劉攀月,曾 瓏,肖海茵,肖菲菲,朱 蕊,楊 慧,鄺素娟,鄧春玉,饒 芳,魏 薇

(1.華南理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院,廣東 廣州 510006;2.廣東省心血管病研究所心內(nèi)科,廣東省人民醫(yī)院,廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院,廣東 廣州 510080)

作為最常見的快速性心律失常之一,心房顫動(dòng)(房顫,atrial fibrillation,AF)患者心臟衰竭、中風(fēng)和外周血栓栓塞的風(fēng)險(xiǎn)增加。高血壓(hypertension,HTN)是AF發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,流行病學(xué)研究顯示,HTN使新發(fā)AF的風(fēng)險(xiǎn)增加1.8倍,使永久性AF的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加1.5倍[1]。HTN患者由于高靜水壓、牽張力和神經(jīng)激素等影響,左心房發(fā)生彌漫性電重塑,使AF易于發(fā)生。電重塑是指由心房肌細(xì)胞中Ca2+或者K+通道密度改變導(dǎo)致動(dòng)作電位時(shí)程(action potential duration,APD)縮短,折返的發(fā)生和電特性的改變,其中L型鈣通道蛋白(L-type calcium channel α1C,Cav1.2)的減少及L型鈣電流(L-type calcium current,ICa,L)的減少是APD縮短的主要原因[2]。前期研究表明,高靜水壓下HL-1細(xì)胞發(fā)生ICa,L和超速延遲整流鉀電流(Ikur)改變,AF易感性增加[3-4],但高血壓致AF的具體分子機(jī)制尚不清楚。

轉(zhuǎn)錄后修飾可調(diào)控細(xì)胞新陳代謝、細(xì)胞增殖和細(xì)胞遷移等,與心血管疾病密切相關(guān)[5]。m6A修飾屬于轉(zhuǎn)錄后修飾的一種類型,由各種轉(zhuǎn)甲基化酶(METTL3、METTL14、RBM15、RBM15B、KIAA1429、WTAP等)和去甲基化酶(FTO和ALKBH5)動(dòng)態(tài)調(diào)控。轉(zhuǎn)甲基化酶或去甲基化酶與靶RNA結(jié)合后,可通過添加/去除m6A修飾調(diào)節(jié)RNA的生理過程,如穩(wěn)定性、定位、剪接、翻譯等生理過程[6]。研究表明,m6A修飾可間接參與心肌細(xì)胞電活動(dòng),冠狀動(dòng)脈結(jié)扎誘導(dǎo)心梗小鼠模型METTL3明顯升高,m6A修飾小膠質(zhì)細(xì)胞中Toll樣受體4 mRNA,從而增強(qiáng)交感神經(jīng)活動(dòng)誘導(dǎo)室性心律失常的發(fā)生[7];m6A修飾可直接參與心肌細(xì)胞電活動(dòng),敲除FTO的小鼠發(fā)生心臟電學(xué)重塑和結(jié)構(gòu)重塑,心率變異性增加、心室復(fù)極化時(shí)程改變,表明m6A甲基化的增加可以使小鼠更容易發(fā)生快速性心律失常[8]。然而,依賴于METTL3的m6A修飾是否在HTN致AF的電生理機(jī)制中發(fā)揮表觀遺傳作用還有待確定。我們擬通過本研究探討METTL3介導(dǎo)的m6A修飾是否參與高靜水壓對(duì)ICa,L的調(diào)控,進(jìn)而促進(jìn)房顫的發(fā)生發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器抗m6A抗體(Synaptic Systems,202003);抗METTL3抗體(Abcam,ab195352);抗Cav1.2抗體(Alomone,ACC003AN7108);抗GAPDH抗體(Proteintech,60004-1-I);兔二抗(Jackson ImmunoResearch,111-035-003);鼠二抗(Jackson ImmunoResearch,111-015-003);STM2457(MedChemExpress,2499663-01-1);亞甲藍(lán)(BioReagent,M4159-25G);反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Accurate Biotechnology,AG11734);預(yù)混型qPCR試劑盒(Accurate Biotechnology,AG11733);熒光定量PCR儀(qTOWER3 G);RIP試劑盒(BersinBio,Bes5101);紫外交聯(lián)儀(ZIXING1793);正置熒光顯微鏡(Nikon,80i);EPC10膜片鉗放大器及附件(HEKA)。

