［摘要］目的探討上皮性卵巢癌（EOC）組織長鏈非編碼RNA（lncRNA）鋅指蛋白反義鏈1（ZFAS1）、Notch1的表達水平對患者預后的評估價值。方法選取本院2018年1月～2020年1月收治的96例EOC患者為EOC組，將同期卵巢良性腫瘤患者96例作為對照組。使用實時熒光定量PCR法測定所有研究者卵巢組織中ZFAS1、Notch1的表達水平；ROC曲線評估ZFAS1、Notch1診斷EOC的價值，并分析ZFAS1、Notch1表達與EOC患者臨床病理特征的關系；使用Kaplan-Meier法繪制EOC患者生存曲線；使用多因素Cox回歸分析EOC患者預后的影響因素。結果EOC組組織中ZFAS1、Notch1表達水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；ZFAS1單獨診斷EOC曲線下面積為0.861（95%CI：0.803～0.919），截斷值為1.59，靈敏度為77.1%，特異度為69.8%；Notch1單獨診斷EOC的曲線下面積為0.913（95%CI：0.870～0.955），截斷值為1.54，靈敏度為79.2%，特異度為76.1%；ZFAS1表達與EOC患者的FIGO分期、浸潤深度、淋巴結轉移、病理分級有關（P＜0.05）；Notch1表達與EOC患者的FIGO分期、淋巴結轉移、病理分級有關（P＜0.05）；ZFAS1高表達患者（ZFAS1≥1.59）的3年累積生存率低于低表達患者（ZFAS1＜1.59），Notch1高表達患者（Notch1≥1.54）的3年累積生存率低于低表達患者（Notch1＜1.54），差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；多因素Cox回歸模型分析表明，F(xiàn)IGO分期、淋巴結轉移、ZFAS1、Notch1是影響EOC患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。結論EOC患者癌組織中ZFAS1、Notch1表達水平升高，且ZFAS1、Notch1高表達的EOC患者生存期短，兩者有望成為預測EOC預后的有效生物學標志物。

［關鍵詞］上皮性卵巢癌；長鏈非編碼RNA；鋅指蛋白反義鏈1；Notch1；預后

doi：10.3969/j.issn.1674-7593.2023.04.013

ThePrognosticValueofZFAS1andNotch1ExpressioninEpithelialOvarianCancer

LiXiaokun1，ZhangXingxing1，F(xiàn)engJie1，DengZhenquan2，JiWenhua3，ShangSushuang1，XieXiuming4

1theFirstGynecologyDepartment，HandanFirstHospital，Handan056002;2theSecondOncologyDepartment，HandanFirstHospital，Handan056002;3theObstetricsDepartment，HandanFirstHospital，Handan056002;4theOperationDepartment，HandanFirstHospital，Handan056002

［Abstract］ObjectiveToassesstheprognosticsignificanceoftheexpressionlevelsoftwospecificlongnon-codingRNA（lncRNA），namelyzincfingerproteinantisensechain1（ZFAS1）andNotch1，inepithelialovariancarcinoma（EOC）tissue.MethodsAtotalof96patientsdiagnosedwithEOCandadmittedtoHandanFirstHospitalbetweenJanuary2018andJanuary2020wereincludedintheEOCgroup.Inparallel，another96patientswithbenignovariantumorsduringthesameperiodwereselectedasthecontrolgroup.TheexpressionlevelsofZFAS1andNotch1，werequantifiedusingreal-timefluorescencequantitativepolymerasechainreaction（qRT-PCR）.Receiveroperatingcharacteristic（ROC）curveanalysiswasperformedtoassessthediagnosticvalueofZFAS1andNotch1inEOC.Furthermore，therelationshipbetweentheexpressionofZFAS1andNotch1andvariousclinicopathologicfeatureswasexamined.SurvivalanalysiswasconductedusingtheKaplan-Meiermethod，andmultivariateCoxregressionwasemployedtoanalyzeprognosticfactors.ResultsTheexpressionlevelsofZFAS1andNotch1werefoundtobesignificantlyhigherintheEOCgroupcomparedtothecontrolgroup（Plt;0.05）.ZFAS1alonedemonstratedanareaunderthecurve（AUC）of0.861（95%CI：0.803-0.919）fordiagnosingEOC，withacut-offvalueof1.59，sensitivityof77.1%，andspecificityof69.8%.Similarly，Notch1aloneshowedanAUCof0.913（95%CI：0.870-0.955）fordiagnosingEOC，withacut-offvalueof1.54，sensitivityof79.2%，andspecificityof76.1%.TheexpressionofZFAS1wassignificantlycorrelatedwithFIGOstage，invasiondepth，lymphnodemetastasis，andpathologicalgrade（Plt;0.05），whileNotch1expressionwassignificantlyassociatedwithFIGOstage，lymphnodemetastasis，andpathologicalgrade（Plt;0.05）.PatientswithhighexpressionofZFAS1（ZFAS1≥1.59）andNotch1（Notch1≥1.54）hadsignificantlylower3-yearcumulativesurvivalratescomparedtothosewithlowexpression（Plt;0.05）.Furthermore，multivariateCoxregressionanalysisrevealedthatFIGOstage，lymphnodemetastasis，ZFAS1，andNotch1wereindependentriskfactorsfortheprognosisofEOCpatients（Plt;0.05）.ConclusionTheexpressionlevelsofZFAS1andNotch1werefoundtobesignificantlyupregulatedinthecanceroustissueofEOCpatients，andtheirincreasedexpressionwasassociatedwithashortersurvivalperiodinEOCpatients.ThesefindingssuggestthatZFAS1andNotch1havepotentialasbiomarkersforpredictingtheprognosisofEOC.

