周釗燦 , 游廣炬 , 楊金易 , 蘇曉娜 , 高 麗 , 王永強(qiáng) , 鄭世軍

(1. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 獸醫(yī)公共衛(wèi)生安全全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 農(nóng)業(yè)部動(dòng)物流行病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 , 北京 海淀 100193 ;2. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院 , 廣東 廣州 510642 ; 3. 溫氏食品集團(tuán)股份有限公司 嶺南現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學(xué)與技術(shù)廣東省實(shí)驗(yàn)室云浮分中心 , 廣東 云浮 527100)

禽白血病是一種禽類免疫抑制疾病的總稱,是由反轉(zhuǎn)錄病毒科、反轉(zhuǎn)錄病毒屬的禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的禽腫瘤性疾病,感染雞出現(xiàn)多種形式的腫瘤、免疫抑制、產(chǎn)蛋率下降和增重緩慢,增加對(duì)其他病原的易感性,進(jìn)而增加疫苗接種失敗的風(fēng)險(xiǎn),給世界養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。ALV是一種有包膜的逆轉(zhuǎn)錄病毒,基因組大小約為7.2 kb,編碼核衣殼蛋白(Nucleocapsid protein)、多聚酶蛋白(Polymerase)和糖基化包膜蛋白(Glycosylated envelope protein)等結(jié)構(gòu)蛋白和酶蛋白。根據(jù)病毒囊膜env基因序列、中和特性和宿主嗜性的不同,ALV被劃分成A～K 共11個(gè)亞群,其中A～E、J和K共7個(gè)亞群可感染雞[2-3]。囊膜蛋白(gp85)是ALV的主要包膜蛋白和突變率最高的結(jié)構(gòu)蛋白,可與宿主細(xì)胞膜上的特異性病毒受體特異性結(jié)合,并參與病毒中和,對(duì)ALV毒力、進(jìn)入宿主細(xì)胞機(jī)制和遺傳變異特性等研究有重要意義[4-5]。HPRS-103作為ALV J亞群(ALV-J)代表株,于1992年在英國首次從肉雞中分離[6]。我國于1999年從山東某種雞場發(fā)病雞中首次分離到ALV-J毒株,隨后,其在全國各地迅速廣泛傳播,占據(jù)主導(dǎo)地位[7-8]。2012年,在我國地方品種雞中分離到新的ALV毒株,其gp85基因序列與已知的ALV亞群毒株同源性不高,將其劃分為新亞群,即ALV-K[9-12]。有研究表明,ALV-K亞群病毒復(fù)制能力、致病性和致癌性相對(duì)較低,但容易與其他亞群ALV發(fā)生混合感染,從而加快了ALV的重組速率,也使ALV分離鑒定變得更加困難[13]。目前尚無針對(duì)禽白血病的疫苗或藥物。通過執(zhí)行ALV定期檢測(cè)、淘汰陽性雞的措施實(shí)現(xiàn)規(guī)?；B(yǎng)禽場的禽白血病凈化是有效控制措施,目前國內(nèi)部分大型養(yǎng)殖場已經(jīng)滿足凈化標(biāo)準(zhǔn)。然而,ALV仍然在某些小型和地方家禽養(yǎng)殖場中流行[9,14-15]。本試驗(yàn)在2021—2022年從國內(nèi)某蛋雞場禽白血病凈化蛋清p27抗原陽性雞血漿中分離到7株ALV,其中3株為J亞群毒株,4株為K亞群毒株,對(duì)其gp85基因進(jìn)行克隆和測(cè)序,并與國內(nèi)外分離毒株進(jìn)行比較分析,為后續(xù)研究ALV的遺傳變異特征和流行趨勢(shì)等提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS),購自美國Gibco公司;磷酸緩沖鹽溶液(Phosphate buffer saline,PBS)、DMEM(Dulbecco's modified eagle medium)高糖培養(yǎng)基和胰酶,均購自北京中科邁晨科技有限公司;禽白血病病毒抗原p27 ELISA檢測(cè)試劑盒,購自廣東標(biāo)允生物科技有限公司;RNA提取試劑盒,購自上海飛捷生物技術(shù)有限公司;第一鏈RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒,購自北京擎科生物科技有限公司;膠回收試劑盒,購自北京美基生物科技有限公司;Trans1-T1感受態(tài)細(xì)胞,購自北京全式金生物技術(shù)有限公司;TOPO-Blunt Cloning Kit和Phanta Flash高保真酶,均購自南京諾唯贊生物科技股份有限公司;M5Taq酶,購自北京聚合美生物科技有限公司;曲拉通 X-100(TritonX-100),購自北京索萊寶科技有限公司;牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA),購自美國AMRESCO公司;FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG抗體,購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司;ALV p27單克隆抗體,本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.2 主要儀器 電泳成套設(shè)備和PCR儀,均為美國Bio-Rad Laboratories公司產(chǎn)品;凝膠成像分析系統(tǒng),美國Alpha公司產(chǎn)品;臺(tái)式電子天平,德國Sartorius AG產(chǎn)品;熒光倒置顯微鏡,日本Olympus株式會(huì)社產(chǎn)品;電熱恒溫水槽,中國恒一科技股份有限公司產(chǎn)品;二氧化碳培養(yǎng)箱,美國Thermo Fisher科技公司產(chǎn)品。

