馬夢(mèng)情, 孫嘉玲,胡 銳,3,馮文杏,韓志毅, 孫新鋒,馬文峰,張 衛(wèi),陳劍平,周小舟

[1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院,廣東 廣州 510006;2.深圳市中醫(yī)院國(guó)家臨床肝病(中醫(yī))重點(diǎn)專(zhuān)科,廣東 深圳 518033;3. 澳門(mén)科技大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院,澳門(mén) 999078;4. 深圳市中醫(yī)院中藥制劑研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 深圳 518033]

原發(fā)性肝癌(primary liver cancer,PLC)屬于惡性腫瘤,發(fā)病率逐年增加,死亡率位居全球癌癥第二[1]。西醫(yī)對(duì)于PLC的治療方式有限,且大部分患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于中晚期,治療上以介入、放化療為主,后期副作用較大,易復(fù)發(fā)以及預(yù)后差[2]。隨著中醫(yī)藥在癌癥中的參與度逐漸增加,中醫(yī)在改善腫瘤患者癥狀、生活質(zhì)量以及縮小病灶等方面存在獨(dú)特優(yōu)勢(shì)[3]。中醫(yī)認(rèn)為肝癌致病主要與正氣虧虛,臟腑功能氣血失衡,氣機(jī)郁滯,痰瘀釀毒久羈,從而有形腫塊盤(pán)踞腹內(nèi)。芪術(shù)抗癌方(Qizhu anti-cancer prescription,QZACP)由廣州中醫(yī)藥大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院肝病專(zhuān)家周小舟教授擬定,已應(yīng)用于臨床近十年,并獲得了國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利(專(zhuān)利號(hào):ZL20161 0843303.9)。該方針對(duì)PLC本虛標(biāo)實(shí)的基本病機(jī),以扶正抗癌為基本治療原則,其中黃芪、白術(shù)、黨參補(bǔ)脾益氣,山藥健脾補(bǔ)腎,雞內(nèi)金既可軟堅(jiān)又可散結(jié),柴胡疏肝行氣,莪術(shù)、白花蛇舌草活血逐瘀,炙甘草調(diào)和諸藥,全方共奏健脾益氣,活血化瘀之效[4]。前期研究表明,QZACP聯(lián)合經(jīng)肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)(Transcatheter Arterial Chemoembolization,TACE)較單純TACE相比可以改善PLC患者的生活質(zhì)量,延長(zhǎng)存活時(shí)間[5]。并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)QZACP方可以影響肝癌細(xì)胞上皮間質(zhì)化[6],但其相關(guān)機(jī)制尚未闡明。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)利用大數(shù)據(jù)平臺(tái)從多層面闡述中藥復(fù)方的作用機(jī)制,通過(guò)確定藥物-疾病的共同靶點(diǎn),蛋白互作,相關(guān)通路富集分析以及分子對(duì)接預(yù)測(cè)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn),為驗(yàn)證QZACP治療PLC提供有效及合理依據(jù),為進(jìn)一步研究提供新思路。

1 材料與方法

1.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

1.1.1數(shù)據(jù)庫(kù)與軟件 研究所用數(shù)據(jù)庫(kù)與軟件,見(jiàn)Tab 1。

1.1.2芪術(shù)抗癌方成分及靶點(diǎn)的篩選 通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)(TCMSP)檢索出QZACP中黃芪、白術(shù)、白芍、柴胡、山藥、薏苡仁、白花蛇舌草、莪術(shù)、雞內(nèi)金、甘草十種藥物的靶點(diǎn)成分。以生物口服利用度OB≥30%、藥物相似性DL≥0.18對(duì)成分進(jìn)行篩選。由于TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)獲得“莪術(shù)”相關(guān)化合物較少,另外沒(méi)有“雞內(nèi)金”的相關(guān)化合物,因此利用BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù),以截止值Score cutoff ≥20且P-value cutoff<0.05為篩選條件,得到成分在Pubchem及Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)將靶蛋白進(jìn)行處理。將各數(shù)據(jù)庫(kù)篩得的成分相關(guān)靶點(diǎn)去除重復(fù)后合并,得到QZACP的成分靶點(diǎn)數(shù)據(jù)集,利用Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)將得到的靶蛋白名稱(chēng)進(jìn)行處理。

