胡媛媛，張 懿，趙屹欽，曾邦權(quán)，王俊美，杜 潤，趙 珍，張 然，何依蓉，陳紅艷，張文東，趙煥云

（1.云南農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，云南昆明 650031；2.云南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南昆明 650000）

豬瘟（classical swine fever，CSF）是一種由豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）感染引起的高度急性、熱性、接觸性傳染病，是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WOAH）規(guī)定的必須通報(bào)的豬重要傳染病[1]，也是我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《國家動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查（2021—2025年）》中要求的重點(diǎn)防治動(dòng)物疫病[2]，于2017年退出國家強(qiáng)制免疫計(jì)劃[3]。2022年，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部將CSF 從一類動(dòng)物疫病調(diào)為二類動(dòng)物疫病，要求以疫病凈化為防治重點(diǎn)，不斷完善養(yǎng)殖場(chǎng)生物安全體系，嚴(yán)格落實(shí)各項(xiàng)綜合防控措施，積極開展場(chǎng)群或區(qū)域凈化工作，不斷實(shí)現(xiàn)凈化目標(biāo)。因此，持續(xù)做好CSF 病原及免疫抗體監(jiān)測(cè)是進(jìn)一步擴(kuò)大CSF凈化區(qū)域的基礎(chǔ)。

國家統(tǒng)計(jì)局云南調(diào)查總隊(duì)發(fā)布的《2021年云南省畜牧業(yè)發(fā)展情況》數(shù)據(jù)顯示，2021年云南省生豬出欄4 192 萬頭，排名全國第五，較上年增加739 萬頭，同比增長21.4%。云南省養(yǎng)殖模式復(fù)雜，既有高度集約的養(yǎng)殖企業(yè)，也不乏眾多小型規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)及家庭散養(yǎng)戶，加之云南省地理位置特殊，邊境線漫長，導(dǎo)致CSF 防控難度加大。根據(jù)《國家豬瘟防治指導(dǎo)意見（2017—2020年）》[4]及《2017—2021年云南省動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流調(diào)計(jì)劃》，對(duì)2017—2021年云南省16個(gè)州市的CSF 流行及免疫狀況進(jìn)行了調(diào)查，以期為云南省CSF 防控及凈化提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品

2017—2021年，按照配額抽樣方法在云南省16 個(gè)州市共采集豬組織、棉拭子等病原學(xué)樣品63 224 份，血清學(xué)樣品146 547 份（表1）。

表1 2017—2021年云南省CSF 血清學(xué)及病原學(xué)樣品信息 單位：份

1.2 主要儀器與試劑

Thermo Fisher MultiskanTMFC 酶標(biāo)儀，購自美國Thermo 公司；96 通道全自動(dòng)核酸提取儀，購自西安天隆科技有限公司；ABI QuantStudio 7 flex 熒光定量PCR 儀，購自美國ABI 公司。病毒DNA/RNA 核酸提取試劑盒（4.0），購自西安天隆科技有限公司；PrimeScript One Step RT-PCR Kit，購自寶生物工程（大連）有限公司；CSFV Antibody Test Kit，購自韓國金諾生物科技有限公司。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 血清學(xué)檢測(cè) 按照CSFV 抗體檢測(cè)試劑盒說明書，對(duì)采集的豬血清進(jìn)行CSFV 抗體檢測(cè)。

1.3.2 病原學(xué)檢測(cè) 按照《豬瘟診斷技術(shù)》（GB/T 16551—2020）所述方法，合成熒光定量RT-PCR檢測(cè)引物，對(duì)采集的豬組織及棉拭子樣品進(jìn)行CSFV 核酸檢測(cè)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用Excel 2013軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清學(xué)監(jiān)測(cè)情況

