鄭樹成,張德江,陳頔,王龍,李玉柱

唐山市人民醫(yī)院 1醫(yī)學(xué)影像科,2放療科(河北唐山 063000)

鼻咽癌是惡性腫瘤的一種,其分布特征具有明顯的區(qū)域性[1]。鼻咽癌患者早期癥狀不太明顯,因其癥狀較復(fù)雜、位置隱蔽而容易出現(xiàn)誤診和漏診,發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)是中晚期,會導(dǎo)致鼻咽腔出現(xiàn)狹窄閉塞,影響患者呼吸和吞咽,還易對周圍組織進(jìn)行侵襲,嚴(yán)重影響患者預(yù)后[2]。因此對患者進(jìn)行早期診斷尤為關(guān)鍵。鼻咽癌患者多采用放化療的方法進(jìn)行治療,MRI增強(qiáng)掃描可以對鼻咽癌患者病灶和療效進(jìn)行檢查,通過對病灶的大小診斷,有利于醫(yī)師對腫瘤進(jìn)行分期和分級[3]。結(jié)直腸腫瘤差異表達(dá)基因(CRNDE)是LncRNA家族成員,是一種促癌基因,其在多種腫瘤組織中呈現(xiàn)過表達(dá)。有研究[4-5]發(fā)現(xiàn)CRNDE參與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展。神經(jīng)膜蛋白2(NRSN2)是一種小分子膜蛋白,可以調(diào)節(jié)神經(jīng),還在不同癌癥中發(fā)揮著重要作用,有研究[6-7]發(fā)現(xiàn)NRSN2參與鼻咽癌的生物學(xué)發(fā)展。目前關(guān)于MRI增強(qiáng)掃描聯(lián)合血清CRNDE、NRSN2在鼻咽癌中的研究鮮有報(bào)道,因此本研究主要探討MRI增強(qiáng)掃描聯(lián)合血清CRNDE、NRSN2對鼻咽癌分期診斷及療效評估的應(yīng)用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年10月至2021年10月我院收治并經(jīng)病理檢測證實(shí)為鼻咽癌的患者110例作為研究對象,男68例,女42例,年齡30～78歲,平均(59.20±12.75)歲,腫瘤直徑1.3～4.9 cm,平均(3.01±0.64)cm。根據(jù)《鼻咽癌分期2017版》進(jìn)行臨床分期[8],Ⅱ期為早期組46例,Ⅲ期和Ⅳ期為中晚期組64例。所有患者進(jìn)行放化療治療。

納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合鼻咽癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9],根據(jù)臨床檢查確診為鼻咽癌;(2)所有患者均進(jìn)行MRI增強(qiáng)掃描;(3)患者入組前未接受放療或化療;(4)患者知情并簽署承諾書。

排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并其他惡性腫瘤者;(2)伴有心肝腎等重要內(nèi)臟功能障礙患者;(3)合并鼻竇炎等鼻咽疾病;(4)有MRI檢查禁忌者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)(編號:RMYY-LLKS-2023-031)。

1.2 方法

1.2.1 MRI增強(qiáng)掃描檢查方法 所有患者在入院后均使用美國3.0T MRI掃描儀(購自美國,型號GESignaHDX3.0T)對鼻咽部橫軸面、冠狀面和矢狀面進(jìn)行常規(guī)序列掃描,主要參數(shù):T1FLAIR:TR為2 500 ms,TE為25 ms,TI為850 ms,NEX為1,矩陣為320×256;FSE/T2WI:TR=5 700 ms,TE=120 ms,NEX=2,矩陣為384×256;T2FLAIR:TR為8 600 ms,TE為180 ms,TI為2 200 ms,NEX為=2,矩陣為320×256,所有序列的層厚為6 mm、層間距為1.5 mm、FOV為24 cm,掃描層數(shù)為18層。先進(jìn)行平掃,待平掃完成后注入造影劑Gd-DTPA試劑進(jìn)行增強(qiáng)掃描,圖像數(shù)據(jù)分析:采用GE Omni Kinetic軟件處理MRI增強(qiáng)掃描中的數(shù)據(jù),計(jì)算最大上升斜率、達(dá)峰時間。

