerebral atherosclerotic stenosis. ROC curve analysis showed that IL-2 had certain diagnostic efficacy at 13.08 （AUC=0.726， 95%CI： 0.623～0.828， Plt;0.001） and TNF-α at 12.78 （AUC=0.683， 95%CI=0.577～0.789， P=0.002）， but the diagnostic sensitivity was low （lt;50%）， and the missed diagnosis rate was high. Conclusion" The levels of IL-2 and TNF-α in serum are related to cerebral atherosclerotic vascular stenosis， and when the levels of IL-2 and TNF-α in serum increase， the risk of cerebral atherosclerotic vascular stenosis increases.

【Key words】" Cerebral atherosclerotic stenosis; Inflammatory cytokines; Cerebral infarction; Cerebral small vessel disease

在不良生活方式和不斷嚴(yán)重的人口老齡化問(wèn)題影響下，腦卒中已成為越來(lái)越常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，而這其中 65%～80%的患者表現(xiàn)為缺血性卒中[1]。缺血性腦卒中高發(fā)病率和高致殘率的特點(diǎn)往往給患者的身心帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。腦動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄（cerebral atherosclerotic stenosis，CAS）是缺血性腦卒中的主要危險(xiǎn)因素之一，與其相關(guān)的缺血性腦卒中患者往往預(yù)后較差且卒中復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)較高[2-3]。隨著免疫及分子生物學(xué)研究進(jìn)展，外周血中炎癥細(xì)胞因子與腦動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系被逐步揭示[4-6]，并且發(fā)現(xiàn)炎癥細(xì)胞因子與急性腦梗死后的缺血級(jí)聯(lián)反應(yīng)、炎癥反應(yīng)等密切相關(guān)[7]。因此，炎癥細(xì)胞因子與腦動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系是目前研究的熱點(diǎn)。本研究針對(duì)臨床患者開(kāi)展調(diào)查研究，探討外周血炎癥細(xì)胞因子與CAS的相關(guān)性，以期為臨床診治提供參考。

1" 對(duì)象與方法

1.1" 調(diào)查對(duì)象

收集2021年6月- 2023年3月在常州市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的急性腦梗死患者和腦小血管病患者為調(diào)查對(duì)象。急性腦梗死診斷符合《中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南2018》標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)頭顱CT/MRI影像檢查確診，發(fā)病到入院時(shí)間lt;7天。腦小血管病患者診斷符合《中國(guó)腦小血管病診治專(zhuān)家共識(shí)2021》標(biāo)準(zhǔn)。所有參與者入院后行頭顱MRA或CTA檢查，提示血管狹窄則進(jìn)一步行全腦血管造影（DSA）驗(yàn)證。根據(jù)有無(wú)血管狹窄將患者分為CAS組（病例組）和血管正常組（對(duì)照組）。CAS定義為頸內(nèi)動(dòng)脈或椎動(dòng)脈的顱內(nèi)段、M1大腦中動(dòng)脈和基底動(dòng)脈的50%～99%狹窄或閉塞，排除標(biāo)準(zhǔn)：①神經(jīng)影像學(xué)數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)不完整；②自身免疫性疾病；③近期局部和系統(tǒng)性感染疾病；④動(dòng)脈夾層、動(dòng)脈炎、煙霧病和肌肉纖維發(fā)育不良引起的顱內(nèi)外動(dòng)脈狹窄；⑤有惡性腫瘤史、嚴(yán)重的肝或腎功能障礙史或全身性疾病史。本研究方案經(jīng)常州市第一人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，倫理批號(hào)（2023）科第080號(hào)。所有參與者都簽署知情同意書(shū)。

1.2" 資料收集

通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查和查閱患者病歷資料，收集患者的基線(xiàn)資料，包括患者的性別、年齡。相關(guān)實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)包括血小板計(jì)數(shù)、低密度膽固醇、高密度膽固醇、甘油三酯、肌酐、同型半胱氨酸等。既往病史包括高血壓病、糖尿病、既往卒中病史等。所有患者在入院后次日抽取外周靜脈血2ml，采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行包括白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、 白細(xì)胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子在內(nèi)的多種血清細(xì)胞因子水平檢測(cè)。

1.3" 數(shù)據(jù)處理方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，對(duì)符合正態(tài)分布的連續(xù)型變量采用“±s”表示，組間均數(shù)比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；對(duì)偏態(tài)分布的連續(xù)型變量采用“中位數(shù)（四分位數(shù)）”[M（Q1～Q3）]表示，組間中位數(shù)比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料組間率比較采用卡方檢驗(yàn)或Fisher精確概率法。將單因素分析中Plt;0.05的因素為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，使用ROC曲線(xiàn)分析細(xì)胞因子預(yù)測(cè)CAS的診斷效能。Plt;0.05（雙側(cè)）為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2" 結(jié)果

2.1" CAS的單因素分析

病例組患者中既往卒中病史更常見(jiàn)，外周血IL-2、TNF-α、TNF-γ水平高于對(duì)照組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）；而年齡、性別、外周血IL-4、IL-6、IL-10、IL-17水平等組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），見(jiàn)表1。

2.2" CAS的多因素Logistic回歸分析

將單因素分析中Plt;0.05的因素納為自變量，以是否CAS為因變量（是=1，否=0），進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果表明IL-2（OR=1.083）、 TNF-α（OR=1.076）為CAS的影響因素（Plt;0.05），見(jiàn)表2。

