周 佳 余才貴 姜 楠 郭瑞強(qiáng) 曹 省

動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）及其相關(guān)不良心血管事件的防治是一項(xiàng)重大的臨床挑戰(zhàn)。由于AS病理生理機(jī)制復(fù)雜，采用單一藥物治療往往效果不佳，聯(lián)合治療方式逐漸成為研究熱點(diǎn)。免疫抑制劑雷帕霉素（rapamycin，RAP）具有獨(dú)特的抗AS 作用，局部靶向給藥可有效避免傳統(tǒng)給藥方式帶來(lái)的全身不良反應(yīng)。包覆血小板膜的納米探針因其獨(dú)特的靶向能力已成為靶向給藥的重要載體之一，超聲靶向微泡釋放 技 術(shù)（ultrasound-targeted microbubble destruction，UTMD）是一種安全有效的物理靶向方法，其在靶向遞藥、基因轉(zhuǎn)染及溶栓治療等方面均有廣闊的應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)將RAP 的藥理作用、納米探針的增容作用、血小板膜的生物學(xué)作用和UTMD 的物理效應(yīng)相結(jié)合，制備血小板膜仿生納米靶向探針（platelet membrane biomimetic targeting nanoprobes，PLT-RAP@NPs），并評(píng)價(jià)其在體外的免疫逃逸、靶向和黏附能力，以及聯(lián)合UTMD后的載藥控釋情況，旨在探索一種治療AS的新策略。

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)材料

1.主要試劑：聚乙烯醇、聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA，聚合比例50∶50，分子量13 000，美國(guó)Sigma-Aldrich 公司）；二氯甲烷（上海阿拉丁生化科技股份公司）；PBS 緩沖液、乙腈（美國(guó)ThermoFisher Scientific 公司）；RAP（大連美侖生物技術(shù)有限公司）；RAW 264.7巨噬細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（美國(guó)ATCC 公司）；氧化型低密度脂蛋白（廣州奕源生物科技有限公司）；DAPI、DiI和CCK-8溶液（上海碧云天公司）；注射用六氟化硫微泡（SonoVue，意大利Bracco公司）。

2.主要儀器：超聲波細(xì)胞破碎儀（VCX150，美國(guó)Sonics&Materials 公司）；高速冷凍離心機(jī)（5804/R，德國(guó)Eppendorf公司）；離心機(jī)（湖南力辰儀器公司）；超聲浴波儀（FS30D）和熒光顯微鏡（EVOS M5000）均由美國(guó)ThermoFisher Scientific 公司提供；納米粒度電位儀（Zetasizer Nano ZS，英國(guó)Malvern 公司）；透射電子顯微鏡（Tecnai G2 F20 S-TWIN，美國(guó)FEI 公司）；電動(dòng)恒溫磁力攪拌儀（常州國(guó)華電器公司）；超聲空化儀（WED-100，深圳威爾德醫(yī)療公司）；多功能酶標(biāo)儀（TECAN M1000，瑞士TECAN公司）。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.PLT-RAP@NPs的制備

（1）單乳化- 溶劑揮發(fā)法合成納米探針RAP@NPs：將100 mg PLGA 加入3 ml 二氯甲烷中，完全溶解成有機(jī)相后再加入RAP；將5 g 聚乙烯醇加入100 ml純水得到5%聚乙烯醇溶液為外水相，4℃保存；冰浴下將有機(jī)相緩慢加入15 ml 外水相中，超聲波乳化90 s（能量60%，工作5 s，間隔5 s）；將上述乳液用電動(dòng)恒溫磁力攪拌儀攪拌2～5 h 充分揮發(fā)有機(jī)溶劑，高速冷凍離心機(jī)離心10 min（4℃、10 000 r/min），棄上清液，沉淀即得到RAP@NPs。