1.2 方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)C57BL/6J雄性小鼠(35 g左右),使用Alzet微滲透泵持續(xù)皮下泵入血管緊張素4周(給藥劑量為1 000 ng·kg-1·min-1),構(gòu)建HTN模型小鼠(n=6)。選取另外6只性別、體質(zhì)量匹配的C57BL/6J小鼠作為對(duì)照,動(dòng)物從湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司購買,許可證號(hào)為SCXK(湘)2019-0004。小鼠模型造模成功后留取心房組織,分裝后放入液氮速凍再保存至-80 ℃冰箱。本研究已經(jīng)通過廣東省人民醫(yī)院(廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)審查(No 201904010451)。

1.2.2細(xì)胞培養(yǎng)與干預(yù) 本研究所使用的小鼠心房肌細(xì)胞系HL-1由美國路易斯安那州立大學(xué)William Claycomb教授慷慨贈(zèng)送。Claycomb專用培養(yǎng)基、10%胎牛血清、0.1 mmol·L-1去甲腎上腺素和2 mmol·L-1左旋-谷氨酰胺培養(yǎng)細(xì)胞。待細(xì)胞密度長至約80%時(shí),使用0.05%胰酶消化后將細(xì)胞種于3.5 mm×10 mm小皿中進(jìn)行后續(xù)干預(yù)實(shí)驗(yàn)。以常壓(0 mmHg)作為對(duì)照,設(shè)置了不同壓力梯度(20、40 mmHg)干預(yù)細(xì)胞48 h。為了觀察干預(yù)METTL3能否逆轉(zhuǎn)高靜水壓下Cav1.2的下調(diào),分別利用 STM2457 和si-METTL3來干預(yù)METTL3的功能和合成,設(shè)置對(duì)照組、高壓+DMSO組、高壓+STM2457組、高壓+陰性對(duì)照si-ctrl組及高壓+si-METTL3組。STM2457 配制濃度1、3、10 μmol·L-1,陰性對(duì)照si-ctrl和si-METTL3(CAAGGAAGAGTGCATGAAA)配制成50 nmol·L-1分別轉(zhuǎn)染HL-1細(xì)胞。

1.2.3斑點(diǎn)印跡實(shí)驗(yàn) 提取組織或細(xì)胞中RNA后檢測(cè)濃度,將一定量的RNA滴于N+尼龍膜上,自然風(fēng)干尼龍膜后置于紫外交聯(lián)儀下照射10 min,5%脫脂牛奶進(jìn)行室溫封閉2 h,1 ∶1 000稀釋的抗m6A抗體過夜孵育N+尼龍膜。隨后兔二抗(1 ∶5 000)室溫孵育1 h,PBST 5 min洗3次后置于化學(xué)發(fā)光成像儀下顯影。顯影后0.01%亞甲藍(lán)孵育N+尼龍膜10 min,在自然光下拍攝尼龍膜作為對(duì)照。

1.2.4mRNA定量檢測(cè)和蛋白定量檢測(cè) qRT-PCR和Western blot詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟見既往發(fā)表的文獻(xiàn)[9],各引物序列見Tab 1。