2.1.1 空間分布 2017—2021年，云南省豬血清學(xué)樣品的C S F V 抗體合格率為8 2.5 9%（121 037/146 547）。不同州市統(tǒng)計(jì)結(jié)果（圖1）顯示，云南省大多數(shù)州市每年的CSFV 免疫抗體合格率均高于國家要求的70%，低于70%的4 個(gè)州市分別為昭通市、德宏州、麗江市和臨滄市，其中，德宏州連續(xù)3年（2018—2020年）抗體合格率低于70%，2020、2021年臨滄市抗體合格率分別為66.71%、63.33%；2017年昭通市抗體合格率為63.95%，2020年麗江市也低于70%。大多數(shù)州市的年均CSFV 抗體合格率保持平穩(wěn)，昭通、文山、德宏等州市波動(dòng)相對(duì)較大。

圖1 2017—2021 云南省不同州市CSFV 抗體合格率

2.1.2 時(shí)間分布 結(jié)果（圖2）顯示，2017—2021年云南省CSFV 免疫抗體合格率分別為82.94%、81.47%、80.79%、80.24%、82.53%，均平穩(wěn)保持在80%以上。

圖2 2017—2021年云南省CSFV 抗體合格率

2.1.3 群間分布 結(jié)果（圖3）顯示，2017—2021年云南省規(guī)模場(chǎng)抗體合格率為83.85%（46 401/55 338），散養(yǎng)戶為81.83%（74 636/91 209），規(guī)模場(chǎng)略高于散養(yǎng)戶，但差異不顯著（P＞0.05）。

圖3 2017—2021年云南省不同養(yǎng)殖方式CSFV 抗體合格率

2.2 病原學(xué)監(jiān)測(cè)情況

2.2.1 空間分布 2017—2021年，云南省15 個(gè)州市（大理州未開展病原學(xué)檢測(cè)）豬組織及棉拭子樣品的CSFV 核酸陽性率為1.13%（713/63 224）。不同州市統(tǒng)計(jì)結(jié)果（圖4～5）顯示，除西雙版納州、麗江市未檢測(cè)到陽性外，其余州市陽性率為0.22%～3.74%，其中文山州陽性率最高，達(dá)到3.74%，曲靖市、德宏州、普洱市陽性率較低，分別為0.31%、0.22%、0.42%。同一州市不同年度陽性率也各有不同，其中文山州2017—2020年陽性率均維持在0～2.54%，但2021年突然升高至19.00%；保山市的陽性率也在2019年有異常升高情況，達(dá)8.89%。

圖4 云南省各州市CSFV 核酸陽性率

圖5 2017—2021 云南省各州市CSFV 核酸陽性率

2.2.2 時(shí)間分布 結(jié)果（表2、圖6）顯示，2017—2021年，云南省CSFV 核酸陽性率分別為0.52%、0.74%、1.10%、1.02%、2.42%，除2020年略有下降外，整體呈上升趨勢(shì)，2021年陽性率最高，達(dá)到2.42%；陽性州市所占比例呈波動(dòng)趨勢(shì)，2019年占比最高，高達(dá)86.67%。

圖6 2017—2021年云南省CSFV 核酸陽性率

表2 2017—2021 云南省CSFV 陽性州市統(tǒng)計(jì)

2.2.3 群間分布 結(jié)果（圖7）顯示，2017—2021年，云南省規(guī)模場(chǎng)CSFV 陽性率為0.76%（180/23 708），散養(yǎng)戶為1.44%（425/29 477），屠宰場(chǎng)為1.08%（108/10 039）。規(guī)模場(chǎng)CSFV 核酸陽性率較低，在2019年達(dá)到峰值，隨后呈下降趨勢(shì)；散養(yǎng)戶陽性率呈逐年上升趨勢(shì)，2021年高達(dá)4.15%；屠宰場(chǎng)陽性率除2019年略有下降外，整體都維持在較高水平。

圖7 2017—2021年云南省不同養(yǎng)殖方式CSFV 核酸陽性率

3 討論

3.1 血清學(xué)監(jiān)測(cè)

疫苗免疫是防控CSF 的重要手段[5]。2017—2021年云南省CSFV 免疫抗體合格率為80.24%～82.94%，整體免疫效果較好，但不同州市抗體水平略有差異，少部分州市部分年份抗體水平低于70%。結(jié)合病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，免疫抗體合格率低于70%的州市其同年CSFV 病原學(xué)陽性率也有所上升，提示疫苗免疫合格率降低一定程度上增加了CSF 發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)持續(xù)加強(qiáng)疫苗免疫，提高抗體水平。

