馬慧敏　柳璐　熊英　趙慧　孔繁麗

摘要：目的 探討姜黃素（Cur）調(diào)節(jié)N-甲基-D-天冬氨酸受體（NMDAR）/鈣離子（Ca²⁺）/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）信號(hào)通路對(duì)異氟醚（ISO）誘導(dǎo)的幼齡小鼠術(shù)后認(rèn)知功能障礙（POCD）的影響。方法 將72只C57BL/6J小鼠分為對(duì)照組、ISO組、低劑量Cur組（Cur-L組，50 mg/kg）、中劑量Cur組（Cur-M組，100 mg/kg）、高劑量Cur組（Cur-H組，200 mg/kg）、Cur-H+NMDA（NMDAR激活劑）組（200 mg/kg+8 mg/kg），每組12只。經(jīng)對(duì)應(yīng)給藥處理30 min后，對(duì)照組小鼠吸入含30%氧氣和空氣的混合氣體2 h，其余各組小鼠吸入2% ISO 2 h，每天1次，持續(xù)14 d。末次給藥24 h后，Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)與空間記憶能力；HE染色檢測(cè)海馬CA1區(qū)病理學(xué)變化；免疫熒光染色檢測(cè)小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元特異核蛋白（NeuN）陽(yáng)性表達(dá)；TUNEL染色檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)海馬CA1區(qū)組織中白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平；蛋白印跡法檢測(cè)海馬CA1區(qū)組織中NMDAR1和CaMKⅡ蛋白表達(dá)；熒光探針檢測(cè)海馬CA1區(qū)Ca²⁺濃度。結(jié)果 與對(duì)照組比較，ISO組小鼠海馬CA1區(qū)病理?yè)p傷嚴(yán)重，逃避潛伏期延長(zhǎng)，神經(jīng)細(xì)胞凋亡率升高，海馬CA1區(qū)組織中IL-1β和TNF-α水平升高，NMDAR1和CaMKⅡ蛋白表達(dá)及Ca²⁺濃度升高（P＜0.05），穿越平臺(tái)次數(shù)和NeuN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少（P＜0.05）；與ISO組比較，Cur-L組、Cur-M組、Cur-H組小鼠海馬CA1區(qū)病理?yè)p傷減輕，逃避潛伏期縮短，神經(jīng)細(xì)胞凋亡率降低，海馬CA1區(qū)組織中IL-1β和TNF-α水平降低，NMDAR1和CaMKⅡ蛋白表達(dá)及Ca²⁺濃度降低（P＜0.05），穿越平臺(tái)次數(shù)和NeuN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加（P＜0.05），且呈劑量依賴性；NMDA減弱了高劑量Cur對(duì)ISO誘導(dǎo)的小鼠POCD的改善作用（P＜0.05）。結(jié)論 Cur可能通過(guò)抑制NMDAR/Ca²⁺/CaMKⅡ信號(hào)通路改善ISO誘導(dǎo)的小鼠POCD。

關(guān)鍵詞：姜黃素；受體，N-甲基-D-天冬氨酸；鈣通道；鈣-鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2型；認(rèn)知功能障礙；術(shù)后認(rèn)知并發(fā)癥；異氟醚

中圖分類號(hào)：R285.5，R614.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.11958/20221719

Effect of curcumin regulating NMDAR/Ca²⁺/CaMKⅡ signaling pathway on postoperative cognitive dysfunction induced by isoflurane in young mice

MA Huimin， LIU Lu△， XIONG Ying， ZHAO Hui， KONG Fanli

Anesthesia Department Operating Room， Wuhan Children's Hospital Affiliated to Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology （Wuhan Maternal and Child Health Hospital）， Wuhan 430014， China