［Keywords］Epithelialovariancancer;Longnon-codingRNA;Zincfingerproteinantisensechain1;Notch1;Prognosis

長鏈非編碼RNA（Longnon-codingRNA，lncRNA）是一類長度大于200個核苷酸的非編碼RNA，雖然它沒有潛在的蛋白質翻譯能力，但在多種生物學過程中發(fā)揮作用，如細胞分化、表觀遺傳調(diào)節(jié)、細胞周期控制、選擇性剪接等［1-2］。鋅指蛋白反義鏈1（Zincfingerproteinantisensechain1，ZFAS1）作為lncRNA家族成員之一，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。Notch1是一種跨膜受體，參與調(diào)節(jié)細胞分化、生長、胚胎發(fā)生、血管生成和轉移等過程［3］。本研究旨在探討EOC癌組織中ZFAS1及Notch1的表達情況，分析兩者預測EOC患者預后的價值，為EOC預后及治療提供依據(jù)。

1對象與方法

1.1研究對象

選取2018年1月～2020年1月在我院接受手術治療的96例EOC患者為研究對象（EOC組），年齡50～82歲，平均年齡（56.62±4.27）歲。收集整理EOC患者年齡、絕經(jīng)、病理類型、國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（Internationalfederationofgynecologyandobstetrics，F(xiàn)IGO）分期、浸潤深度、腫瘤大小、淋巴結轉移、病理分級等臨床資料。納入標準：①符合EOC診斷標準［4］，且術后病理證實為EOC；②首發(fā)病患者；③未進行過子宮手術或放化療者；④臨床及隨訪病理資料完整。排除標準：①合并其他惡性腫瘤者；②免疫功能嚴重缺陷者；③肝、腎功能失代償者；④患有嚴重的心血管疾病者。將同期卵巢良性腫瘤患者96例作為對照組，年齡50～81歲，平均（55.78±4.33）歲。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準及患者或其家屬同意。

1.2方法

1.2.1ZFAS1、Notch1表達水平的測定使用實時熒光定量PCR法測定組織中ZFAS1、Notch1表達水平。采用TRIzol法提取術中收集的癌組織中的總RNA（Trizol試劑購于美國Invitrogen公司），使用PrimeScriptRTMasterMix合成模板cDNA，然后采用熒光定量PCR儀（美國ABI公司）進行測定，ZFAS1上游引物5′-CAACTACTAGAGCGCCTCGG-3′，下游引物5′-CTTCCCACGGTCAGAAACGA-3′；Notch1上游引物5′-GATGTTGGCAAGGTAGTCGAT-3′，下游引物5′-GCTCCCTGTGTTCTCATTGAT-3′；U6上游引物5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，下游引物5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。測定完成后使用2-ΔΔCt法計算ZFAS1、Notch1相對表達水平，此步驟重復3次，盡量減少實驗誤差。

1.2.2隨訪通過電話或門診等方式對96例EOC患者進行3年隨訪，術后1年，每月1次；術后2年，每2個月1次；術后第3年，每3個月1次。隨訪截止日期為2023年1月或EOC患者死亡時間，記錄患者生存時間和臨床病理特征。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS25.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，正態(tài)分布計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用例表示，行χ2檢驗；ROC曲線評價ZFAS1、Notch1表達對EOC的診斷價值；繪制Kaplan-Meier生存曲線，組間比較采用log-rank檢驗；影響EOC患者預后影響因素采用Cox回歸模型；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1兩組ZFAS1、Notch1表達水平比較

EOC組組織中ZFAS1、Notch1表達水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

2.2ZFAS1、Notch1表達水平對EOC的診斷效能

ROC曲線顯示，ZFAS1單獨診斷EOC的曲線下面積為0.861（95%CI：0.803～0.919），截斷值為1.59，靈敏度為77.1%，特異度為69.8%；Notch1單獨診斷EOC的曲線下面積為0.913（95%CI：0.870～0.955），截斷值為1.54，靈敏度為79.2%，特異度為76.1%，見圖1。

2.3ZFAS1、Notch1表達與EOC患者臨床病理特征關系

以ZFAS1=1.59及Notch1=1.54為臨界值進行分組，ZFAS1≥1.59者為高表達組（74例），＜1.59者為低表達組（22例）；Notch1≥1.54者為高表達組（76例），＜1.54者為低表達組（20例）。ZFAS1表達與EOC患者FIGO分期、浸潤深度、淋巴結轉移、病理分級有關（P＜0.05）；Notch1表達與EOC患者FIGO分期、淋巴結轉移、病理分級有關（P＜0.05），見表2。