1.2.2 qRT-PCR檢測血清CRNDE、NRSN2表達(dá) 采集患者入組第2天及放化療后6個月空腹外周靜脈血5 mL,3 000 r/min 10 min離心,抽取上清液之后迅速轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存待測。使用Trizol試劑提取血清中總RNA(北京凱詩源公司,貨號:SH-2366),使用NanoDrop ND-12000分光光度計(jì)評估總RNA濃度和純度(美國Thermo公司),使用M-MLV反轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京凱詩源公司,貨號:SOS-1046)反轉(zhuǎn)錄成cDNA,以cDNA為模板,采用qRT-PCR儀(美國Bio-Rad公司,型號:CFX384)檢測樣本中CRNDE、NRSN2表達(dá)水平,內(nèi)參均為GADPH,引物序列見表1。qRT-PCR反應(yīng)體系共20 μL:cDNA(50 ng/μL)2 μL,SYBR Green Master Mix(2×)(上海北諾公司,貨號為K0253)10 μL,PCR上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μL,加ddH2O至20 μL。條件為95℃預(yù)變性15 min,1個循環(huán),然后在95℃變性15 s,65℃退火延伸45 s,共40個循環(huán)。為減小實(shí)驗(yàn)誤差,各樣品重復(fù)3次,使用2-ΔΔCt方法計(jì)算CRNDE、NRSN2相對表達(dá)量。

表1 qRT-PCR引物序列

1.2.3 放化療效果評估[10]患者在放化療后6個月進(jìn)行療效評估,放化療效果根據(jù)WHO實(shí)體腫瘤療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行,完全緩解:腫瘤完全消失;部分緩解:腫瘤體積縮小>50%,且再無新病灶出現(xiàn);病情穩(wěn)定:腫瘤體積縮小<50%,且再無新病灶出現(xiàn);進(jìn)展:腫瘤體積增大>25%,出現(xiàn)新的病灶。將完全緩解和部分緩解分為療效良好組,其余為療效不佳組。

2 結(jié)果

2.1 不同分期MRI增強(qiáng)掃描參數(shù)及血清CRNDE、NRSN2的比較 中晚期組最大上升斜率、達(dá)峰時間、CRNDE以及NRSN2水平均顯著高于早期組(P<0.05)。見表2。

表2 不同分期MRI增強(qiáng)掃描參數(shù)及血清CRNDE、NRSN2的比較

2.2 血清CRNDE、NRSN2與MRI增強(qiáng)掃描參數(shù)的相關(guān)性分析 根據(jù)Pearson相關(guān)性分析得知,血清CRNDE、NRSN2水平呈正相關(guān)(P<0.05),二者與最大上升斜率、達(dá)峰時間均呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 血清CRNDE、NRSN2與MRI增強(qiáng)掃描參數(shù)的相關(guān)性分析

2.3 MRI增強(qiáng)掃描參數(shù)對鼻咽癌分期的診斷 根據(jù)ROC曲線得知,最大上升斜率診斷鼻咽癌分期的曲線下面積(AUC)為0.798(95%CI:0.715～0.881),截?cái)嘀禐?0.257%,敏感度為76.26%,特異度為80.25%,達(dá)峰時間診斷鼻咽癌分期的AUC為0.854(95%CI:0.783～0.926),截?cái)嘀禐?5.315 s,敏感度為77.26%,特異度為82.30%,二者聯(lián)合診斷鼻咽癌分期的AUC為0.918(95%CI:0.865～0.972),敏感度為75.64%,特異度為88.67%。二者聯(lián)合的AUC優(yōu)于各自單獨(dú)診斷(Z聯(lián)合 vs.最大上升斜率=2.628、Z聯(lián)合 vs.達(dá)峰時間=2.731,P均<0.05),見圖1。

