李 勇， 趙慶楓， 王澤仁， 朱平軍， 胡福利

（1.河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，河南鄭州 451450；2.周口職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南周口 466000；3.周口市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南周口 466000；4.河南中微生物科技研究院（有限合伙），河南鄭州 450000）

巨菌草屬多年生禾本科直立叢生型植物，具有較強(qiáng)的分蘗能力和較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值 （杜森有，2018），其鮮草粗蛋白質(zhì)含量可達(dá)15%以上（黃國勇，2016），是牛、羊、馬、鹿等動(dòng)物的絕佳草料。 同時(shí)，因其具有成本低、產(chǎn)量高、品質(zhì)優(yōu)、青綠多汁等特點(diǎn)， 可通過青貯發(fā)酵的方法緩解飼草飼料季節(jié)性不平衡的問題， 是一種十分具有開發(fā)潛力的飼料資源。 研究表明，巨菌草經(jīng)過發(fā)酵處理，既可消除其中的抗?fàn)I養(yǎng)因子， 降解其中的植物性碳水化合物及大分子蛋白質(zhì)物質(zhì)， 產(chǎn)生大量的肽類和菌體蛋白等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（王亞芳等，2020），更易被綿羊消化吸收利用；又可促進(jìn)乳酸發(fā)酵，產(chǎn)生大量的益生菌和乳酸，降低飼料pH，提高飼料的適口性，改善瘤胃內(nèi)環(huán)境（陳曉斌等，2013）。然而較少有關(guān)于通過單一或復(fù)合益生菌（植物乳桿菌、乳雙歧桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌）發(fā)酵巨菌草飼料及其應(yīng)用研究。因此， 本試驗(yàn)旨在通過研究添加不同比例復(fù)合益生菌發(fā)酵的巨菌草飼料對(duì)綿羊瘤胃發(fā)酵和養(yǎng)分表觀消化率的影響，為其在動(dòng)物生產(chǎn)中合理開發(fā)、科學(xué)應(yīng)用提供理論依據(jù)和參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)動(dòng)物 選擇24 只[平均體重（31.55±2.00）kg， 由周口市淮陽致富養(yǎng)殖基地提供]3 ～4 月齡、體況健康、體重接近、遺傳背景相同的育肥綿公羊作為試驗(yàn)動(dòng)物，隨機(jī)分配到A、B、C 和D 四個(gè)處理組，即依次為對(duì)照組（基礎(chǔ)飼糧）和試驗(yàn)組（基礎(chǔ)飼糧+10%、20%和30%復(fù)合益生菌發(fā)酵的巨菌草飼料），每組6 只。 試驗(yàn)設(shè)預(yù)試期7 d，正試期90 d。單欄飼養(yǎng)，專人飼喂，自由飲水。每天分8：00 和14：00 兩次進(jìn)行，喂量以食后料槽略有剩余為限。

試驗(yàn)期間舍內(nèi)溫度保持在25 ～28 ℃， 相對(duì)濕度保持在55% ～70%。 每天分7：00 和13：00兩次清潔和消毒，始終保持圈舍通風(fēng)、干燥。

1.2 飼糧配制與提供 基礎(chǔ)飼糧按《中華人民共和國肥育羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004）》配制（表1）。復(fù)合益生菌發(fā)酵的巨菌草飼料（含植物乳桿菌、乳雙歧桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌各為108CFU/kg；CP 6.27%，EE 2.42%，NDF 68.28%，ADF 44.20%，WSC 2.24%，Ca 0.36%，P 0.20%），由周口榮鑫草業(yè)有限公司提供。

1.3 樣品采集與保存

1.3.1 飼料及糞樣 正試期第81 ～86 天為消化試驗(yàn)期，按全收糞法（楊詩興，1982）采樣和保存：于第81 天早飼前，清理干凈試羊糞便和剩料。 以后每天記錄投料量和剩余料量， 并采集各組飼料樣（約200 g）和剩料樣，分別裝入塑料袋中混合均勻、風(fēng)干；每天收集一次全部鮮糞（借用塑料布）并稱重，每次按每只試羊糞樣的10%取樣，放入己知重量的鋁盒中，在65 ℃烘箱內(nèi)烘干恒重；將前述飼料、剩料和糞樣粉碎并通過40 目篩，常規(guī)保存，待測(cè)。 另取10% 的糞樣，置于廣口瓶中，加入一定量10% H2SO4溶液 （以剛好浸沒糞樣為原則），然后放入冰箱（4 ℃）保存，以備測(cè)糞氮用。

