周利君,郭紅榮,王紅娟,方思,徐建群

(武漢市第三醫(yī)院/武漢大學(xué)附屬同仁醫(yī)院 呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科,湖北 武漢 430074)

肺癌目前是我國(guó)發(fā)病率及死亡率均較高的惡性腫瘤之一,非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌中較常見(jiàn)的病理類型,占肺癌人群的80%～85%[1]。由于NSCLC初期癥狀不具有特異性,大多數(shù)NSCLC患者在就醫(yī)時(shí)已發(fā)展為中晚期甚至出現(xiàn)轉(zhuǎn)移,手術(shù)等臨床治療方法無(wú)法根治,導(dǎo)致NSCLC患者預(yù)后較差,5年生存率不足20%[2-3]。因此尋找與NSCLC患者預(yù)后相關(guān)的特異性指標(biāo),能夠使患者得到及時(shí)有效的干預(yù),提高生存率。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸、不能編碼蛋白質(zhì)的RNA,LncRNA在人體各個(gè)組織及器官中均有表達(dá),能夠通過(guò)相關(guān)信號(hào)通路參與癌癥發(fā)生與發(fā)展[4-5]。LncRNA 00707(LINC00707)作為L(zhǎng)ncRNA家族重要成員,同樣會(huì)對(duì)惡性腫瘤疾病的發(fā)生產(chǎn)生影響,并且有研究表明LINC00707對(duì)肺上皮細(xì)胞炎癥因子的釋放和凋亡具有調(diào)控作用,提示LINC00707可能與肺部疾病發(fā)生有關(guān)[6]。LncRNA也能夠與微小RNA(miRNA)相互作用,通過(guò)控制靶基因的表達(dá),對(duì)疾病的發(fā)生進(jìn)行調(diào)控[7]。有報(bào)道稱miRNA-382-5p(miR-382-5p)在乳腺癌、胃癌等患者體液中均有表達(dá)[8]。本研究測(cè)定NSCLC患者癌組織中LINC00707和miR-382-5p表達(dá)水平,并分析二者與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取本院2018年2月至2020年2月手術(shù)治療的127例NSCLC患者,術(shù)中留取NSCLC組織和癌旁組織。患者年齡40～70歲,平均(64.26±6.88)歲,男73例,女54例。納入標(biāo)準(zhǔn):(1) 患者均行肺活檢及病理檢查,依據(jù)《中華醫(yī)學(xué)會(huì)肺癌臨床診療指南(2019版)》[9]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為NSCLC;(2) 均為初次確診NSCLC;(3) 未接受過(guò)放化療、靶向治療等抗腫瘤治療者;(4) 患者及家屬知情且同意參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn):(1) 伴有感染性疾病、代謝疾病或免疫系統(tǒng)疾病者;(2) 伴有其他器官的惡性腫瘤者;(3) 合并心、肝、肺等重要器官功能障礙者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批,嚴(yán)格按照規(guī)定程序執(zhí)行。

1.2 資料收集

收集患者年齡、性別、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、分化程度、組織學(xué)類型等臨床資料。

1.3 LINC00707、miR-382-5p表達(dá)水平的檢測(cè)

取NSCLC患者癌組織及癌旁組織(距癌組織邊緣3 cm以上),于-80 ℃保存待測(cè)。取50 mg組織,采用Trizol試劑(美國(guó)Invitrogen公司)分離提取組織中的總RNA,用分光光度計(jì)(UPT-100,上海尤尼柯儀器有限公司)檢測(cè)RNA純度和濃度,采用PrimeScript miRNA cDNA Synthesis反轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TaKaRa公司)以RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,使用ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix(貨號(hào):Q711-02,日本TaKaRa公司)對(duì)cDNA進(jìn)行定量檢測(cè),檢測(cè)儀器為7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)ABI公司),以GAPDH、U6為內(nèi)參,使用2-ΔΔCt方法分別計(jì)算LINC00707及miR-382-5p的表達(dá)水平。引物序列見(jiàn)表1。

表1 引物序列

1.4 隨訪

自NSCLC患者入院起,以電話及門診的方式對(duì)其進(jìn)行為期3年的隨訪,每2個(gè)月隨訪1次,以患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)或癌因死亡為隨訪終點(diǎn),記錄患者3年間的生存狀況?；颊唠S訪率為100%,生存時(shí)間記錄為入院日期至患者死亡時(shí)間或最終隨訪截止時(shí)間(2023年2月),以此計(jì)算NSCLC患者3年生存率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,計(jì)數(shù)資料以例(n)或百分率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn),計(jì)量資料以表示,組間比較行配對(duì)t檢驗(yàn);Pearson法分析NSCLC組織LINC00707與miR-382-5p表達(dá)的相關(guān)性;采用Kaplan-Meier法分析LINC00707和miR-382-5p的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系;多因素Cox回歸分析影響NSCLC患者預(yù)后的相關(guān)因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 NSCLC組織與癌旁組織LINC00707和miR-382-5p表達(dá)的比較