（2）梯度離心-反復(fù)凍融法提取血小板膜囊泡：取小鼠靜脈血離心5 min（室溫、300 r/min），去沉淀分離紅細(xì)胞與白細(xì)胞；然后將上清液再次離心5 min（室溫、300 r/min）去沉淀，得到含血小板的血漿；將上清液離心4 min（室溫、2000 r/min），沉淀物即為血小板；將蛋白酶抑制劑溶于PBS 緩沖液（比例1∶100），加入乙二胺四乙酸，使其濃度為1 mmol/L；將分離的血小板用PBS 緩沖液重懸，-80℃冷凍。室溫下重復(fù)冷凍、解凍3 次；PBS 緩沖液洗滌，高速冷凍離心機(jī)離心5 min（4 ℃、21 000 r/min），重復(fù)3次，超聲浴波儀振蕩5 min，即得到血小板膜囊泡，-80℃保存。

（3）超 聲 震 蕩 法 制 備 PLT-RAP@NPs：取RAP@NPs用PBS緩沖液重懸，加入過(guò)量血小板膜囊泡后應(yīng)用超聲浴波儀振蕩5 min；高速冷凍離心機(jī)離心10 min（4℃、12 000 r/min），去上清液后沉淀即得到PLT-RAP@NPs，4℃保存。

2.PLT-RAP@NPs的表征測(cè)定

將制備好的RAP@NPs、PLT-RAP@NPs 分別用PBS緩沖液重懸，觀察其外觀，使用納米粒度電位儀檢測(cè)RAP@NPs、PLT-RAP@NPs 粒徑和表面電位，均重復(fù)3次取平均值。應(yīng)用透射電子顯微鏡觀察其微觀形態(tài)，然后分別置入10%胎牛血清和PBS緩沖液中，37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育，連續(xù)1 周取納米溶液使用納米粒度電位儀檢測(cè)粒徑和表面電位，觀察其穩(wěn)定性。

3.PLT-RAP@NPs中RAP的包封率和載藥率計(jì)算

取適量RAP 用乙腈溶解，稀釋成濃度分別為（1 μg/ml、2 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、100 μg/ml、200 μg/ml、500 μg/ml、1000 μg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用高效液相色譜法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。再將3 mg、5 mg、10 mg RAP 分別加入100 mg PLGA 及血小板膜囊泡制備PLT-RAP@NPs，將其溶于1 ml 乙腈，離心取上清液復(fù)溶后10 μl 上樣分析，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)獲得包載的RAP重量，計(jì)算包封率和載藥率。

4.PLT-RAP@NPs的體外尋靶實(shí)驗(yàn)

（1）細(xì)胞培養(yǎng)和泡沫細(xì)胞制備：RAW 264.7巨噬細(xì)胞培養(yǎng)采用含10%胎牛血清的RPMI 1640 培養(yǎng)基；人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)采用含100 U/ml 鏈霉素和0.01%青霉素的EBM-2 內(nèi)皮生成培養(yǎng)基，于37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。泡沫細(xì)胞的制備：待RAW 264.7 巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)密度為50%時(shí)，使用濃度為50 μg/ml 的氧化型低密度脂蛋白處理24 h，進(jìn)行泡沫化后應(yīng)用油紅O 脂肪染色鑒定巨噬細(xì)胞是否成功轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。泡沫細(xì)胞制備成功的標(biāo)準(zhǔn)為油紅O染色顯示細(xì)胞體積增大，呈圓形、短梭形或不規(guī)則形，胞漿內(nèi)可見(jiàn)大量紅色或暗紅色圓形脂滴。

（2）熒光標(biāo)記的納米探針DiI@PLGA、PLTDiI@PLGA 的制備：方法同RAP@NPs 和PLTRAP@NPs 制備，將其中RAP 更換成0.1 wt% DiI 熒光染料，即可制備熒光標(biāo)記的納米探針DiI@PLGA 和PLT-DiI@PLGA，用于模擬RAP@NPs和PLT-RAP@NPs進(jìn)行體外尋靶實(shí)驗(yàn)的熒光檢測(cè)。