△Corresponding Author E-mail： 365038103@qq.com

Abstract： Objective To investigate the effect of curcumin （Cur） regulating N-methyl-D-aspartate receptor （NMDAR）/calcium ion （Ca²⁺）/calmodulin dependent protein kinase Ⅱ （CaMKⅡ） signaling pathway on isoflurane （ISO） -induced postoperative cognitive dysfunction （POCD） in young mice. Methods Seventy-two C57BL/6J mice were separated into the control group， the ISO group， the low-dose Cur group （Cur-L group， 50 mg/kg）， the medium-dose Cur group （Cur-M group， 100 mg/kg）， the high-dose Cur group （Cur-H group， 200 mg/kg） and the Cur-H+NMDA （NMDAR activator） group （200 mg/kg+8 mg/kg）， with 12 animals in each group. After 30 min of corresponding drug treatment， the mice in the control group inhaled a mixed gas containing 30% oxygen and air for 2 hours， and mice in the other groups inhaled 2% ISO for 2 hours， once a day for 14 days. Twenty-four hours after the last treatment， Morris water maze test was used to detect the learning and spatial memory abilities of mice. HE staining was used to detect the pathological changes in hippocampal CA1 area. Immunofluorescence staining was used to detect the positive expression of neuron specific nucleoprotein （NeuN） in hippocampus CA1 region of mice. TUNEL staining was used to detect neuronal apoptosis. Enzyme linked immunosorbent assay was used to detect levels of interleukin-1β （IL-1β） and tumor necrosis factor-α （TNF-α） in hippocampal CA1 tissue. Western blot assay was used to detect NMDAR1 and CaMKⅡ protein expression in mouse hippocampal CA1 tissue. Intracellular Ca²⁺concentration in hippocampal CA1 region was detected by fluorescence probe. Results Compared with the control group， the pathological damage of hippocampal CA1 region of mice was severe in the ISO group， and the escape latency was prolonged. The apoptosis rate of neural cells， levels of IL-1β and TNF-α， expression levels of NMDAR1 and CaMKⅡ protein， and the concentration of Ca²⁺in hippocampal CA1 region were increased （P＜0.05）. Times of crossing platform and the number of NeuN positive cells were decreased in the ISO group （P＜0.05）. Compared with the ISO group， pathological damages of hippocampal CA1 region of mice were alleviated in the Cur-L group， the Cur-M group and the Cur-H group， the escape latency was shortened， and the apoptosis rate of neural cells， levels of IL-1β and TNF-α， expression levels of NMDAR1 and CaMKⅡ protein， and the concentration of Ca²⁺in hippocampal CA1 region were decreased （P＜0.05）. Times of crossing platform and the number of NeuN positive cells were increased （P＜0.05）， which was dose-dependent. NMDA attenuated the improvement effect of high-dose Cur on ISO induced POCD in mice （P＜0.05）. Conclusion Curcumin may improve ISO-induced POCD in mice by inhibiting NMDAR/Ca²⁺/CaMKⅡ signaling pathway.

Key words： curcumin; receptors， N-methyl-D-aspartate; calcium channels; calcium-calmodulin-dependent protein kinase type 2; cognitive dysfunction; postoperative cognitive complications; isoflurane