NSCLC組織中LINC00707表達(dá)水平明顯高于癌旁組織,miR-382-5p表達(dá)水平明顯低于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。

表2 NSCLC組織與癌旁組織LINC00707和miR-382-5p表達(dá)的比較()

表2 NSCLC組織與癌旁組織LINC00707和miR-382-5p表達(dá)的比較()

組 織nLINC00707miR-382-5p癌旁組織1271.03±0.111.06±0.14NSCLC組織1271.41±0.260.72±0.06t值15.16925.896P值<0.001<0.001

2.2 NSCLC組織LINC00707與miR-382-5p表達(dá)的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析顯示,NSCLC組織LINC00707與miR-382-5p的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.692,P<0.05),見(jiàn)圖1。

圖1 NSCLC組織LINC00707與miR-382-5p表達(dá)的相關(guān)性

2.3 NSCLC組織LINC00707、miR-382-5p表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

不同年齡、性別、腫瘤直徑、浸潤(rùn)深度、組織學(xué)分類的NSCLC患者LINC00707、miR-382-5p表達(dá)水平比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);而TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移、分化程度為低分化的患者NSCLC組織中LINC00707呈現(xiàn)高表達(dá)水平,miR-382-5p則呈現(xiàn)出低表達(dá)水平(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 NSCLC組織LINC00707、miR-382-5p表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系()

表3 NSCLC組織LINC00707、miR-382-5p表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系()

臨床病理特征nLINC007表達(dá)水平t值P值miR-382-5p表達(dá)水平t值P值年齡 <60歲481.36±0.220.73±0.08 ≥60791.45±0.291.8500.0670.72±0.060.8010.425性別 男731.39±0.240.73±0.07 女541.45±0.291.2740.2050.71±0.061.6900.094腫瘤直徑 <3 cm691.44±0.240.73±0.08 ≥3 cm581.39±0.211.2370.2180.71±0.061.5690.119TNM分期 Ⅰ+Ⅱ781.28±0.150.77±0.08 Ⅲ+Ⅳ491.62±0.347.728<0.0010.66±0.048.939<0.001淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 否901.31±0.180.76±0.08 是371.67±0.397.128<0.0010.63±0.049.398<0.001浸潤(rùn)深度 淺層701.39±0.220.73±0.08 深層571.44±0.341.0000.3190.71±0.061.5630.121分化程度 低分化551.59±0.420.65±0.04 中/高分化721.28±0.145.857<0.0010.78±0.0712.315<0.001組織學(xué)分類 鱗癌691.39±0.250.73±0.07 腺癌581.44±0.311.0060.3160.71±0.061.7110.090

2.4 LINC00707、miR-382-5p表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

采用Kaplan-Meier法分析LINC00707及miR-382-5p表達(dá)水平與患者預(yù)后的關(guān)系,結(jié)果顯示,LINC00707低表達(dá)患者3年生存率(27/63,42.86%)高于LINC00707高表達(dá)患者(18/64,28.13%)(χ2=5.123,P=0.024),miR-382-5p高表達(dá)患者3年生存率(28/64,43.75%)高于miR-382-5p低表達(dá)患者(17/63,26.98%)(χ2=4.089,P=0.043),見(jiàn)圖2、3。

圖2 NSCLC組織LINC00707表達(dá)與患者3年生存率的關(guān)系

圖3 NSCLC組織miR-382-5p表達(dá)與患者3年生存率的關(guān)系

2.5 多因素Cox回歸分析影響NSCLC患者預(yù)后的相關(guān)因素

以NSCLC患者3年內(nèi)是否死亡為因變量(賦值:死亡=1,存活=0),以TNM分期(賦值:Ⅲ+Ⅳ=1,Ⅰ+Ⅱ=0)、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移(賦值:是=1,否=0)、分化程度(賦值:中/高分化=0,低分化=1)、LINC00707(實(shí)測(cè)值)、miR-382-5p(實(shí)測(cè)值)為自變量進(jìn)行多因素Cox回歸分析,結(jié)果顯示,TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、LINC00707、miR-382-5p是NSCLC患者預(yù)后的影響因素(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 多因素Cox回歸分析NSCLC患者預(yù)后的影響因素