（3）體外巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)：將RAW 264.7 巨噬細(xì)胞接種于12 孔板中，在37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育24 h；向培養(yǎng)板中分別加入DiI@PLGA（DiI@PLGA組）和PLT-DiI@PLGA（PLT-DiI@PLGA組），每組3 個(gè)復(fù)孔，孵育2 h 后PBS 緩沖液洗滌；然后多聚甲醛固定30 min，PBS 緩沖液洗滌3 次；DAPI 溶液染色10 min 后，吸去多余DAPI，PBS 緩沖液洗滌3 次；使用熒光顯微鏡觀察兩組細(xì)胞熒光強(qiáng)度。

（4）體外泡沫細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)：于制備成功的泡沫細(xì)胞中分別加入DiI@PLGA（DiI@PLGA 組）和PLTDiI@PLGA（PLT-DiI@PLGA 組）；其余步驟同體外巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)。

（5）體外內(nèi)皮細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)：先將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞均勻鋪于12孔板中，在37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育24 h貼壁；當(dāng)細(xì)胞濃度為80%～90%時(shí)，用100 ng/ml腫瘤壞死因子-α 刺激2 h，上調(diào)血管性假血友病因子（vWF）表達(dá)，再分別加入PBS 緩沖液（PBS 組）、DiI@PLGA（DiI@PLGA 組）、PLT-DiI@PLGA（PLTDiI@PLGA組）；其余步驟同體外巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)。

5.細(xì)胞增殖-毒性實(shí)驗(yàn)

采用CCK8 法進(jìn)行細(xì)胞增殖-毒性實(shí)驗(yàn)。將RAW 264.7 巨噬細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞分別接種于96 孔板中孵育24 h，于游離RAP、RAP@NPs和PLT-RAP@NPs中加入10 μl 不同濃度RAP（3.00 μg/ml、6.25 μg/ml、12.50 μg/ml、25.00 μg/ml、50.00 μg/ml、100.00 μg/ml），每一濃度設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔，以PBS緩沖液為參照，再孵育48 h。加入10 μl CCK-8 溶液，孵育2～4 h 后應(yīng)用多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm處吸光度，細(xì)胞與RAP混合測(cè)得的吸光度記為ODt，細(xì)胞與PBS 緩沖液混合測(cè)得的吸光度記為ODc，僅PBS緩沖液測(cè)得的吸光度記為ODb，計(jì)算細(xì)胞增殖活性，公式為：細(xì)胞增殖活性=（ODt-ODb）/（ODc-ODb）×100%。

6.PLT-RAP@NPs聯(lián)合UTMD的體外藥物控釋實(shí)驗(yàn)

采用體外透析法和高效液相色譜法觀察PLTRAP@NPs 包載藥物RAP 的控釋情況。按以下分組進(jìn) 行 實(shí) 驗(yàn)：RAP@NPs 組（10 mg/ml、1.0 ml）、PLTRAP@NPs 組（10 mg/ml、1.0 ml）、RAP@NPs+SonoVue+UTMD 組（其 中RAP@NPs 20 mg/ml、0.5 ml，SonoVue 0.5 ml）、PLT-RAP@NPs+SonoVue+UTMD 組（其 中PLT-RAP@NPs 20 mg/ml、0.5 ml，SonoVue 0.5 ml）。將上述各組溶液分別裝入透析袋中，用含20 ml PBS 緩沖液的玻璃瓶密封，置于搖床中以37℃、100 r/min 的速度搖晃，后兩組取樣前應(yīng)用超聲空化儀（頻率1 MHz，聲強(qiáng)2 W/cm2，占空比40%）輻照30 s，分別于5 min、10 min、20 min、30 min、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h取出0.5 ml釋放溶液，同時(shí)補(bǔ)充相同體積的PBS 緩沖液。釋放溶液中的RAP 濃度采用高效液相色譜法定量測(cè)定，計(jì)算各組累積藥物釋放量，并繪制曲線(xiàn)圖。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、RAP@NPs及PLT-RAP@NPs的表征

