張澤峰 殷 波 何文謀 陳百全

1 河南省信陽市第三人民醫(yī)院泌尿外科 464000; 2 信陽市中心醫(yī)院泌尿外科

膀胱癌屬于臨床一種常見癌癥,每年新發(fā)病例約43萬人,時(shí)至今日,膀胱癌于靶向藥物治療、手術(shù)治療以及免疫治療等多個(gè)方面已獲得明顯進(jìn)步,但膀胱癌復(fù)發(fā)率與死亡率仍較高[1-2]。故尋找更為準(zhǔn)確、適用于膀胱癌的早期診斷、治療與預(yù)后預(yù)測(cè)的新指標(biāo)具有重要意義。MicroRNAs(miRNAs)屬于豐富的一類非編碼調(diào)控單鏈RNA,含20～30個(gè)核苷酸序列;miRNAs通過和3’-非翻譯區(qū)(3’-UTR)不完全互補(bǔ)配對(duì)減少目標(biāo)mRNA表達(dá),甚至降解目標(biāo)mRNA,此復(fù)合體于多個(gè)生物學(xué)過程中起重要作用,涉及組織生長(zhǎng)發(fā)育、心血管疾病、免疫反應(yīng)、代謝類疾病與腫瘤發(fā)生發(fā)展等過程[3-4]。鑒于此,本文選取我院收治的173例(均完成1年隨訪)經(jīng)尿道膀胱腫瘤切除術(shù)治療的膀胱癌患者,分析術(shù)后切除組織miRNA-15a、miRNA-21表達(dá)對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值,以期為臨床早期制定防治措施提供可參考依據(jù),現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取我院2019年3月—2021年6月收治的173例(均完成1年隨訪)經(jīng)尿道膀胱腫瘤切除術(shù)治療的膀胱癌患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合《膀胱癌臨床實(shí)踐指南(2016)》[5]中關(guān)于膀胱癌的診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)膀胱鏡組織活檢、手術(shù)切除組織術(shù)后的病理檢查等診斷為膀胱癌;(3)完整臨床資料;(4)同一醫(yī)院、同一主刀醫(yī)師擇期實(shí)施經(jīng)尿道膀胱腫瘤切除術(shù);(5)知曉本研究,且簽署知情同意書;(6)經(jīng)倫理委員會(huì)與學(xué)術(shù)委員會(huì)的審核批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)伴有其他惡性腫瘤;(2)腎功能、肝功能不全;(3)自身免疫類疾病或者免疫缺陷癥;(4)伴有其他危重癥致使預(yù)計(jì)生存期<1年;(5)入組前已接受抗腫瘤治療或者腫瘤復(fù)發(fā);(6)中途自愿退出。根據(jù)術(shù)后1年復(fù)發(fā)情況將患者分為復(fù)發(fā)組(35例)和未復(fù)發(fā)組(138例)。

1.2 方法 膀胱癌組織與配對(duì)癌旁組織標(biāo)本于手術(shù)切除之后立即存在液氮內(nèi);總RNA用美國加州卡爾斯巴德Invitgen公司提供的Trizol試劑提取,用NanoDrop ND-2000分光光度計(jì)檢測(cè)RNA全部樣品的純度、濃度;應(yīng)用NCodeTMSYB?Green miRNA qRT-PCR Kit合成miRNA-15a、miRNA-21特異性cDNA(作內(nèi)對(duì)照),實(shí)施qRT-PCR,應(yīng)用DNA Engine Opticon 2 Real-time Cycler予以分析。miRNA-15a正向引物為5’-GCGGTAGCAGCACATAA-3’,反向引物為5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’;miRNA-21正向引物為5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU-3’,反向引物為5’-CUAUACAACCUACUACCUCAUU-3’。利用2-ΔΔCt法計(jì)算miRNA-21、miRNA-15a表達(dá)水平。

1.3 觀察指標(biāo) (1)比較兩組術(shù)后切除癌組織miRNA-15a、miRNA-21表達(dá)水平。(2)比較不同病理學(xué)參數(shù)膀胱癌患者術(shù)后切除癌組織miRNA-15a、miRNA-21表達(dá)水平。(3)分析術(shù)后切除癌組織miRNA-15a、miRNA-21表達(dá)水平與病理學(xué)參數(shù)及復(fù)發(fā)相關(guān)性。(4)分析術(shù)后切除膀胱癌組織中miRNA-15a、miRNA-21不同表達(dá)水平對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)度。

2 結(jié)果

2.1 兩組術(shù)后切除癌組織miRNA-15a、miRNA-21表達(dá)水平比較 與復(fù)發(fā)組相比,未復(fù)發(fā)組術(shù)后切除癌組織miRNA-15a表達(dá)水平較高,miRNA-21表達(dá)水平較低(P<0.05)。見表1。

表1 兩組術(shù)后切除癌組織miRNA-15a、miRNA-21表達(dá)水平比較

2.2 不同病理學(xué)參數(shù)膀胱癌患者術(shù)后切除癌組織miRNA-15a、miRNA-21表達(dá)水平比較 術(shù)后切除癌組織miRNA-15a、miRNA-21表達(dá)水平與年齡、性別、腫瘤數(shù)目、腫瘤直徑無關(guān)(P>0.05)。術(shù)后切除癌組織miRNA-15a表達(dá)水平比較:Ta期>T1期,G1/G2級(jí)>G3級(jí),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移<無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05);術(shù)后切除癌組織miRNA-21表達(dá)水平比較:Ta期無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)。見表2。