2.4不同ZFAS1、Notch1表達水平與EOC患者預后的關系

在隨訪結束后，96例EOC患者中，存活64例，死亡32例，生存率為66.67%（64/96）。ZFAS1高表達組中EOC患者的3年累積生存率（59.46%）低于低表達組（90.91%），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=6.997，P＜0.05）；Notch1高表達組患者的3年累積生存率（60.53%）低于低表達組（90.90%）差異有統(tǒng)計學意義（χ2=5.906，P＜0.05），見圖2、圖3。

2.5EOC患者預后影響因素的Cox回歸分析

將EOC患者預后作為因變量（生存=0，死亡=1），以EOC患者FIGO分期（Ⅰ、Ⅱ期=0，Ⅲ、Ⅳ期=1）、浸潤深度（淺層=0，深層=1）、淋巴結轉移（無=0，有=1）、病理分級（高、中分化=0，低分化=1）、ZFAS1（實測值）、Notch1（實測值）為自變量進行多因素Cox回歸分析。結果表明，F(xiàn)IGO分期Ⅲ、Ⅳ期、有淋巴結轉移、ZFAS1、Notch1是影響EOC患者預后的獨立危險因素（P＜0.05），見表3。

3討論

EOC是我國婦科死亡率較高的惡性腫瘤之一，EOC侵襲性強，易發(fā)生遠處擴散和復發(fā)轉移，是導致EOC預后差的主要原因［5］。近年來，雖然手術、放化療和綜合治療改善了EOC患者的長期生存時間，但大部分患者在被確診時已為晚期［6］。因此，探索新的腫瘤預后相關基因，有利于為EOC的分子治療提供新的靶點，提高診治的特異度，避免不良預后的發(fā)生。

lncRNA作為人類疾病的關鍵調(diào)節(jié)因子，主要以基因印跡、染色體重塑、翻譯和降解mRNA等途徑發(fā)揮作用［7］。ZFAS1位于20q13.13區(qū)域，是由鋅指NFX1反義端轉錄的新型lncRNA［8］。近年來，研究發(fā)現(xiàn)，ZFAS1在肝癌組織中呈高表達，敲減ZFAS1將通過促進miR-588表達來下調(diào)HMGA2表達，從而抑制肝癌細胞的增殖、侵襲和遷移［9］。ZFAS1在胃癌細胞系中高表達，可作為胃癌診斷的生物標志物［10］。本研究結果顯示，與卵巢癌良性腫瘤組織相比，ZFAS1在EOC組織中表達上調(diào)，且ZFAS1表達與EOC患者FIGO分期、浸潤深度、淋巴結轉移、病理分級有關，與楊曄等研究結果相似，提示ZFAS1在EOC發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮一定作用［11］?？赡苁怯捎谏掀ぜ毎?間充質轉化（Epithelial-mesenchymaltransition，EMT）在多種腫瘤浸潤轉移過程中存在，ZFAS1通過促進EMT過程，從而促進腫瘤的發(fā)生和轉移，但ZFAS1促進EMT過程尚不明確。

Notch1是一種眾所周知的調(diào)節(jié)因子，在大多數(shù)惡性腫瘤中起致癌基因作用［12］。Notch1主要在淋巴細胞、造血干細胞等細胞表面分布，并在造血干細胞的自我更新過程中發(fā)揮作用。Notch1突變或過度激活可能引起T淋巴細胞異常［13］。研究發(fā)現(xiàn)，Notch1在胃癌組織中高表達，并與胃癌淋巴結轉移有關，在胃癌組織中，敲減Notch1可阻滯細胞周期、減少癌細胞的增殖、遷移［14］。本研究結果顯示，與卵巢良性腫瘤組織相比，Notch1在EOC癌組織中表達上調(diào)，且Notch1表達與EOC患者FIGO分期、淋巴結轉移、病理分級有關，提示Notch1高表達可促進EOC的進展，本研究結果與吳曉蕊等研究結果相似［15］。提示Notch1在EOC中發(fā)揮致癌基因作用，其作用機制可能是由于Notch1通過激活多條腫瘤相關信號通路，促進癌細胞EMT，從而促進EOC的惡性進展。

ROC結果提示，ZFAS1和Notch1在預測EOC的發(fā)生上存在一定價值。進一步分析顯示，ZFAS1和Notch1高表達組患者的3年累積生存率均顯著低于低表達組，表明ZFAS1和Notch1表達水平對EOC患者生存時間有影響。多因素Cox回歸模型分析結果提示，ZFAS1、Notch1是影響EOC患者預后不良的獨立危險因素，由此可見，ZFAS1和Notch1可作為預測EOC患者生存狀況的潛在生物標志物。

由于本研究為單中心研究，且ZFAS1、Notch1的臨界值尚無確切范圍，后續(xù)仍需大量樣本及多中心研究來進一步驗證ZFAS1、Notch1對EOC患者預后評估的臨床價值。

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（2023-04-15收稿）