圖1 MRI增強(qiáng)掃描參數(shù)對鼻咽癌分期的診斷

2.4 MRI增強(qiáng)掃描聯(lián)合血清CRNDE、NRSN2對鼻咽癌分期的診斷 根據(jù)ROC曲線得知,CRNDE診斷鼻咽癌分期的AUC為0.841(95%CI:0.766～0.916),截?cái)嘀禐?.382,敏感度為78.26%,特異度為81.25%,NRSN2診斷鼻咽癌分期的AUC為0.864(95%CI:0.792～0.936),截?cái)嘀禐?.624,敏感度為80.00%,特異度為81.28%,MRI增強(qiáng)掃描診斷鼻咽癌分期的AUC為0.918(95%CI:0.865～0.972),敏感度為75.64%,特異度為88.67%。三者聯(lián)合診斷鼻咽癌分期的AUC為0.984(95%CI:0.966～1.000),敏感度為75.64%,特異度為88.67%。三者聯(lián)合的AUC優(yōu)于各自單獨(dú)診斷(Z聯(lián)合 vs. CRNDE=2.510、Z聯(lián)合 vs. NRSN2=2.685,Z聯(lián)合 vs. MRI增強(qiáng)掃描=2.821,P均<0.05),見圖2。

圖2 MRI增強(qiáng)掃描聯(lián)合血清CRNDE、NRSN2對鼻咽癌分期的診斷

2.5 不同療效MRI增強(qiáng)掃描參數(shù)和血清CRNDE、NRSN2水平的比較 療效不佳組最大上升斜率、達(dá)峰時間、CRNDE以及NRSN2水平均顯著高于療效良好組(P<0.05)。見表4。

表4 不同療效MRI增強(qiáng)掃描參數(shù)和血清CRNDE、NRSN2水平的比較

3 討論

鼻咽癌是一種比較常見的頭頸部惡性腫瘤,由于發(fā)病部位比較隱蔽,所以早期無典型癥狀,鼻咽癌患者預(yù)后與分期有關(guān)。早期患者,在治療后可明顯改善患者的生活質(zhì)量,中晚期腫瘤易對周圍淋巴結(jié)和組織進(jìn)行侵襲,預(yù)后較差[11]。近年來,我國鼻咽癌的發(fā)病率一直處于上升趨勢,因其病死率高,嚴(yán)重威脅人類生命健康,其手術(shù)治療效果不理想,多采用放化療進(jìn)行治療[12],因此,選取生物標(biāo)志物配合影像學(xué)進(jìn)行檢查對于提高患者分期的診斷以及評估療效具有重要的意義。

MRI在診斷鼻咽癌時獲得較好的效果,可對患者病灶大小,以及壞死情況進(jìn)行判斷,還能診斷患者臨床分期,評估病情有無改善,對軟組織分辨率較高,可以清晰的將病灶范圍顯示出來[13],MRI增強(qiáng)掃描可通過造影劑來反應(yīng)組織間的血流動力學(xué)差異,可檢測放化療治療效果[14]。有研究發(fā)現(xiàn)MRI增強(qiáng)掃描可真實(shí)反映鼻咽癌患者在放射性治療后的病情變化情況[15]。還有研究發(fā)現(xiàn)MRI增強(qiáng)掃描與臨床分期有關(guān),可作為臨床治療的依據(jù)[16]。本研究發(fā)現(xiàn)中晚期組最大上升斜率、達(dá)峰時間均顯著高于早期組,且療效不佳組最大上升斜率、達(dá)峰時間顯著高于療效良好組,說明MRI增強(qiáng)掃描可通過判斷腫瘤內(nèi)的變化,明確腫瘤侵犯范圍和邊界情況,從而診斷臨床分期和療效評估,最大上升斜率診斷鼻咽癌分期的AUC為0.798,敏感度為76.26%,特異度為80.25%,達(dá)峰時間診斷鼻咽癌分期的AUC為0.854,敏感度為77.26%,特異度為82.30%,說明MRI增強(qiáng)掃描可以比較準(zhǔn)確地診斷鼻咽癌分期,但也會因?yàn)闃颖緮?shù)據(jù)和個體差異性,其診斷符合率會有所差異。