術(shù)后認(rèn)知功能障礙（POCD）是接受外科手術(shù)的患者在麻醉和外科手術(shù)后的嚴(yán)重并發(fā)癥［1］。其特點(diǎn)是暫時(shí)或永久性認(rèn)知能力下降、記憶障礙、語(yǔ)言理解和社會(huì)適應(yīng)能力下降［2］。POCD影響患者的生活質(zhì)量，還會(huì)帶來(lái)醫(yī)療負(fù)擔(dān)［3］。異氟醚（ISO）是一種臨床常用麻醉劑，它可以通過(guò)誘導(dǎo)小鼠神經(jīng)炎癥和神經(jīng)元凋亡，進(jìn)而導(dǎo)致認(rèn)知障礙［4］。因此，任何減輕ISO誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥、神經(jīng)元凋亡的策略都可能有助于治療POCD。姜黃素（Cur）是從姜類植物姜黃的根莖中提取的一種不溶于水的黃色酚類物質(zhì)。已有研究報(bào)道，Cur可改善ISO誘導(dǎo)的大鼠認(rèn)知功能障礙［5］，但具體機(jī)制尚不清楚。N-甲基-D-天冬氨酸受體（NMDAR）/鈣離子（Ca²⁺）/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）信號(hào)通路對(duì)學(xué)習(xí)與記憶能力具有調(diào)控作用。研究顯示，NMDAR2-CaMKⅡ通路的激活與ISO誘導(dǎo)麻醉小鼠的記憶缺陷相關(guān)［6］。而Cur對(duì)ISO誘導(dǎo)的認(rèn)知功能障礙的改善作用是否與NMDAR/Ca²⁺/CaMKⅡ信號(hào)通路有關(guān)尚不清楚。本研究主要探究Cur對(duì)ISO誘導(dǎo)的幼齡小鼠POCD的影響及其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)3周齡C57BL/6J雄性小鼠72只，體質(zhì)量14～16 g，購(gòu)自廣東導(dǎo)科醫(yī)藥技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（粵）2020-0041。小鼠在溫度21～24 ℃和濕度為55%～60%的飼養(yǎng)環(huán)境中自由獲取食物和水。本實(shí)驗(yàn)已獲得本院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)（倫理號(hào)：基礎(chǔ)倫審2022-119）。

1.2 試劑與儀器 Cur（貨號(hào)SND-376，原料藥，純度99.93%，Cur和生理鹽水混溶成質(zhì)量濃度分別為5、10、20 g/L的混懸液）購(gòu)自滁州仕諾達(dá)生物公司；ISO（貨號(hào)EPY0000858）、NMDAR激活劑（NMDA，貨號(hào)M05817）購(gòu)自深圳振強(qiáng)生物公司；蘇木精-伊紅（HE）染液（貨號(hào)AC197L04）、TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)AC12L055）、Fura-2 AM鈣離子熒光探針（貨號(hào)S1952K）購(gòu)自上海李記生物科技公司；腫瘤壞死因子-α（TNF-α，貨號(hào)MM-0132M1）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β，貨號(hào)MM-0040M1）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒購(gòu)自杭州鉑賽生物公司；兔源一抗神經(jīng)元特異核蛋白（NeuN，貨號(hào)ab177487）、NMDAR1（貨號(hào)ab109182）、CaMKⅡ（貨號(hào)ab134041）、β-actin（貨號(hào)ab8226）、羊抗兔二抗（貨號(hào)ab205718）及Dylight 488綠色熒光標(biāo)記的二抗（貨號(hào)ab96879）均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。顯微鏡（型號(hào)moticBA210）、酶標(biāo)儀（型號(hào)FK-ZX01）購(gòu)自寧波舜宇儀器有限公司；蛋白成像系統(tǒng)（型號(hào)97701-xx）、顯微熒光分光光度計(jì)（型號(hào)960MC）購(gòu)自深圳市富徹爾生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 分組及處理 將小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組、ISO組、低劑量Cur組（Cur-L組）、中劑量Cur組（Cur-M組）、高劑量Cur組（Cur-H組）、Cur-H+NMDA組，每組12只。Cur-L組、Cur-M組、Cur-H組分別在灌胃50、100、200 mg/kg Cur［7］（分別為5、10、20 g/L的Cur混懸液，灌胃體積均是10 mL/kg）的同時(shí)腹腔注射8 mg/kg生理鹽水，30 min后再吸入2% ISO和28%氧氣麻醉2 h［8］；Cur-H+NMDA組小鼠灌胃200 mg/kg Cur的同時(shí)腹腔注射8 mg/kg NMDA［9］，30 min后吸入2% ISO和28%氧氣麻醉2 h；ISO組小鼠灌胃及腹腔注射等量的生理鹽水，30 min后再吸入2% ISO和28%氧氣麻醉2 h；對(duì)照組小鼠灌胃及腹腔注射等量的生理鹽水，30 min后吸入含30%氧氣的空氣處理2 h［10］；每天處理1次，處理持續(xù)14 d。