1.1.3原發(fā)性肝癌(PLC)靶點(diǎn)的收集及藥物靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 在OMIM、Drugbank、GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)中分別檢索關(guān)鍵詞“hepatocellular carcinoma”“Liver cancer”來(lái)獲取PLC的疾病靶點(diǎn)。通過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)中將靶點(diǎn)簡(jiǎn)稱(chēng)進(jìn)行處理,并構(gòu)建PLC的疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)集。取QZACP篩得成分和PLC的交集靶點(diǎn)后繪制venn圖。

1.1.4中藥復(fù)方網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 對(duì)QZACP成分與PLC的交集靶點(diǎn)進(jìn)行處理,通過(guò)Cytoscape 3.9.1軟件構(gòu)建QZACP-有效成分-交集靶基因的藥物調(diào)控網(wǎng)絡(luò)圖;QZACP、有效成分及交集靶基因用“節(jié)點(diǎn)”表示,“節(jié)點(diǎn)”之間的相互連接用“邊”表示。

1.1.5PPI蛋白互作網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖構(gòu)建 通過(guò)String網(wǎng)站構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò),生物種屬選擇“homo sapiens”,設(shè)置網(wǎng)絡(luò)參數(shù)“medium con fidence”>0.400,同時(shí)去除游離無(wú)連接的節(jié)點(diǎn),其他參數(shù)的設(shè)置保持默認(rèn),繪制得到PPI網(wǎng)絡(luò)[7]。在PPI網(wǎng)絡(luò)中,利用節(jié)點(diǎn)的大小及顏色深淺凸顯Degree值大小,邊的粗細(xì)情況則反映了組合分?jǐn)?shù)(combine score)的大小。通過(guò)CytoNCA插件對(duì)核心聚類(lèi)蛋白進(jìn)行分析得到核心作用靶點(diǎn)。

Tab 1 Related databases and application software

1.1.6GO功能及KEGG通路富集分析 借助DAVID平臺(tái)對(duì)交集基因進(jìn)行GO功能富集分析和KEGG通路富集處理,以P<0.001為篩選條件進(jìn)行關(guān)鍵靶基因的GO功能富集分析。根據(jù)P值排除寬泛通路后,篩選出前20者使用R 4.1.1軟件進(jìn)行可視化,另外通過(guò)KEGG通路分析得到通路圖。

1.1.7分子對(duì)接 利用分子對(duì)接研究QZACP的關(guān)鍵成分與核心靶點(diǎn),首先在PubChem 數(shù)據(jù)庫(kù)獲取化合物的2D結(jié)構(gòu),并通過(guò)Chem3D優(yōu)化為3D結(jié)構(gòu),進(jìn)行能量最小化處理后保存為mol2格式。在PDB數(shù)據(jù)庫(kù)下載核心靶點(diǎn)的pdb格式,利用pymol軟件去水處理。通過(guò)AutoDock-Vina軟件對(duì)分子對(duì)接獲得結(jié)合能,最后Pymol進(jìn)行可視化處理。

1.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

1.2.1材料與試劑 人肝癌細(xì)胞Huh-7購(gòu)自廣州速研生物科技有限公司。雄性BALB/c裸鼠,4-6周齡,購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;一般飼養(yǎng),恒溫(23±2) ℃,濕度在40%～60%,照明晝夜交替,自由飲水與進(jìn)食。QZACP(黃芪20 g、炒白術(shù)15 g、柴胡10 g、白芍10 g、薏苡仁30 g、淮山15 g、雞內(nèi)金10 g、莪術(shù)10 g、白花蛇舌草10 g、炙甘草5 g)中藥材由深圳市中醫(yī)院提供。EGFR(GB111504)購(gòu)買(mǎi)于Servicebio生物技術(shù)公司;AKT1(A5023)購(gòu)買(mǎi)于selleck公司;STAT3(ab68153)、山羊抗兔IgG H&L(ab6721)購(gòu)買(mǎi)于Abcam公司。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)中科產(chǎn)業(yè)控股(深圳)有限公司動(dòng)物福利倫理委員會(huì)批準(zhǔn),批準(zhǔn)號(hào):20220070。