CRNDE是在結(jié)直腸癌組織中發(fā)現(xiàn)的一種LncRNA,之后在多種癌組織中也發(fā)現(xiàn)呈現(xiàn)異常表達(dá),CRNDE在膀胱癌組織中異常升高,表達(dá)水平還與TNM分期有關(guān),會促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞的侵襲和遷移[17]。CRNDE還在鼻咽癌中過表達(dá),還與鼻咽癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[18]。CRNDE水平升高與腫瘤分期、腫瘤體積大小以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān),其降低會抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖和遷移能力,說明CRNDE是治療鼻咽癌的潛在靶向指標(biāo)[19]。NRSN2主要存在于神經(jīng)元囊泡中,是表達(dá)于脊椎動物中樞神經(jīng)細(xì)胞中的一種膜蛋白,主要由202個氨基酸組成,參與機(jī)體神經(jīng)系統(tǒng)軸突末端分化生長,還在多種腫瘤細(xì)胞中起作用,調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的侵襲增殖等[20]。有研究發(fā)現(xiàn)NRSN2在鼻咽癌中顯著增加,與TNM分期等密切相關(guān)[7],還有研究發(fā)現(xiàn)NRSN2在鼻咽癌患者血清中顯著升高,可為鼻咽癌的診斷和治療提供參考[20]。本研究發(fā)現(xiàn)中晚期組CRNDE和NRSN2水平均顯著高于早期組,療效不佳組CRNDE和NRSN2水平均顯著高于療效良好組,說明二者參與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展,會促進(jìn)其轉(zhuǎn)移,還與療效密切相關(guān)。根據(jù)Pearson相關(guān)性分析得知,血清CRNDE、NRSN2與最大上升斜率、達(dá)峰時間呈正相關(guān),說明CRNDE、NRSN2水平升高會促進(jìn)鼻咽癌的進(jìn)展,也會影響MRI參數(shù)產(chǎn)生波動,會隨著血清水平影響MRI參數(shù)使其逐漸升高,為臨床診治提供新的參考。根據(jù)ROC曲線得知,CRNDE診斷鼻咽癌分期的AUC為0.841,敏感度為78.26%,特異度為81.25%,NRSN2診斷鼻咽癌分期的AUC為0.864,敏感度為80.00%,特異度為81.28%,說明二者可以診斷鼻咽癌分期。四者聯(lián)合診斷鼻咽癌分期的AUC為0.985,敏感度為75.64%,特異度為88.67%,而且四者聯(lián)合的AUC及敏感度明顯優(yōu)于各自單獨(dú)診斷。

綜上所述,MRI增強(qiáng)掃描聯(lián)合血清CRNDE、NRSN2在鼻咽癌的分期診斷中具有較高的臨床價(jià)值,還與患者放化療療效密切相關(guān)。本研究選取的樣本量較少,可能導(dǎo)致研究結(jié)果出現(xiàn)一定偏倚,后續(xù)會擴(kuò)大樣本量,對其進(jìn)一步驗(yàn)證。

利益相關(guān)聲明:所有作者均聲明無利益沖突。

作者貢獻(xiàn)說明:鄭樹成:研究方案設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)操作、論文撰寫;張德江:研究方案可行性分析、修訂論文;陳頔、王龍:指標(biāo)檢測、原始結(jié)果的整理與分析;李玉柱:研究指導(dǎo)、論文修改、經(jīng)費(fèi)支持。