透射電子顯微鏡下RAP@NPs 呈圓形，均勻分布（圖1A），平均粒徑（256.47±5.41）nm，平均表面電位-（18.57±0.84）mV；PLT-RAP@NPs 呈球形，大小均勻，表面覆蓋一層薄膜、“核-殼”結(jié)構(gòu)清晰（圖1B），平均粒徑（286.83±5.25）nm，平均表面電位-（15.60±5.04）mV。在10%胎牛血清和PBS 緩沖液中分別儲(chǔ)存1 周后，RAP@NPs的平均粒徑和平均表面電位分別為（247.52±7.21）nm、（250.36±6.95）nm 和-（17.36±2.19）mV、-（17.28±1.64）mV，PLT-RAP@NPs的平均粒徑和平均表面電位分別為（278.45±8.29）nm、（288.17±9.35）nm和-（14.28±3.94）mV、-（14.07±4.52）mV，其粒徑和表面電位相對(duì)穩(wěn)定，變化均小于10%。

圖1 RAP@NPs和PLT-RAP@NPs透射電子顯微鏡下觀（標(biāo)尺為100 nm）

二、PLT-RAP@NPs中RAP的包封率和載藥率

由3 mg、5 mg、10 mg RAP制備成的PLT-RAP@NPs包封率分別為60.35%、45.92%、41.03%，載藥率分別為2.18%、2.68%、2.97%。

三、PLT-RAP@NPs的體外尋靶實(shí)驗(yàn)

體外尋靶實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)中DiI@PLGA 組橙紅色熒光強(qiáng)度約為PLT-DiI@PLGA 組3 倍（圖2A）；泡沫細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)中PLT-DiI@PLGA 組橙紅色熒光強(qiáng)度約為DiI@PLGA 組4 倍（圖2B）；內(nèi)皮細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)中PLT-DiI@PLGA 組橙紅色熒光強(qiáng)度較DiI@PLGA組增強(qiáng)（圖3）。

圖2 PLT-RAP@NPs體外尋靶實(shí)驗(yàn)熒光顯微鏡下觀（標(biāo)尺為75 μm）

圖3 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞黏附PLT-RAP@NPs體外尋靶實(shí)驗(yàn)熒光顯微鏡下觀（標(biāo)尺為10 μm）

四、細(xì)胞增殖-毒性實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞增殖-毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著RAP 濃度增高，游離RAP 中細(xì)胞增殖活性呈階梯式下降；而RAP@NPs 和PLT-RAP@NPs 中細(xì)胞增殖活性變化較小。見(jiàn)圖4。

圖4 不同濃度RAP下的體外巨噬細(xì)胞（A）和血管平滑肌細(xì)胞（B）增殖活性圖

五、PLT-RAP@NPs 聯(lián)合UTMD 的體外藥物控釋實(shí)驗(yàn)

體外藥物控釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組納米靶向探針中的RAP 均緩慢釋放，72 h 后RAP@NPs 組和PLTRAP@NPs 組累積藥物釋放量分別為42.12% 和33.74%，聯(lián)合UTMD 后累積藥物釋放量分別提升至75.57%和67.54%。見(jiàn)圖5。