1.2.2動(dòng)物模型構(gòu)建及給藥 將裸鼠隨機(jī)分為模型組和QZACP組,每組4只。收獲對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肝癌細(xì)胞Huh-7,使用PBS將細(xì)胞懸液濃度調(diào)整為1×1010L-1,于每只裸鼠右側(cè)腋窩皮下注射125 uL細(xì)胞懸液。于造模后第2天灌胃給藥,根據(jù)人與鼠藥物劑量換算公式算出小鼠每日給藥劑量,QZACP組每日按21.2 g·kg-1灌胃,模型組每日給相同劑量的生理鹽水灌胃[8]。于第8天開(kāi)始隔天用游標(biāo)卡尺測(cè)量皮下瘤的長(zhǎng)和寬,使用公式:體積=長(zhǎng)×寬2×0.5,計(jì)算腫瘤的體積,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。于造模第20天,用異氟烷吸入麻醉,留皮下瘤組織用于進(jìn)一步檢測(cè)。

1.2.3HE染色 取出腫瘤組織,4%多聚甲醛固定組織48 h左右,梯度乙醇及二甲苯脫水,每步15～20 min,石蠟包埋備用。切片后用HE進(jìn)行染色、封片,在顯微鏡下觀察組織病理學(xué)改變。

1.2.4蛋白印跡法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)相關(guān)蛋白的表達(dá) 利用RIPA裂解液提取組織蛋白,BCA法測(cè)定蛋白濃度并計(jì)算,使用SDS-PAGE電泳分離蛋白并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,轉(zhuǎn)膜成功后,在5%脫脂牛奶中封閉1 h后,與STAT3(1 ∶1 000)、EGFR(1 ∶1 000)、AKT1(1 ∶1 000)抗體在4 ℃搖床中孵育過(guò)夜,次日TBST洗膜3次后,與二抗(1 ∶2 000,羊抗兔)室溫下孵育1 h,檢測(cè)到的蛋白質(zhì)用使用超敏ECL發(fā)光溶液顯影后分析。

2 結(jié)果

2.1 QZACP成分及靶點(diǎn)篩選通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)搜索QZACP的相關(guān)藥物的所有化學(xué)成分,共得到184個(gè)活性化合物。在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)未查到雞內(nèi)金,然后利用BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)檢索雞內(nèi)金活性成分7個(gè),并通過(guò)BATMAN-TCM補(bǔ)充莪術(shù)成分6個(gè)。刪除重復(fù)成分后共獲得QZACP活性化合物177個(gè),通過(guò)SwissTarget數(shù)據(jù)庫(kù)檢索得到上述成分的的靶點(diǎn),刪去重復(fù)值后得到關(guān)鍵靶點(diǎn)有625個(gè)。

2.2 PLC靶點(diǎn)及藥物可能作用的靶點(diǎn)通過(guò)OMIM、drugbank、GeneCards3個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)獲得8 227個(gè),刪除重復(fù)值后得到452個(gè)。將疾病基因與藥物靶點(diǎn)作Venn圖,得到共有靶點(diǎn)98個(gè),見(jiàn)Fig 1。