Tab 1 Sequences of primers used for real RT-PCR

1.2.5全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞干預(yù)充足時(shí)間后使用預(yù)熱的0.05%胰酶消化3 min,顯微鏡下可見細(xì)胞輪廓變圓終止消化,30 min后進(jìn)行全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)。使用進(jìn)液針將電極內(nèi)液注入玻璃電極后,要求入液時(shí)電極電阻達(dá)到2～5 MΩ。選取大小合適的細(xì)胞,電極尖端輕觸細(xì)胞表面可產(chǎn)生微小形變,給予些許負(fù)壓后可觀察電阻變大,待電阻達(dá)到1 GΩ(高阻封接)時(shí)使用電刺激破膜,補(bǔ)償快慢電容、串聯(lián)電阻。全細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,電壓鉗模式記錄ICa,L及膜電容(Cm),電流鉗模式記錄動(dòng)作電位(AP),最后使用Clampfit 10.4測(cè)量數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)。HL-1 ICa,L電極內(nèi)液成分:CsCL 100 mmol·L-1,TEA-CL 20 mmol·L-1,EGTA 10 mmol·L-1,HEPES 10 mmol·L-1,Tris將pH調(diào)至7.2;ICa,L細(xì)胞外液成分:TEA-CL 140 mmol·L-1,CaCl2·2H2O 5 mmol·L-1,MgCl2·6H2O 2 mmol·L-1,HEPES 10 mmol·L-1,Glucose·H2O 10 mmol·L-1,Tris將pH調(diào)至7.4;HL-1 AP電極內(nèi)液成分:KCl 140 mmol·L-1,MgCl2·6H2O 1 mmol·L-1,HEPES 10 mmol·L-1,EGTA 5 mmol·L-1,KOH將pH調(diào)至7.2;AP細(xì)胞外液成分:NaCl 136 mmol·L-1,KCl 5.4 mmol·L-1,MgCl2·6H2O 1.0 mmol·L-1,NaH2PO4·2H2O 0.33 mmol·L-1,HEPES 238.3 mmol·L-1,D-Glucose 10 mmol·L-1,CaCl2·2H2O 1.8 mmol·L-1,NaOH將pH調(diào)至7.4。

1.2.6RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn) 使用BersinBio RIP試劑盒(BersinBio,Bes5101)進(jìn)行RIP實(shí)驗(yàn),根據(jù)試劑的說明書,使用裂解緩沖液收集細(xì)胞,并將裂解后的RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物與轉(zhuǎn)載IgG或抗METTL3抗體(Abcam,ab195352,1 ∶100)的磁珠4 ℃過夜孵育,RIP洗滌緩沖液將磁珠-蛋白-RNA復(fù)合物于4 ℃搖床上洗滌10 min,然后用RIP裂解緩沖液于4 ℃搖床上洗滌5 min,收集洗脫下來的含有RNA的上清,并用TRIzol/氯仿/異丙醇提取RNA,利用qRT-PCR檢測(cè)RNA的表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 HTN小鼠左心房組織RNA m6A表達(dá)增加及形態(tài)學(xué)改變斑點(diǎn)印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與對(duì)照組野生型(WT)小鼠相比,HTN組小鼠左心房組織中m6A含量增加(定量為400 ng時(shí),P<0.01;定量為200 ng時(shí),P<0.05)(Fig 1A-B);相較于WT組小鼠,HE染色提示,HTN組小鼠左心房心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)更為紊亂,同時(shí)間質(zhì)含量增加,Masson染色提示HTN小鼠左心房組織膠原含量增加(Fig 1C)。m6A的含量是否與HTN小鼠發(fā)生心房重塑有關(guān)還需進(jìn)一步探究。

2.2 HTN小鼠左心房組織METTL3,Cav1.2的表達(dá)減少RNA m6A水平主要是由轉(zhuǎn)甲基化酶和去甲基化酶介導(dǎo),因此我們進(jìn)一步檢測(cè)了WT和HTN組小鼠左心房組織中,轉(zhuǎn)甲基化酶METTL3、METTL14、RBM15、RBM15B、KIAA1429、WTAP和去甲基化酶FTO、ALKBH5的RNA表達(dá)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與WT組相比,HTN組小鼠心房組織中METTL3明顯增加(P<0.01),而FTO、KIAA1429則明顯下調(diào)(P<0.05)(Fig 1D)。我們進(jìn)一步在蛋白水平驗(yàn)證METTL3的表達(dá)改變,發(fā)現(xiàn)結(jié)果與mRNA水平一致(P<0.01),同時(shí)Cav1.2在HTN組中明顯減少(P<0.01)(Fig 1E-F)。Cav1.2的減少是否與METTL3介導(dǎo)的m6A修飾有關(guān)需進(jìn)一步驗(yàn)證。