3 討 論

肺癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,根據(jù)病理類型可將肺癌分為小細(xì)胞肺癌和NSCLC兩大類,其中NSCLC是最為常見(jiàn)的類型[10]。由于NSCLC發(fā)病隱匿,患者早期癥狀并不明顯,大多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期,錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī),導(dǎo)致患者預(yù)后較差,生存率較低,給患者及其家庭帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)[11-12],因此尋找與NSCLC密切相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物,對(duì)NSCLC患者的及早診治具有重要意義。相關(guān)研究表明,LncRNA能夠影響腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移過(guò)程,其表達(dá)水平對(duì)腫瘤早期診斷具有一定臨床意義,而miRNA也與肺癌、胃癌等惡性腫瘤疾病發(fā)生密切相關(guān)[13]。

LncRNA是一類不具備編碼蛋白能力的RNA,能夠通過(guò)與蛋白質(zhì)、RNA等大分子結(jié)合調(diào)控基因的翻譯、轉(zhuǎn)錄過(guò)程,從而促進(jìn)相關(guān)疾病的發(fā)生與發(fā)展[14]。有研究表明LncRNA與肺癌、胃癌、肝細(xì)胞癌等多種癌癥發(fā)生密切相關(guān)[15-16],并且Li等[17]報(bào)道LncRNA對(duì)NSCLC具有較高診斷準(zhǔn)確率。在本研究中,NSCLC組織中LINC00707表達(dá)水平顯著高于癌旁組織(P<0.05);Chen等[18]的研究結(jié)果顯示,肺炎患兒體液LINC00707表達(dá)水平相較于對(duì)照組升高,表明LINC00707表達(dá)水平的升高與肺部疾病發(fā)生密切相關(guān),本研究結(jié)果與之一致。而對(duì)LINC00707表達(dá)水平與患者臨床病理特征關(guān)系分析結(jié)果顯示,TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移、分化程度為低分化的NSCLC患者癌組織中LINC00707呈現(xiàn)高表達(dá)水平,說(shuō)明LINC00707表達(dá)水平的升高不僅能夠促使NSCLC發(fā)生,還與NSCLC惡性程度密切相關(guān),可能作為預(yù)測(cè)NSCLC患者預(yù)后狀態(tài)的特異性指標(biāo)。

miRNA是一種內(nèi)源性非編碼單鏈小分子,國(guó)內(nèi)外大量研究表明,miRNA能夠通過(guò)調(diào)控其靶基因轉(zhuǎn)錄與翻譯來(lái)影響腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲過(guò)程[19],miR-382-5p屬于miRNA家族中的一員,在口腔鱗狀細(xì)胞癌、乳腺癌、胃癌等惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用[20-22],但對(duì)NSCLC的影響研究較少。本研究中,NSCLC組織中miR-382-5p表達(dá)水平與癌旁組織相比明顯較低(P<0.05),劉博等[23]研究也表明,肺癌患者血清miR-382-5p表達(dá)量相較于健康對(duì)照組明顯降低,本研究結(jié)果與之一致。進(jìn)一步分析miR-382-5p表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系,結(jié)果顯示,TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移、分化程度為低分化的患者miR-382-5p則呈現(xiàn)出低表達(dá)水平(P<0.05),這說(shuō)明miR-382-5p低表達(dá)會(huì)促使癌細(xì)胞增殖、分化及轉(zhuǎn)移,促進(jìn)NSCLC發(fā)展。相關(guān)性分析結(jié)果顯示,NSCLC組織中LINC00707與miR-382-5p的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.692,P<0.05),說(shuō)明二者對(duì)NSCLC的發(fā)生起到相反作用。Chen等[18]的研究結(jié)果也顯示,患有肺炎的嬰兒血清中LINC00707水平升高而miR-382-5p水平降低,本研究結(jié)果與之一致。采用Kaplan-Meier法分析LINC00707與miR-382-5p表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系,結(jié)果顯示,LINC00707低表達(dá)及miR-382-5p高表達(dá)患者的3年生存率較高,結(jié)合多因素Cox回歸分析結(jié)果來(lái)看,LINC0070、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、miR-382-5p是NSCLC患者預(yù)后的影響因素,提示應(yīng)關(guān)注上述因素,以便及時(shí)對(duì)患者采取干預(yù)措施,改善預(yù)后。

綜上所述,NSCLC組織中LINC00707表達(dá)較高,miR-382-5p表達(dá)則較低,二者是影響NSCLC患者預(yù)后的敏感指標(biāo)。然而LINC0070及miR-382-5p對(duì)NSCLC的具體影響機(jī)制還需進(jìn)一步探究。