1.3.2 瘤胃液 于正試期第90 天，通過頸靜脈放血方式將試羊致死，剖開瘤胃，用四層紗布過濾瘤胃內(nèi)容物，取2 份瘤胃液分裝于兩個(gè)50 mL 離心管中，冷凍（-20 ℃）保存；分別用于測(cè)定揮發(fā)性脂肪酸（VFA）和氨氮（NH3-N）含量。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法 飼料、剩料及糞中干物質(zhì)（DM），粗蛋白質(zhì)（CP），粗脂肪（EE），中性洗滌纖維（NDF）、酸性洗滌纖維（ADF）、鈣（Ca）、磷（P）含量測(cè)定按楊勝（1993）方法進(jìn)行；瘤胃液pH 測(cè)定需先將瘤胃內(nèi)容物攪拌均勻后，立即用PB-10 型酸度計(jì)（賽多利斯，哥根廷，德國）測(cè)定；瘤胃液揮發(fā)性脂肪酸及氨氮含量測(cè)定分別按Vanzan（1994）法和馮宗慈（2010）方法進(jìn)行。

養(yǎng)分表觀消化率/%=（食入飼料中養(yǎng)分量-糞中養(yǎng)分量）/食入飼料中養(yǎng)分量×100%。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0 軟件，按照單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。P＜0.05 為差異顯著標(biāo)準(zhǔn)，0.05≤P＜0.10 為有趨勢(shì)。

2 結(jié)果分析

2.1 瘤胃發(fā)酵 由表2 可知，D 組試羊瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸、乙酸、戊酸含量均顯著高于A 組，分別提高了4.37%、4.70%、17.30%；pH 和氨氮含量顯著低于A 組，分別降低了3.45%和11.14%（P＜0.05）；且D 組和C 組試羊瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸含量分別顯著高于B 組和A 組， 分別提高了3.05%、4.37%和1.93%、3.23%（P＜0.05）。

表2 不同比例巨菌草發(fā)酵飼料對(duì)綿羊瘤胃液發(fā)酵的影響

2.2 養(yǎng)分表觀消化率 由表3 可知，D 組干物質(zhì)和粗蛋白質(zhì)表觀消化率均分別顯著高于A 和B 組，分別提高了4.15%、3.27%和3.35%、2.91%；D 組中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維表觀消化率均顯著高于A 組，分別提高了4.54%和5.23%（P＜0.05）。

表3 不同比例巨菌草發(fā)酵飼料對(duì)養(yǎng)分表觀消化率的影響 %

3 討論

瘤胃pH 是反映反芻動(dòng)物瘤胃發(fā)酵狀況的一項(xiàng)最直觀指標(biāo)， 其對(duì)維持瘤胃內(nèi)環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。 影響瘤胃pH 的因素有很多，主要包括飼糧結(jié)構(gòu)、唾液分泌量、采食速度、瘤胃內(nèi)VFA 和其他有機(jī)酸生成、吸收和排出速度等， 但促使瘤胃pH 波動(dòng)的根本原因是飼糧結(jié)構(gòu)與營(yíng)養(yǎng)水平 （王龍壇等，2009）。 瘤胃pH 一般在5.0 ～7.5 呈規(guī)律性的波動(dòng)（韓正康，1998；Murphy，1987）。瘤胃VFA 是碳水化合物的主要發(fā)酵產(chǎn)物，主要由乙酸、丙酸和丁酸等組成。它們是反芻動(dòng)物的主要能量來源。 當(dāng)反芻動(dòng)物采食纖維含量高的飼糧時(shí)，其瘤胃乙酸比例會(huì)增加；當(dāng)反芻動(dòng)物采食易發(fā)酵的碳水化合物時(shí)，微生物活動(dòng)增加，進(jìn)而可提高瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸（TVFA）含量，降低瘤胃pH（張建勛等，2013）。 本試驗(yàn)中，在基礎(chǔ)日糧中添加復(fù)合菌液發(fā)酵的巨菌草飼料， 顯著提高了綿羊瘤胃TVFA 和乙酸含量， 顯著降低了瘤胃pH 和NH3-N 含量，可能原因是巨菌草發(fā)酵飼料中含有較多的植物乳桿菌、 乳雙歧桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌等益生菌，能高效利用碳源產(chǎn)生乙酸所致（程光民等，2019a）。程光民（2019b）也發(fā)現(xiàn)，飼喂在全株玉米青貯中單一添加植物乳桿菌的全混合日糧時(shí)，顯著提高了試驗(yàn)羊瘤胃乙酸和TVFA 含量。另外，本試驗(yàn)中， 試驗(yàn)組日糧顯著提高了試羊瘤胃戊酸含量，可能與巨菌草通過植物乳桿菌、乳雙歧桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌等有益菌發(fā)酵，產(chǎn)生更多乳酸等，進(jìn)而分解形成更多戊酸有關(guān) （Nasrollahi 等，2017），具體原因有待進(jìn)一步探討。