Fig 1 Venn diagram of drug-disease target intersection

2.3 中藥-活性成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)關(guān)系構(gòu)建利用Cytoscape3.6.1,將QZACP篩選得到的625個(gè)交集靶點(diǎn)、相關(guān)活性成分以及PLC的靶點(diǎn)構(gòu)建"中藥 -活性成分 -靶點(diǎn) -疾病"網(wǎng)絡(luò)圖。并通過(guò)Analyze network計(jì)算獲得相關(guān)節(jié)點(diǎn)的度值(Degree)、中心性(Betweenness centrality),度值越大則表示該化合物發(fā)揮治療作用的可能越大。Analyze network分析顯示關(guān)鍵活性成分主要為Quercetin(槲皮素)、3,22-dihydroxy-11-oxo-delta(12)-oleanene-27-alpha-methoxycarbonyl-29-oic acid(甘草酸苷)、Denudatin B(白玉蘭素B)等(Tab 2)。

Tab 2 The potential active ingredients of QZACP

2.4 PPI蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建將獲得的數(shù)據(jù)錄入String數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行蛋白互作,然后用Cytoscape 3.9.1進(jìn)行分析獲得Degree值,見(jiàn)Fig 2。平均degree值為44.7,圖中degree值越大則顏色越深點(diǎn)越大。并利用CytoNCA插件對(duì)關(guān)鍵蛋白進(jìn)行分析,以Betweenness、Closeness、Degree等3個(gè)值為篩選條件,經(jīng)過(guò)兩次篩選獲得10個(gè)核心基因作用網(wǎng)絡(luò),見(jiàn)Fig 3。

Fig 2 Network diagram of potential target

2.5 GO富集分析和KEGG通路富集分析通過(guò)DAVID進(jìn)行GO富集分析共得到861個(gè)分析條目,其中生物過(guò)程有681條,細(xì)胞組成有59條,分子功能有121條。分析前20的GO條目發(fā)現(xiàn),QZACP治療PLC可能對(duì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因表達(dá)的正向調(diào)控、凋亡過(guò)程的負(fù)調(diào)控、細(xì)胞增殖的正調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控等生物過(guò)程密切相關(guān);分子功能集中在ATP結(jié)合、酶結(jié)合、蛋白酪氨酸激酶活性、蛋白質(zhì)結(jié)合等方面;細(xì)胞組分有胞核、胞質(zhì)基質(zhì)等(Fig 4)。KEGG富集分析篩選到162相關(guān)通路,主要與癌癥通路、PI3K/Akt通路、MAPK通路、腫瘤中的微小RNA、人乳頭瘤病毒感染等密切相關(guān),見(jiàn)Fig 4。根據(jù)中藥-成分-靶點(diǎn)圖、PPI蛋白互作、KEGG通路富集結(jié)果,選擇STAT3、EGFR、AKT1為接下來(lái)對(duì)接預(yù)測(cè)的關(guān)鍵蛋白。

2.6 分子對(duì)接Quercetin(槲皮素)、3,22-dihydroxy-11-oxo-delta(12)-oleanene-27-alpha-methoxycarbonyl-29-oic acid(甘草酸苷)、Denudatin B(白玉蘭素B)與STAT3、EGFR、AKT1等關(guān)鍵蛋白進(jìn)行了9次分子對(duì)接(Tab 3),結(jié)果顯示關(guān)鍵靶點(diǎn)與成分化合物均有較好的結(jié)合能。Quercetin是健脾藥物共有的活性成分,STAT3與Quercetin的結(jié)合能力較強(qiáng)。3,22-dihydroxy-11-oxo-delta(12)-oleanene-27-alpha-methoxycarbonyl-29-oic acid(甘草酸苷)與STAT3、EGFR、AKT等靶點(diǎn)均有較好的結(jié)合能力及穩(wěn)定性。通過(guò)Pymol軟件將分子對(duì)接結(jié)果進(jìn)行優(yōu)化如Fig 5可知Quercetin與STAT3中的LYS-344、GLU-331、THR-341這3個(gè)氨基酸有較強(qiáng)的氫鍵作用。3,22-dihydroxy-11-oxo-delta(12)-oleanene-27-alpha-methoxycarbonyl-29-oic acid與AKT1中的GLN-113、TRP-80、SER-56這3個(gè)氨基酸有較強(qiáng)的氫鍵作用。說(shuō)明槲皮素與甘草酸苷對(duì)QZACP藥效發(fā)揮作用有重要影響,為研究QZACP對(duì)PLC的作用機(jī)制提供了理論參考。