圖5 各組體外累積藥物釋放的曲線(xiàn)圖

討 論

心血管疾病是累及人類(lèi)健康的重要問(wèn)題之一，其導(dǎo)致的高致殘率和高死亡率造成了巨大的社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。AS是心血管疾病的主要病理學(xué)因素，其是一種進(jìn)行性、多因素、慢性炎癥性疾病[1］。由于AS 病理生理機(jī)制復(fù)雜，目前臨床對(duì)AS及相關(guān)不良心血管事件的防治仍是一項(xiàng)重大挑戰(zhàn)，需不斷促使臨床醫(yī)學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)影像學(xué)和納米材料學(xué)交叉融合，探索新的治療策略，以實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)治療[2］。研究[3］發(fā)現(xiàn)免疫抑制劑RAP 可通過(guò)介導(dǎo)抗感染、抗增殖、免疫調(diào)節(jié)和脂質(zhì)調(diào)節(jié)等信號(hào)通路對(duì)AS產(chǎn)生多重效性，從而改善斑塊成分、減少斑塊面積、提高斑塊穩(wěn)定性，實(shí)現(xiàn)抗AS 作用。然而，由于藥物在體內(nèi)非靶向分布和不可控的釋放特性，傳統(tǒng)全身給藥方式會(huì)導(dǎo)致劑量依賴(lài)性不良反應(yīng)，如頭痛、出血、高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、間質(zhì)性肺病等[3］。研究[4］發(fā)現(xiàn)斑塊局部靶向給藥可有效避免上述不良反應(yīng)，RAP 涂層支架可減少血管炎癥，防止血管成形后再狹窄[5］。Kilroy 等[6］采用血管內(nèi)超聲和裝載RAP 的微泡聯(lián)合進(jìn)行局部藥物遞送，使治療所需的RAP 劑量明顯降低；Dou 等[7］成功制備基于乙?；?環(huán)糊精負(fù)載RAP 的納米粒，發(fā)現(xiàn)其可顯著減少AS斑塊形成并能增強(qiáng)斑塊的穩(wěn)定性，較口服游離RAP效果更佳，提示RAP 持續(xù)靶向遞送較傳統(tǒng)口服給藥方式具有更理想的抗AS效果。

納米靶向遞送給藥技術(shù)可提高生物利用度、降低副作用，但存在被免疫系統(tǒng)視為“異己”成分而清除等問(wèn)題[8］。既往實(shí)驗(yàn)[9］采用聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）修飾納米探針表面，可以有效減少蛋白質(zhì)吸附、降低內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)清除率、延長(zhǎng)循環(huán)時(shí)間，但機(jī)體仍可以產(chǎn)生特異性PEG 抗體，存在被清除的風(fēng)險(xiǎn)[10］。有學(xué)者[11］提出從血細(xì)胞提取細(xì)胞膜來(lái)修飾包覆納米粒，其治療效果優(yōu)于純PEG 納米載體。血小板膜包覆的納米粒模擬血小板，賦予了血小板膜納米探針天然靶向炎癥、受損血管、腫瘤和病原體的病理生理親和力[12］。Wei等[13］實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)血小板膜納米探針可與泡沫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和膠原蛋白有效結(jié)合，具有良好的靶向性。Song等[14］成功制備了一種載RAP的血小板膜包覆的納米探針，表現(xiàn)出對(duì)AS斑塊的高親和力和RAP在體內(nèi)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞自噬的高效率。血小板膜仿生納米靶向遞送給藥方式提高了藥物的生物利用度和靶區(qū)域分布濃度，降低了免疫原性，可實(shí)現(xiàn)更好的生物相容性和安全性，在AS治療中具有非常大的應(yīng)用潛力。