2.3 高靜水壓對(duì)HL-1細(xì)胞RNA m6A、METTL3、Cav1.2的影響體外予以不同的靜水壓(20 mmHg和40 mmHg)模擬心房高壓的病理狀態(tài),斑點(diǎn)印跡實(shí)驗(yàn)顯示HL-1中m6A的含量隨著靜水壓的增加而增加(P<0.01 in 20 mmHg,P<0.01 in 40 mmHg)(Fig 2A,B),同時(shí)HL-1細(xì)胞中METTL3蛋白的含量隨著靜水壓的升高而增加(P<0.01 in 20 mmHg,P<0.01 in 40 mmHg),而Cav1.2蛋白表達(dá)則隨著靜水壓的升高而降低(P<0.05 in 20 mmHg,P<0.01 in 40 mmHg)(Fig 2C,D)。提示高靜水壓下心房肌細(xì)胞RNA m6A、METTL3增加,同時(shí)細(xì)胞中Cav1.2減少,與動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

2.4 METTL3抑制劑STM2457逆轉(zhuǎn)高靜水壓所致的HL-1細(xì)胞Cav1.2下調(diào)為了進(jìn)一步明確METTL3在高靜水壓所致心房肌細(xì)胞的Cav1.2表達(dá)和ICa,L下降中的作用,HL-1細(xì)胞加壓之前,予METTL3的特異性抑制劑 STM2457(1、3、10 μmol·L-1)預(yù)處理細(xì)胞3 h。斑點(diǎn)印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,STM2457 對(duì)高靜水壓組的HL-1細(xì)胞具有m6A抑制作用(P<0.01 in 3,10 μmol·L-1),而相較于加壓組,STM2457使Cav1.2的表達(dá)量有所增加,并在10 μmol·L-1時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05 in 10 μmol·L-1)(Fig 3A-C)。

同時(shí)使用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄常壓下、高靜水壓下、高靜水壓+STM2457(10 μmol·L-1)各組HL-1細(xì)胞ICa,L和動(dòng)作電位(AP)。對(duì)比常壓下,使用40 mmHg高靜水壓處理HL-1細(xì)胞時(shí),細(xì)胞APD50、APD70、APD90均明顯縮短,而使用STM2457處理高靜水壓下的HL-1細(xì)胞時(shí),則APD50、APD70、APD90均有增加(P<0.05)(Fig 3D,F),但動(dòng)作電位振幅(action potential amplitude,APA)差異無顯著性(Fig 3E)。ICa,L峰值電流密度在高靜水壓組明顯降低,并在10 μmol·L-1STM2457 的干預(yù)下逆轉(zhuǎn)(峰值電壓為+10 mV時(shí),2.70±0.26 pA/pF in 0 mmHg+DMSO groupvs-1.61±0.28 pA/pF in 40 mmHg+DMSO groupvs2.25±0.45 pA/pF in 40 mmHg±STM2457 ,P<0.01)(Fig 3G-H)。各組ICa,L的激活、失活電壓-電流關(guān)系,復(fù)活時(shí)間曲線無明顯差異(P>0.05)(Fig 3I-J)。

Fig 1 Expression of m6A-modified mRNA,methylases,Cav1.2,METTL3 in left atrial

Fig 2 Effect of high hydrostatic pressure on m6A-modified mRNA,METTL3 and Cav1.2 in HL-1

2.5 敲低METTL3可逆轉(zhuǎn)高靜水壓所致的HL-1細(xì)胞Cav1.2下調(diào)敲低METTL3后觀察對(duì)高靜水壓所致心房肌細(xì)胞電重塑的逆轉(zhuǎn)作用。予METTL3 siRNAs轉(zhuǎn)染HL-1細(xì)胞后,加壓干預(yù)48 h(40 mmHg)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),成功敲低METTL3后,HL-1細(xì)胞的RNA m6A表達(dá)水平減少(P<0.01)(Fig 4A-B),說明METTL3發(fā)揮了轉(zhuǎn)甲基酶的作用。Western blot結(jié)果顯示,敲低METTL3,可使Cav1.2較對(duì)照組有增加(P<0.01)(Fig 4D-F)。為了驗(yàn)證METTL3對(duì)Cav1.2的調(diào)控作用,我們使用RIP及qRT-PCR檢測(cè)HL-1中 METTL3是否與CACNA1C結(jié)合。結(jié)果顯示,相對(duì)于IgG陰性對(duì)照,使用METTL3免疫沉淀后結(jié)合的CACNA1C明顯增加(P<0.01)(Fig 4C),說明METTL3可以直接結(jié)合CACNA1C,從而調(diào)控其蛋白Cav1.2的表達(dá),影響心房肌細(xì)胞電重塑。