2.3" IL-2、 TNF-α診斷CAS的ROC曲線(xiàn)分析

ROC曲線(xiàn)分析結(jié)果顯示，IL-2（AUC=0.726，95%CI=0.623～0.828）與TNF-α（AUC=0.683，95%CI=0.577～0.789）水平對(duì)CAS均具有一定診斷效能。當(dāng)IL-2截?cái)嘀禐?3.08時(shí)，診斷的敏感度=50%，特異度=55%；而當(dāng)TNF-α截?cái)嘀?2.78時(shí)，診斷的敏感度=48%，特異度=86%。顯然效果并不理想，漏診率較高。

3" 討論

本研究結(jié)果顯示動(dòng)脈粥樣硬化性血管狹窄組患者血清IL-2、TNF-α水平較血管正常組患者明顯升高。同時(shí)，本研究也觀(guān)察到在腦小血管病患者中，血清TNF-γ水平在血管狹窄組患者中顯著高于非血管狹窄組。我們認(rèn)為包括IL-2、TNF-α、TNF-γ在內(nèi)的細(xì)胞因子的水平可在一定程度上反映腦動(dòng)脈粥樣硬化型血管狹窄。細(xì)胞因子血清水平可能作為動(dòng)脈粥樣硬化性血管狹窄的敏感預(yù)測(cè)指標(biāo)。

動(dòng)脈粥樣硬化是導(dǎo)致缺血性腦卒中的重要病因之一。既往研究認(rèn)為動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病[8]。研究發(fā)現(xiàn)除巨噬細(xì)胞外，免疫細(xì)胞，特別是T淋巴細(xì)胞也作為重要介質(zhì)參與動(dòng)脈粥樣硬化的形成及發(fā)展[9]。一方面，T淋巴細(xì)胞早在單核細(xì)胞斑塊中出現(xiàn)時(shí)就存在，另一方面，T輔助細(xì)胞Th-1分泌包括IL-2、TNF-α在內(nèi)的多種促炎細(xì)胞因子，通過(guò)進(jìn)一步激活巨噬細(xì)胞、動(dòng)脈中膜平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞從而加快動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程[10]。炎癥導(dǎo)致動(dòng)脈斑塊不穩(wěn)定并且易于破裂，進(jìn)一步導(dǎo)致血栓形成和腦梗死的發(fā)生。

細(xì)胞因子是一類(lèi)小蛋白調(diào)節(jié)物質(zhì)，主要包括白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子、趨化性細(xì)胞因子等，可以參與細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo)及免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)。IL-2大部分由活化的T細(xì)胞釋放，可刺激包括如自然殺傷細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞的多種T細(xì)胞亞群生長(zhǎng)，產(chǎn)生腫瘤壞死因子、集落刺激因子、干擾素等，通過(guò)細(xì)胞和體液免疫導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生過(guò)度炎癥反應(yīng)，引起組織損傷及宿主防御反應(yīng)[11-12]。本研究顯示動(dòng)脈粥樣硬化型血管狹窄組患者血清IL-2水平較非血管狹窄組患者明顯升高，說(shuō)明IL-2越高，炎癥反應(yīng)越重，提示動(dòng)脈粥樣硬化狹窄患者外周血中存在促T細(xì)胞增殖的條件。

多項(xiàng)研究表明斑塊及血漿中TNF-α的水平與病情進(jìn)展及不良心血管事件的發(fā)生具有相關(guān)性[13-14]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在TNF-α基因敲除的小鼠中，小鼠患動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生率顯著降低[15]。另外，對(duì)于患有慢性炎癥性疾?。ㄈ珙?lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎）的患者，抗TNF-α治療可顯著減少動(dòng)脈粥樣硬化事件的發(fā)生[16]。本研究結(jié)果與既往研究結(jié)果具有一致性，進(jìn)一步證實(shí)TNF-α在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展中具有關(guān)鍵作用。其主要機(jī)制可能為T(mén)NF-α一方面使內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加、脂質(zhì)穿透血管壁能力加強(qiáng)，導(dǎo)致斑塊形成；同時(shí)TNF-α通過(guò)增加黏附分子、清道夫受體和趨化因子的表達(dá)促進(jìn)斑塊進(jìn)展[17]。TNF-γ在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中高度表達(dá)，在給予外源性細(xì)胞因子TNF-γ后動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)行性加重，在對(duì)TNF-γ或其受體行基因敲除后，可有效抑制炎癥反應(yīng)并且斑塊中膠原蛋白的含量明顯升高[18-20]。TNF-γ的高表達(dá)可能與巨噬細(xì)胞的激活進(jìn)而導(dǎo)致氧化去氧血紅蛋白的積累及泡沫細(xì)胞的形成相關(guān)[21]。本研究在一定程度上同樣提示了TNF-γ與腦動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄的相關(guān)性。

除IL-2、TNF-α、TNF-γ外，IL-6在斑塊發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，IL-6在冠心病患者中顯著高于普通患者，且其表達(dá)含量與冠心病的嚴(yán)重程度具有明顯相關(guān)性[22-23]。然而，本研究并未發(fā)現(xiàn)IL-6水平與CAS有關(guān)，這可能受到樣本量不足的影響，仍需后續(xù)研究進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，CAS與血液中較高的IL-2、TNF-α水平密切相關(guān)，血清中IL-2、TNF-α水平升高，CAS的危險(xiǎn)性增大，進(jìn)一步提示調(diào)控炎性細(xì)胞因子的神經(jīng)保護(hù)療法可能是一種阻止腦動(dòng)脈粥樣硬化斑塊進(jìn)展加重的有效方法。本研究也存在一定的局限性，例如樣本量較小，樣本的代表性不足，另外，本研究?jī)H納入在入組后次日測(cè)得的細(xì)胞因子濃度，可能會(huì)導(dǎo)致臨床結(jié)果評(píng)估方面不夠全面。

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[2023-08-10收稿]