為了證實(shí)血小板膜仿生納米探針能偽裝成內(nèi)源性物質(zhì)，抑制巨噬細(xì)胞識(shí)別與吞噬，產(chǎn)生免疫逃逸和增強(qiáng)泡沫細(xì)胞攝取，本實(shí)驗(yàn)依次應(yīng)用單乳化-溶劑揮發(fā)法、梯度離心-反復(fù)凍融法和超聲震蕩法成功制備PLT-RAP@NPs，其呈球形，大小均勻，表面覆蓋一層薄膜、“核-殼”結(jié)構(gòu)清晰，平均粒徑（286.83±5.25）nm，平均表面電位-（15.60±5.04）mV，穩(wěn)定性好。當(dāng)100 mg PLGA 負(fù)載3 mg RAP 時(shí)，PLT-RAP@NPs 包封率最高，為60.35%，載藥率為2.18%。由于RAP@NPs 和PLTRAP@NPs均不含熒光基因，不能直接顯示熒光強(qiáng)度，故本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步將細(xì)胞與納米探針共孵育，通過(guò)觀測(cè)封裝DiI染料的納米探針DiI@PLGA和PLT-DiI@PLGA的熒光強(qiáng)度，分別替代RAP@NPs 和PLT-RAP@NPs，結(jié)果顯示相較于DiI@PLGA，PLT-DiI@PLGA 可明顯抑制巨噬細(xì)胞識(shí)別與吞噬，增強(qiáng)泡沫細(xì)胞攝取。血小板對(duì)斑塊具有固有的親和力，其在AS病變每個(gè)階段的招募是由一些黏附分子與炎性?xún)?nèi)皮細(xì)胞、纖維蛋白、膠原蛋白及泡沫細(xì)胞相互作用導(dǎo)致[15］，但在高剪切力作用下，不足以使血小板黏附于膠原蛋白上，需有血小板膜糖蛋白（GP Ib）結(jié)合vWF介導(dǎo)參與。在受損血管處，GP Ib-vWF-膠原的結(jié)合使血小板牢固黏附于內(nèi)皮下[16］。本實(shí)驗(yàn)采用腫瘤壞死因子-α 刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)vWF，再與納米探針共孵育，結(jié)果顯示PLT-DiI@PLGA 可明顯增強(qiáng)與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)的vWF 結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)靶向黏附。細(xì)胞增殖-毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著RAP 濃度增高，游離RAP 中細(xì)胞增殖活性呈階梯式下降，對(duì)細(xì)胞增殖的影響最大；而RAP@NPs 和PLT-RAP@NPs 中細(xì)胞增殖活性變化較小，這是由于RAP@NPs 的納米結(jié)構(gòu)和PLT-RAP@NPs的血小板膜涂層可使RAP 緩慢釋放，納米藥物溫和的細(xì)胞毒性可減少RAP帶來(lái)的全身不良反應(yīng)。

UTMD 作為一種靶向遞藥技術(shù)，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)[17-18］已證明其可以將藥物或基因遞送至目標(biāo)組織，并誘導(dǎo)其在特定部位釋放，從而實(shí)現(xiàn)靶向遞送，是一種具有廣闊應(yīng)用前景的治療策略，且具有無(wú)創(chuàng)、無(wú)輻射、低免疫原性、低毒性、安全性高、特異性強(qiáng)和可控性等優(yōu)點(diǎn)[19］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PLT-RAP@NPs 聯(lián)合UTMD后RAP 釋放速率慢于RAP@NPs，與既往研究[20］結(jié)果相似。分析原因可能為血小板膜的包覆減緩了RAP釋放，聯(lián)合UTMD的空化效應(yīng)隨即發(fā)生微射流、切應(yīng)力和沖擊波等均可導(dǎo)致PLT-RAP@NPs 納米探針外包膜破壞，提高RAP 釋放效率。因此，PLT-RAP@NPs 一方面可以通過(guò)長(zhǎng)效循環(huán)緩慢釋放，降低循環(huán)中因游離藥物濃度過(guò)高而產(chǎn)生的毒副作用，另一方面聯(lián)合UTMD能提高局部藥物濃度，為超聲控釋增效奠定基礎(chǔ)。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)成功制備PLT-RAP@NPs，其既可抑制巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)現(xiàn)免疫逃逸，又可有效增強(qiáng)泡沫細(xì)胞攝取和內(nèi)皮細(xì)胞黏附能力；PLT-RAP@NPs 聯(lián)合UTMD 可實(shí)現(xiàn)超聲靶向控釋?zhuān)瑸橹委烝S 提供更高效、優(yōu)化、安全的新策略。但本實(shí)驗(yàn)采用單乳化-溶劑揮發(fā)法和超聲震蕩法制備血小板膜仿生納米探針，雖較其他制備方法簡(jiǎn)單、高效、易轉(zhuǎn)化，但存在納米探針粒徑偏大，血小板膜涂層不均勻的情況，后續(xù)仍需進(jìn)一步改進(jìn)。