1.3.2 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 末次給藥處理24 h后，參照文獻(xiàn)［11］進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。（1）學(xué)習(xí)能力：小鼠置于任一入水點(diǎn)處，將小鼠游到平臺(tái)的時(shí)間記為逃避潛伏期，如果2 min內(nèi)不能到達(dá)平臺(tái)，就引導(dǎo)小鼠爬到平臺(tái)，持續(xù)訓(xùn)練5 d，記錄第6天的逃避潛伏期。（2）空間記憶能力：在第7天時(shí)撤去平臺(tái)，以距平臺(tái)最遠(yuǎn)的地方為入水點(diǎn)，觀察并記錄小鼠在2 min內(nèi)穿越平臺(tái)的次數(shù)。

1.3.3 標(biāo)本收集 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用頸椎脫臼法處死小鼠，收集小鼠海馬CA1區(qū)組織。將組織分為兩部分，一部分固定于4%多聚甲醛中用于HE、免疫熒光染色及TUNEL染色實(shí)驗(yàn)；另一部分凍存于-80 ℃冰箱中用于ELISA、蛋白印跡實(shí)驗(yàn)及Ca²⁺的測(cè)定。

1.3.4 HE染色檢測(cè)小鼠海馬CA1區(qū)病理?yè)p傷 將固定于4%多聚甲醛中的小鼠海馬CA1區(qū)組織經(jīng)包埋、切片、脫蠟、梯度乙醇脫水后，用HE染色。在光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠海馬CA1區(qū)病理?yè)p傷。

1.3.5 免疫熒光染色檢測(cè)小鼠海馬CA1區(qū)NeuN陽(yáng)性表達(dá) 石蠟切片經(jīng)脫蠟、復(fù)水、抗原修復(fù)、封閉后，加入一抗NeuN（1︰500），在4 ℃下孵育過(guò)夜，次日再加入Dylight 488綠色熒光標(biāo)記的二抗室溫孵育2 h。DAPI染色10 min，封片，熒光顯微鏡下觀察NeuN陽(yáng)性表達(dá)情況（隨機(jī)取8個(gè)視野計(jì)數(shù)NeuN陽(yáng)性細(xì)胞，取平均值）。

1.3.6 TUNEL染色檢測(cè)小鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡 石蠟切片經(jīng)二甲苯浸泡、梯度乙醇脫水后加入50 μL TUNEL反應(yīng)混合物，37 ℃下孵育1 h。再加入DAPI染色10 min，利用熒光顯微鏡觀察小鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況。隨機(jī)取8個(gè)視野，計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞，凋亡率=凋亡的神經(jīng)細(xì)胞數(shù)/神經(jīng)細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.3.7 ELISA法檢測(cè)小鼠海馬CA1組織中IL-1β和TNF-α水平 按照ELISA試劑盒說(shuō)明書測(cè)定小鼠海馬CA1組織中IL-1β和TNF-α水平。

1.3.8 蛋白印跡法檢測(cè)小鼠海馬CA1組織中NMDAR1和CaMKⅡ蛋白表達(dá) 用RIPA裂解液提取小鼠海馬CA1區(qū)組織中的總蛋白，經(jīng)定量、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉后，加入兔源一抗NMDAR1（1︰1 730）、CaMKⅡ（1︰1 730）、β-actin（1︰1 950），4 ℃過(guò)夜后，加入羊抗兔二抗（1︰1 750）在室溫下孵育1 h，經(jīng)顯影、定影后利用Image J軟件分析蛋白的灰度值。

1.3.9 小鼠海馬CA1組織細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺濃度的檢測(cè) 將小鼠海馬CA1組織剪碎并用胰蛋白酶消化成單細(xì)胞懸液，利用4 μmol/L Fura-2 AM熒光探針負(fù)載40 min，采用顯微熒光分光光度計(jì)檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)488 nm，發(fā)射波長(zhǎng)530 nm處的光密度（OD）值，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算小鼠海馬CA1組織細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行分析數(shù)據(jù)，所有符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組樣本間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Cur對(duì)逃避潛伏期及穿越平臺(tái)次數(shù)的影響 與對(duì)照組比較，ISO組小鼠逃避潛伏期延長(zhǎng)，穿越平臺(tái)次數(shù)減少（P＜0.05）；與ISO組比較，Cur-L組、Cur-M組、Cur-H組小鼠逃避潛伏期縮短，穿越平臺(tái)次數(shù)增加，且呈劑量依賴性（P＜0.05）；與Cur-H組比較，Cur-H+NMDA組小鼠逃避潛伏期延長(zhǎng)，穿越平臺(tái)次數(shù)減少（P＜0.05）；見表1。