Fig 3 Effect of STM2457 on m6A-modified mRNA,METTL3 and iron channel current

Fig 4 Effect of si-METTL3 in HL-1 cells after treated with hydrostatic

3 討論

研究表明:(1)與對(duì)照組相比,HTN小鼠心房間質(zhì)纖維化增加,心肌細(xì)胞分布紊亂,離子通道蛋白Cav1.2表達(dá)減少,提示高壓下誘導(dǎo)心房肌細(xì)胞發(fā)生電重塑。同時(shí)小鼠心房內(nèi)m6A表達(dá)量增加,METTL3蛋白表達(dá)升高。(2)隨著靜水壓的升高,心房肌細(xì)胞HL-1細(xì)胞Cav1.2蛋白表達(dá)減少,m6A和METTL3蛋白表達(dá)增加;抑制METTL3的功能與合成可明顯降低高靜水壓下HL-1細(xì)胞 m6A的表達(dá)以及改善HL-1細(xì)胞的電重構(gòu),同時(shí)證明了METTL3直接結(jié)合CACNA1C,從而發(fā)生轉(zhuǎn)甲基修飾引起心房肌細(xì)胞電重塑。

心房肌細(xì)胞電重塑是AF發(fā)生和維持的重要機(jī)制,特別是L型鈣通道蛋白表達(dá)的降低和ICa,L的減少造成APD縮短是AF電重塑的主要內(nèi)容,既往研究表明,在AF患者中Cav1.2的表達(dá)明顯減少,縮短了AF及患者的APD,從而提高AF的誘發(fā)率和促進(jìn)AF持續(xù)發(fā)生[10];快速起搏心房兔模型Cav1.2泛素化降解增加,縮短APD和減少ICa,L,促進(jìn)心房電重構(gòu)[11]。HTN可通過多種機(jī)制誘導(dǎo)心房肌細(xì)胞電重塑,包括改變離子通道表達(dá)、影響Ca2+的內(nèi)流和外流以及影響細(xì)胞內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài)等[12]。L型鈣通道在HTN誘導(dǎo)的心房肌細(xì)胞電重塑中發(fā)揮著重要作用,高靜水壓直接激活Piezo1,將機(jī)械力轉(zhuǎn)變?yōu)樯镄盘?hào)誘導(dǎo)心房肌細(xì)胞ICa,L的電生理重塑[13];高靜水壓培養(yǎng)下,心房肌細(xì)胞的腎素-血管緊張素系統(tǒng)被激活,由FAK-Src促進(jìn)ICa,L減小,AF易感性增加[4],與之前的研究結(jié)果一致,我們的研究結(jié)果表明,在HTN小鼠模型中Cav1.2蛋白表達(dá)明顯減少,提示HTN小鼠心房肌細(xì)胞L型鈣通道發(fā)生改變。同時(shí)HL-1施予高靜水壓(40 mmHg),APD50、APD70、APD90均明顯縮短,提示高靜水壓下心房肌細(xì)胞發(fā)生電重塑。有趣的是,高靜水壓下HL-1細(xì)胞L型鈣通道的激活、失活動(dòng)力學(xué)并未發(fā)生改變,說明ICa,L密度的降低主要由Cav1.2蛋白表達(dá)減少引起。