NH3-N 是日糧中的蛋白氮、非蛋白氮及內(nèi)源氮在瘤胃的降解產(chǎn)物， 也是瘤胃微生物合成菌體蛋白的必要前體物質(zhì)； 其濃度不僅可在一定程度上反映瘤胃微生物分解含氮物質(zhì)產(chǎn)生NH3的速度以及其對(duì)NH3的攝取利用情況，而且可反映在特定飼糧組成下蛋白質(zhì)降解與合成之間的平衡關(guān)系。因此，維持最佳的NH3-N 濃度（6.3 ～27.5 mg/100 mL）對(duì)促進(jìn)瘤胃微生物生長(zhǎng)和繁殖是十分有必要的（Hristov，2016）。本試驗(yàn)中，雖然各處理組均維持了瘤胃微生物生長(zhǎng)和繁殖的最佳NH3-N 濃度，但試驗(yàn)組試羊瘤胃NH3-N 濃度均低于對(duì)照組，尤其是30%巨菌草發(fā)酵飼料組顯著低于對(duì)照組，可能的原因是飼喂復(fù)合菌液發(fā)酵的巨菌草飼料，促進(jìn)了瘤胃發(fā)酵， 加快了NH3-N 利用和微生物蛋白質(zhì)的合成，與程光民（2019a）的試驗(yàn)結(jié)果類似。

養(yǎng)分表觀消化率可直接反映機(jī)體對(duì)日糧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化情況。研究表明，在肉羊基礎(chǔ)飼糧中添加5000 mg/kg 和1000 mg/kg 的益生菌制劑均可顯著提高養(yǎng)分表觀消化率（楊華等，2015）；飼喂在全株玉米青貯中混合添加0.1% 植物乳桿菌和0.5% 尿素的全混合日糧，其試羊沉積氮、氮消化率、氮利用率及NDF 表觀消化率顯著提高（程光民等，2019b）。 本研究中， 試驗(yàn)組試羊有較高的DM、CP、NDF 和ADF 表觀消化率，尤其是30%巨菌草發(fā)酵飼料組DM、CP、NDF 和ADF 表觀消化率顯著高于對(duì)照組或10%巨菌草發(fā)酵飼料組。 與含乳酸菌、 芽孢桿菌等的微生物發(fā)酵飼料可顯著提高日糧CP、NDF、ADF 消化率（Mugabe 等，2019；彭忠利等，2013）的結(jié)果一致。 表明在基礎(chǔ)日糧中添加復(fù)合益生菌發(fā)酵的巨菌草飼料，能提高DM、CP、NDF、ADF 等養(yǎng)分表觀消化率。 可能原因是巨菌草經(jīng)植物乳桿菌、 乳雙歧桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌等復(fù)合益生菌發(fā)酵， 產(chǎn)生了較多的淀粉酶、 蛋白酶、脂肪酶等各種有效成分，降解植物性碳水化合物和飼料中的復(fù)雜物質(zhì)， 使其更好地被腸道吸收利用，提高了飼料利用率（魏炳棟，2016）。同時(shí)，植物乳桿菌有助于維持瘤胃和消化道微生物菌群動(dòng)態(tài)平衡，直接促進(jìn)腸道屏障完整性，減少炎癥，提高對(duì)病原菌的競(jìng)爭(zhēng)性排斥，從而增強(qiáng)免疫功能，提高養(yǎng)分消化率（穆曉峰等，2007）。

4 結(jié)論

在基礎(chǔ)日糧中添加復(fù)合益生菌發(fā)酵的巨菌草飼料，可改善綿羊瘤胃內(nèi)環(huán)境，提高養(yǎng)分表觀消化率；建議添加比例以20% ～30%為宜。