2.2 Cur對(duì)海馬CA1區(qū)病理?yè)p傷的影響 與對(duì)照組比較，ISO組小鼠神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少且排列紊亂；與ISO組比較，Cur-L組、Cur-M組、Cur-H組小鼠海馬CA1區(qū)病理?yè)p傷減輕，神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量增加且排列整齊；與Cur-H組比較，Cur-H+NMDA組小鼠海馬CA1區(qū)病理?yè)p傷加劇，神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少且排列無(wú)序；見圖1。

2.3 Cur對(duì)海馬CA1區(qū)NeuN陽(yáng)性表達(dá)和神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響 與對(duì)照組比較，ISO組NeuN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少，神經(jīng)細(xì)胞凋亡率升高（P＜0.05）；與ISO組比較，Cur-L組、Cur-M組、Cur-H組NeuN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加，神經(jīng)細(xì)胞凋亡率降低，且呈劑量依賴性（P＜0.05）；與Cur-H組比較，Cur-H+NMDA組NeuN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少，神經(jīng)細(xì)胞凋亡率升高（P＜0.05）；見圖2、3，表2。

2.4 Cur對(duì)海馬CA1區(qū)組織中IL-1β、TNF-α水平的影響 與對(duì)照組比較，ISO組IL-1β、TNF-α水平升高（P＜0.05）；與ISO組比較，Cur-L組、Cur-M組、Cur-H組IL-1β、TNF-α水平降低，且呈劑量依賴性（P＜0.05）；與Cur-H組比較，Cur-H+NMDA組IL-1β、TNF-α水平升高（P＜0.05），見表3。

2.5 Cur對(duì)海馬CA1區(qū)組織中NMDAR/Ca²⁺/CaMKⅡ通路蛋白表達(dá)及Ca²⁺濃度的影響 與對(duì)照組比較，ISO組NMDAR1、CaMKⅡ蛋白表達(dá)及Ca²⁺濃度升高（P＜0.05）；與ISO組比較，Cur-L組、Cur-M組、Cur-H組NMDAR1、CaMKⅡ蛋白表達(dá)及Ca²⁺濃度降低，且呈劑量依賴性（P＜0.05）；與Cur-H組比較，Cur-H+NMDA組NMDAR1、CaMKⅡ蛋白表達(dá)及Ca²⁺濃度升高（P＜0.05）；見圖4、表4。

3 討論

3.1 ISO誘導(dǎo)的小鼠POCD ISO和七氟醚是外科手術(shù)期間常用的麻醉劑。然而，它們會(huì)誘發(fā)大腦的POCD［12］。已有研究顯示，ISO和七氟醚可通過(guò)不同機(jī)制誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡，進(jìn)而加劇POCD［13］。近期關(guān)于七氟醚誘導(dǎo)POCD的相關(guān)機(jī)制研究較多，但關(guān)于如何緩解ISO誘導(dǎo)的POCD的報(bào)道有限。本研究通過(guò)吸入2% ISO和28%氧氣麻醉2 h以構(gòu)建ISO誘導(dǎo)的POCD小鼠模型，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，ISO組小鼠逃避潛伏期延長(zhǎng)、穿越平臺(tái)次數(shù)減少，且海馬CA1區(qū)病理?yè)p傷嚴(yán)重，提示造模成功。有研究顯示，麻醉劑誘導(dǎo)的POCD與神經(jīng)細(xì)胞凋亡和神經(jīng)炎癥有關(guān)［14］。馮海妹等［15］發(fā)現(xiàn)ISO麻醉誘發(fā)老齡大鼠海馬CA1區(qū)IL-1β和TNF-α水平升高，進(jìn)而誘發(fā)POCD。錢敏等［16］研究表明海馬細(xì)胞大量凋亡促進(jìn)了ISO麻醉老齡大鼠POCD。本研究結(jié)果與上述研究一致。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，ISO組小鼠NeuN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少，神經(jīng)細(xì)胞凋亡率、IL-1β和TNF-α水平升高，表明神經(jīng)細(xì)胞凋亡及神經(jīng)炎癥反應(yīng)參與了ISO誘導(dǎo)的小鼠POCD。