上述研究[4,14]都集中在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控高靜水壓下心房肌細(xì)胞電重塑,尚不清楚在此過程中L型鈣通道的表達(dá)和功能變化是否與轉(zhuǎn)錄后修飾有關(guān)。近年來,RNA的m6A甲基化修飾作為一種轉(zhuǎn)錄后修飾日益受到關(guān)注,在m6A轉(zhuǎn)甲基酶復(fù)合物中,METTL3是催化m6A甲基化的主要亞基,負(fù)責(zé)在RNA上安裝甲基,細(xì)胞失去動(dòng)態(tài)平衡時(shí),METTL3在細(xì)胞內(nèi)觸發(fā)全局mRNA甲基化,通過調(diào)節(jié)不同的mRNA亞群來決定其功能和命運(yùn)[14]。多項(xiàng)研究表明,血管緊張素II通過METTL3誘導(dǎo)心肌細(xì)胞纖維化、心肌肥厚[15];血管緊張素II以濃度依賴的方式降低HTN豚鼠心室肌細(xì)胞ICa,L峰值密度[16]。但是METTL3是否參與高壓下Cav1.2蛋白表達(dá)下降,目前尚無相關(guān)報(bào)道。因此,本研究將m6A與AF聯(lián)系起來,在高壓的作用下,無論是小鼠體內(nèi)還是心房肌細(xì)胞HL-1細(xì)胞中,m6A和METTL3均有增加,Cav1.2蛋白表達(dá)量減少;在體外使用 STM2457 處理高靜水壓下的HL-1細(xì)胞后,逆轉(zhuǎn)了高靜水壓下ICa,L的降低和APD50、APD70、APD90的縮短。同時(shí)RIP實(shí)驗(yàn)證明了METTL3與CACNA1C直接結(jié)合,表明METTL3直接參與了高靜水壓下CACNA1C的m6A修飾,進(jìn)而引起L型鈣通道蛋白表達(dá)減少,參與心房肌細(xì)胞電重塑,使AF易于發(fā)生。潘振偉教授實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)使用METTL3基因敲除小鼠來探索m6A修飾在心臟電重塑中的效應(yīng),敲除METTL3可通過減少小鼠中CACNA1C的 m6A 修飾來上調(diào) Cav1.2的表達(dá),延長APD,從而增加室性心律失常的易感性[17]。我們研究結(jié)果與潘振偉教授團(tuán)隊(duì)不一致可能是因?yàn)椴捎昧瞬煌男∈竽Ｐ?我們的是血管緊張素誘導(dǎo)的HTN模型小鼠,他們的是METTL3基因敲除雜合子小鼠)及不同的研究部位(我們研究心房,他們研究心室),但都證明了METTL3對(duì)CACNA1C具有m6A修飾作用,METTL3可直接參與心肌細(xì)胞電活動(dòng)的調(diào)控。

STM2457 是METTL3-METTL14轉(zhuǎn)甲基酶復(fù)合物的有效抑制劑,其抑制作用為競(jìng)爭性結(jié)合METTL3的甲基結(jié)合位點(diǎn),卻并未破壞METTL3-METTL14復(fù)合物的蛋白結(jié)構(gòu)。且 STM2457 對(duì)METTL3具有高度的選擇性,對(duì)其他RNA甲基轉(zhuǎn)移酶沒有抑制作用[18]?；谏鲜鲅芯?我們使用了 STM2457 抑制高靜水壓下HL-1中METTL3的轉(zhuǎn)甲基作用,逆轉(zhuǎn)了ICa,L的下調(diào),但并未在HTN模型小鼠中使用 STM2457,因此 STM2457 對(duì)HTN小鼠心房肌細(xì)胞的影響是否也像體外實(shí)驗(yàn)一樣降低AF易感性仍需進(jìn)一步探究。

然而,本研究具有以下局限性有待完善:(1)只研究了一種離子通道電流(ICa,L),而致AF易感性增加的還有其他離子通道電流,如Ikur,Ik1等;(2)未在體內(nèi)探究干預(yù)METTL3對(duì)HTN小鼠的影響,同時(shí)STM2457 在體內(nèi)是否會(huì)對(duì)其他細(xì)胞產(chǎn)生毒性效應(yīng)需進(jìn)一步探索。

綜上所述,本研究證實(shí)了METTL3是高靜水壓致AF的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,METTL3通過m6A修飾CACNA1C參與高靜水壓誘導(dǎo)的ICa,L下降,引起心房肌細(xì)胞電重塑;抑制METTL3可逆轉(zhuǎn)高靜水壓所致的Cav1.2下調(diào),緩解高靜水壓誘導(dǎo)心房肌細(xì)胞膜離子通道蛋白重塑,從而降低AF易感性。本研究為RNA表觀遺傳學(xué)參與高靜水壓致AF的發(fā)病機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù),為HTN合并AF的治療提供了潛在的途徑。