規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)連續(xù)5年抗體合格率均穩(wěn)定維持在80%以上，散養(yǎng)戶雖也達(dá)到了國家標(biāo)準(zhǔn)，但波動(dòng)比較大，說明2017年CSF 退出國家強(qiáng)制免疫后，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)受國家免疫政策變化影響不大，但散養(yǎng)戶根據(jù)地方財(cái)政配套情況自行制定免疫計(jì)劃，難以保證免疫密度和免疫效果，加之中大型養(yǎng)殖場(chǎng)的人員配套、實(shí)驗(yàn)室建設(shè)、倉儲(chǔ)運(yùn)輸?shù)溶浻布芾砟芰^強(qiáng)，有效免疫、適時(shí)補(bǔ)免等工作的開展也遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于散養(yǎng)戶，所以規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)免疫抗體合格率高于散養(yǎng)戶，與謝嘉賓等[6]、王佳蕓等[7]研究結(jié)果相近。

3.2 病原學(xué)監(jiān)測(cè)

從空間分布上看，2017—2021年，除西雙版納和麗江外，云南省各州市均有不同程度的CSFV陽性檢出，且大多數(shù)州市的陽性率相對(duì)穩(wěn)定，但個(gè)別州市浮動(dòng)較大，尤其是2021年文山州、2019年保山市陽性率有異常上升情況，結(jié)合同年兩個(gè)州市CSFV 免疫合格率均在80%以上，排除疫苗免疫失敗原因，猜測(cè)CSFV 陽性率異常升高可能與病毒基因變異及豬場(chǎng)日常管理存在疏漏等因素有關(guān)，具體原因有待進(jìn)一步研究。

從時(shí)間分布上看，2018、2019年CSFV 陽性州市分布范圍最廣，可能與頻繁調(diào)運(yùn)有關(guān)。同年由于非洲豬瘟暴發(fā)，豬群免疫力下降，造成多種疾病混合感染，使得CSFV 病原陽性率也隨之升高。整體來看，除2020年CSFV 病原陽性率略有下降外，云南省CSFV 病原學(xué)陽性率呈上升趨勢(shì)，說明云南省CSF 疫情發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)逐年增加，建議在做好疫苗免疫的前提下，加強(qiáng)豬場(chǎng)日常管理，做好清潔消毒工作。

從群間分布上看，2017—2021年，除規(guī)模場(chǎng)外，散養(yǎng)戶、屠宰場(chǎng)的CSFV 病原陽性率整體呈上升趨勢(shì)，尤其散養(yǎng)戶陽性率增加較為明顯。規(guī)模場(chǎng)在資金、技術(shù)等方面的優(yōu)勢(shì)使其疫病防控能力強(qiáng)于散養(yǎng)戶，因此免疫密度低和抗體合格率低的散養(yǎng)戶發(fā)生CSF 的風(fēng)險(xiǎn)更大，應(yīng)著重對(duì)其加強(qiáng)免疫及監(jiān)測(cè)；同時(shí)，屠宰場(chǎng)作為畜禽流通的重要一環(huán)，其陽性率增加應(yīng)引起警惕，建議嚴(yán)格做好消殺工作，防止CSFV 擴(kuò)散。

3.3 兩者關(guān)系

從病原學(xué)、血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果來看，云南省連續(xù)5年CSFV 免疫抗體合格率均高于70%，并保持穩(wěn)定，但CSFV 病原學(xué)陽性率卻整體升高。進(jìn)一步比較各州市數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，在CSFV 免疫抗體合格率低的情況下，多數(shù)州市同年CSFV 病原陽性率相較往年升高；在CSFV 免疫抗體合格率高于80%的情況下，部分州市仍有較高的CSFV 病原陽性率，說明疫苗雖有一定的保護(hù)效果，但由于病毒在不斷變異，其對(duì)不同毒株間的交叉保護(hù)作用有限[8]。