3.2 Cur可改善ISO誘導(dǎo)的小鼠POCD Cur是一種從中藥姜黃根莖中提取的多酚類物質(zhì)，具有抗癌、抗炎和抗凋亡等多種活性［17］。Cur可改善全腦缺血大鼠的記憶和神經(jīng)功能，恢復(fù)CA1區(qū)不規(guī)則神經(jīng)元分布［18］。Cur可抑制缺氧/再灌注誘導(dǎo)神經(jīng)元的凋亡和炎癥，進(jìn)而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用［19］。以上研究表明Cur具有神經(jīng)保護(hù)作用。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)低、中、高劑量Cur處理后，ISO誘導(dǎo)小鼠的POCD及海馬CA1區(qū)病理?yè)p傷減輕，NeuN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多，神經(jīng)細(xì)胞凋亡率及IL-1β、TNF-α水平降低，且呈劑量依賴性，提示Cur可通過(guò)抑制神經(jīng)炎癥及神經(jīng)細(xì)胞凋亡，進(jìn)而改善ISO誘導(dǎo)的小鼠POCD。

3.3 Cur可能通過(guò)抑制NMDAR/Ca²⁺/CaMKⅡ通路改善ISO誘導(dǎo)的小鼠POCD 近年來(lái)關(guān)于NMDAR/Ca²⁺/CaMKⅡ信號(hào)通路在調(diào)控神經(jīng)功能方面的作用成為研究的熱點(diǎn)。相關(guān)研究顯示，激活NMDAR/Ca²⁺通路可導(dǎo)致衰老小鼠POCD［20］。腦苷脂-A可減少中風(fēng)小鼠海馬CA1區(qū)NMDAR、Ca²⁺的流入，進(jìn)而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用［21］。抑制Ca²⁺/CaMKⅡ信號(hào)通路可改善血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙［22］。本研究顯示，Cur可降低ISO誘導(dǎo)的小鼠海馬CA1區(qū)組織中NMDAR1、CaMKⅡ蛋白表達(dá)及Ca²⁺濃度，且呈劑量依賴性，推測(cè)Cur可能通過(guò)抑制NMDAR/Ca²⁺/CaMKⅡ信號(hào)通路改善ISO誘導(dǎo)的小鼠POCD。為了驗(yàn)證該猜想，本研究在高劑量Cur處理的基礎(chǔ)上再加NMDAR激活劑NMDA干預(yù)ISO誘導(dǎo)的小鼠，結(jié)果顯示NMDA減弱了Cur對(duì)ISO誘導(dǎo)小鼠POCD的改善作用，證實(shí)了Cur可能通過(guò)抑制NMDAR/Ca²⁺/CaMKⅡ信號(hào)通路改善ISO誘導(dǎo)的小鼠POCD。

綜上所述，Cur可能通過(guò)抑制NMDAR/Ca²⁺/CaMKⅡ信號(hào)通路改善ISO誘導(dǎo)的小鼠POCD。本研究可能為POCD的臨床治療提供理論依據(jù)。然而，本研究尚存在不足之處，Cur對(duì)ISO誘導(dǎo)的POCD的改善作用涉及的機(jī)制較多，有待進(jìn)一步深入探究。

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（2022-11-01收稿 2023-02-16修回）

（本文編輯 李鵬）