表2 不病理學(xué)參數(shù)膀胱癌患者術(shù)后切除癌組織miRNA-15a、miRNA-21表達(dá)水平比較

2.3 術(shù)后切除癌組織miRNA-15a、miRNA-21表達(dá)水平與病理學(xué)參數(shù)及復(fù)發(fā)相關(guān)性分析 術(shù)后切除癌組織miRNA-15a表達(dá)水平與腫瘤分期、腫瘤分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05);術(shù)后切除癌組織miRNA-21表達(dá)水平與腫瘤分期、腫瘤分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 術(shù)后切除癌組織miRNA-15a、miRNA-21表達(dá)水平與病理學(xué)參數(shù)及復(fù)發(fā)相關(guān)性分析

2.4 術(shù)后切除癌組織miRNA-15a、miRNA-21不同表達(dá)水平對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)度分析 以術(shù)后切除膀胱癌組織中miRNA-15a、miRNA-21表達(dá)水平的平均值為界,將經(jīng)尿道膀胱腫瘤切除術(shù)治療的膀胱癌患者分為高水平、低水平,結(jié)果顯示,術(shù)后切除癌組織中miRNA-15a、miRNA-21高水平患者復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)度是低水平的0.140、4.355倍(P<0.05)。見表4。

表4 各指標(biāo)不同水平對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)度分析

3 討論

膀胱腫瘤為全球較為常見的一種腫瘤,其病理分期主要取決于經(jīng)尿道膀胱腫瘤切除術(shù),其中約66.7%膀胱癌為低級(jí)別或者非肌肉浸潤(rùn)性膀胱癌,約33.3%膀胱癌為高級(jí)別或者肌肉浸潤(rùn)性膀胱癌[6-7]。根治性膀胱切除術(shù)為治療膀胱癌的標(biāo)準(zhǔn)術(shù)式,臨床觀察和實(shí)踐中得知,約13%膀胱腫瘤患者于術(shù)后可出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,例如肺、肝、前列腺等器官[8]。臨床常用的臨床與組織病理學(xué)的預(yù)測(cè)指標(biāo),例如組織學(xué)分級(jí)、腫瘤分期、腫瘤大小等指標(biāo),于描述腫瘤進(jìn)展至肌肉浸潤(rùn)或者腫瘤復(fù)發(fā)等方面已取得良好應(yīng)用價(jià)值,但無法精準(zhǔn)預(yù)測(cè)非肌肉浸潤(rùn)性膀胱癌的生物學(xué)行為,尤其高級(jí)別非肌肉浸潤(rùn)性膀胱癌[9]。故需尋找更為準(zhǔn)確的新預(yù)后指標(biāo)來預(yù)測(cè)膀胱腫瘤患者的進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)。

miRNA-15a基因簇位在人類13號(hào)染色體上,處在長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNA)基因淋巴細(xì)胞白血病2(DLEU2)1個(gè)內(nèi)含子中,其通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,增加腫瘤細(xì)胞對(duì)于化療藥的敏感度,組織腫瘤自身微環(huán)境的產(chǎn)生,抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲、增殖以及血管生成[10]。以往研究顯示,miRNA-15a能作為多個(gè)腫瘤診斷與預(yù)后預(yù)測(cè)的一種生物學(xué)標(biāo)志物,其于多個(gè)腫瘤組織內(nèi)表達(dá)下調(diào)或者缺失[11]。本研究結(jié)果指出,未復(fù)發(fā)組術(shù)后切除癌組織miRNA-15a表達(dá)水平較高,且Ta期術(shù)后切除癌組織miRNA-15a表達(dá)水平高于T1期、G1/G2級(jí)高于G3級(jí)、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,此外,術(shù)后切除癌組織miRNA-15a表達(dá)水平與復(fù)發(fā)呈負(fù)相關(guān),由此可知,miRNA-15a參與膀胱癌患者的腫瘤細(xì)胞增殖、遷移等。miRNA-15a表達(dá)水平升高可明顯抑制扭曲相關(guān)蛋白1(Twist1)-3’-UTR活性,下調(diào)了包括E鈣黏素、N-鈣黏素、Twist1、α黏平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)在內(nèi)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化調(diào)控(EMT)有關(guān)的基因活性,同時(shí)降低基質(zhì)金屬蛋白9(MMP9)、基質(zhì)金屬蛋白2(MMP2)活性,抑制腫瘤細(xì)胞的遷移與侵襲[12]。本研究指出,未復(fù)發(fā)組術(shù)后切除癌組織miRNA-21表達(dá)水平較低,Ta期術(shù)后切除癌組織miRNA-21表達(dá)水平比較低于T1期,G1/G2級(jí)低于G3級(jí)、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,并與復(fù)發(fā)成正比(P<0.05),提示miRNA-21表達(dá)水平在膀胱癌患者的腫瘤細(xì)胞遷移、增殖中起到重要作用。miRNA-21為高度保守的一種小分子RNA,有較獨(dú)立的啟動(dòng)子,能通過對(duì)于抑癌基因的負(fù)調(diào)控能力,使靶位點(diǎn)失活或者突變,從而引起細(xì)胞惡變和轉(zhuǎn)移[13]。

綜上可知,miRNA-15a、miRNA-21參與膀胱癌腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移,與術(shù)后復(fù)發(fā)緊密聯(lián)系,動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)其水平變化可為臨床預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)提供依據(jù)。