Fig 3 Core gene screening

Fig 4 Visual analysis diagram of biological process,cell composition,molecular function and KEGG

2.7 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)20 d治療后,模型組、QZACP組腫瘤質(zhì)量分別為(1.16±0.19) g、(0.57±0.07) g,與模型組相比,QZACP組腫瘤質(zhì)量明顯降低(P<0.01)(Fig 6A)。模型組、QZACP組腫瘤體積分別為(1.2±0.4) cm3、(0.3±0.1) cm3,與模型組對(duì)比,QZACP組腫瘤體積明顯減小(P<0.05)(Fig 6B、C)。此外,經(jīng)QZACP處理后,與模型組相比,原位移植瘤中的STAT3、EGFR、AKT1等蛋白的表達(dá)均明顯降低(Fig 6D)。HE染色后顯微鏡下可見(jiàn)原位移植瘤的面積也隨QZACP劑量增加逐漸減少 (Fig 6E),QZACP組腫瘤細(xì)胞減少,細(xì)胞形態(tài)較為完整(紅色箭頭處);模型組腫瘤細(xì)胞較多,細(xì)胞核明顯增大,核仁明顯,肝板排列紊亂,血管較多(紅色箭頭處)。

Fig 5 Molecular docking diagram

Fig 6 In vivo test

3 討論

本課題組成員在前期研究中多角度闡述了QZACP對(duì)PLC的調(diào)控。通過(guò)回顧性研究發(fā)現(xiàn),中藥QZACP聯(lián)合TACE較單純TACE可以提高BCLC B期和C期HCC患者的KPS評(píng)分,提高1年、3年、5年的生存率,表明QZACP聯(lián)合TACE可提高BCLC B期和C期HCC患者的生活質(zhì)量,并延長(zhǎng)其存活時(shí)間[5]。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),QZACP通過(guò)調(diào)控肝癌上皮間質(zhì)化來(lái)延緩肝癌進(jìn)展[6]。

本研究通過(guò)分析發(fā)現(xiàn),槲皮素、甘草酸苷、白玉蘭素B可能是QZACP治療PLC的關(guān)鍵成分化合物。其中在黃芪、白花蛇舌草、柴胡、炙甘草等中均含有槲皮素,該活性成分在該方中含量較高,結(jié)合關(guān)鍵靶點(diǎn)較多,抗癌作用較為明顯(Tab 2)。槲皮素可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡[9]。此外,鄭巖松等[10]發(fā)現(xiàn),槲皮素能夠通過(guò)降低SMMC-7721細(xì)胞遷移及侵襲活性,增加E-cadherin表達(dá),降低N-cadherin和Vimentin蛋白,阻止或緩解肝癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。甘草酸苷可以特異性地與半聚體PGRMC1結(jié)合,抑制了PGRMC1和EGFR之間的相互作用,從而抑制了癌癥進(jìn)展所需的EGFR介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo),另外其可以明顯增強(qiáng)了EGFR抑制劑厄洛替尼或順鉑(CDDP)誘導(dǎo)的人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞的死亡[11]。PAF是一種血小板活化因子,可以明顯增強(qiáng)了乳腺癌細(xì)胞遷移和乳腺癌介導(dǎo)的破骨細(xì)胞的生成,白玉蘭素可以作為天然PAF拮抗劑可通過(guò)部分阻斷PAF/PTAFR信號(hào)通路而有效減弱乳腺癌的進(jìn)展[12]。白玉蘭素B是白玉蘭素的異構(gòu)體,但目前在腫瘤方面的研究仍然有限。該方治療PLC的關(guān)鍵靶點(diǎn)有STAT3、EGFR、AKT1等,在癌癥中EGFR常見(jiàn)的下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路為PI3K/Akt、MAPK信號(hào)通路[13],而AKT為PI3K/Akt信號(hào)通路的核心。AKT又稱(chēng)為蛋白激酶B(PKB),是在如葡萄糖代謝、凋亡、細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)錄及細(xì)胞遷移等多種細(xì)胞過(guò)程中起到重要作用的一種絲氨酸/蘇氨酸特異性蛋白激酶,有研究表明AKT通路是IL-8誘導(dǎo)癌細(xì)胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移的主要下游信號(hào)通路[14],Sun等[15]研究發(fā)現(xiàn),敲除IL-8 降低了整合素β3、p-PI3K和p-Akt的水平,減弱了肝細(xì)胞癌細(xì)胞侵襲力。轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT3)是調(diào)節(jié)抗腫瘤免疫反應(yīng)的核心,NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)是炎癥引起的致癌和抗腫瘤免疫的重要信號(hào)通路,而STAT3與NF-κB之間的相互作用促進(jìn)了腫瘤進(jìn)展[16]。

Tab 3 Docking and binding of compounds in QZACP with target

通過(guò)KEGG富集分析發(fā)現(xiàn),PI3K/Akt是芪術(shù)PI3K/Akt信號(hào)通路圖譜抗癌方治療PLC可能的關(guān)鍵通路(Tab 4,Fig 7)。Zhao等[17]研究表明,FGFR3與表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)共表達(dá),FGFR3 通過(guò)促進(jìn) EGFR 磷酸化來(lái)激活PI3K/Akt信號(hào)的傳導(dǎo),以促進(jìn)卵巢癌的順鉑耐藥性。Ma等[18]發(fā)現(xiàn),CD73產(chǎn)生的腺苷與腺苷A2A受體(A2AR)結(jié)合并激活Rap1,后者可以將P110β招募到質(zhì)膜并觸發(fā)PIP3的產(chǎn)生,從而激活PI3K/Akt信號(hào)通路,以促進(jìn)肝細(xì)胞癌的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)移及進(jìn)展。這提示了調(diào)控PI3K/Akt信號(hào)通路可能是抑制PLC侵襲擴(kuò)散的緣由所在。總之,PI3K/Akt信號(hào)通路可能是QZACP治療PLC的關(guān)鍵。

分子對(duì)接結(jié)果顯示,QZACP的關(guān)鍵化合物與STAT3、EGFR、AKT1等蛋白靶點(diǎn)匹配良好,并通過(guò)了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了進(jìn)一步探索,初步證明了QZACP的藥效機(jī)制。根據(jù)PPI蛋白互作及KEGG通路富集結(jié)果,PI3K/Akt通路可通過(guò)介導(dǎo)STAT3、EGFR等上游因素來(lái)影響肝癌的生物學(xué)功能。但是槲皮素、甘草酸苷等活性成分單體通過(guò)PI3K/AKt信號(hào)通過(guò)對(duì)肝癌影響的研究目前尚有限,下一步研究中可進(jìn)一步驗(yàn)證槲皮素、甘草酸苷等通過(guò)PI3K/AKt信號(hào)通路來(lái)影響肝癌的發(fā)生發(fā)展。

Fig 7 Map of PI3K/Akt signaling pathway

Tab 4 Signaling pathway of QZACP in treating PLC

綜上所述,QZACP治療PLC以“扶正抗癌”為基本治療原則,具有益氣活血等作用,具體的藥效機(jī)制可能與PI3K/Akt信號(hào)通路有關(guān)。隨著現(xiàn)代化科技進(jìn)步,網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)通過(guò)各大平臺(tái)數(shù)據(jù)庫(kù)、生物信息學(xué)預(yù)測(cè)等對(duì)中藥復(fù)方進(jìn)行現(xiàn)代化闡述,為后續(xù)團(tuán)隊(duì)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證提供了方向,并具有較好的創(chuàng)新性。中藥及活性單體多靶點(diǎn)、多途徑的優(yōu)勢(shì)對(duì)于臨床診療具有一定的意義,但其具體機(jī)制有待團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步驗(yàn)證與挖掘。