1.3 樣品與細(xì)胞 于2021—2022年自國內(nèi)某禽白血病凈化雞場蛋清ALV陽性雞采集無菌抗凝血樣本40份,雞胚成纖維細(xì)胞(Douglas foster-1,DF-1)由本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.4 病毒分離 無菌抗凝血樣本于4 ℃、3 000 r/min離心3 min,吸取上清液,4 ℃、12 000 r/min離心10 min,吸取透明淡黃色血漿,過0.22 μm濾器。用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)DF-1 細(xì)胞至密度達(dá)30%,更換為不含F(xiàn)BS的DMEM培養(yǎng)基(加入10%青鏈霉素雙抗),接種處理好的血漿樣品,每孔100 μL,每份樣品接種2個(gè)細(xì)胞孔并設(shè)立空白對(duì)照,于37 ℃、5%二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中放置1 h,吸棄上清液,用含1% FBS的 DMEM 維持液培養(yǎng)(加入5%青鏈霉素雙抗),37 ℃、5%二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中放置 6 d,盲傳2代,收取細(xì)胞上清液,用禽白血病病毒抗原p27 ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 病毒DNA提取和亞群鑒定 將1.4中ELISA檢測(cè)結(jié)果為陽性的細(xì)胞上清液接種于DF-1細(xì)胞,未進(jìn)行接種操作的細(xì)胞孔為陰性對(duì)照,用含1%FBS的DMEM維持液培養(yǎng)4 d,收取病毒上清液,用RNA提取試劑盒提取ALV病毒基因組RNA,用第一鏈RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。根據(jù)參考文獻(xiàn)[16-17]中方法設(shè)計(jì)ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K的鑒定引物(表1),引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,以提取的ALV cDNA為模板,用M5Taq酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

表1 ALV亞群PCR鑒定所用引物信息

1.6 病毒gp85基因PCR擴(kuò)增和測(cè)序 根據(jù)ALV各亞群的gp85基因及其鄰近序列的保守區(qū)域,設(shè)計(jì)gp85基因PCR擴(kuò)增引物(表2),以ALV cDNA為模板,用Phanta Flash高保真酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增。所得PCR產(chǎn)物回收純化后,按說明書將目的片段連接到TOPO-Blunt Cloning Kit載體上,轉(zhuǎn)化Trans1-T1感受態(tài)細(xì)胞,接種氨芐抗性LB平板并過夜培養(yǎng),挑取單菌落送往北京諾賽基因組研究公司測(cè)序。

表2 ALV gp85基因PCR擴(kuò)增引物信息

1.7gp85基因序列和遺傳演化分析 通過將分離毒株與NCBI數(shù)據(jù)庫中已有的 ALV毒株的gp85基因進(jìn)行 BLAST比對(duì),選取與分離毒株同源性較近的ALV各亞群參考毒株(表3)。用DNASTAR Lasergene軟件中MegAlign程序的Clustal W方法,對(duì)7株ALV分離毒株和ALV各亞群參考毒株的gp85基因核苷酸進(jìn)行多序列比對(duì),分析同源性,并利用DNASTAR Lasergene內(nèi)的EditSeq程序?qū)⒒蛐蛄蟹g為氨基酸,進(jìn)行同源性分析。使用DNASTAR Lasergene軟件中Protean程序的Jameson-wolf方法,預(yù)測(cè)ALV分離株gp85蛋白B細(xì)胞抗原表位,分析分離毒株gp85蛋白氨基酸突變對(duì)B細(xì)胞抗原表位的影響。使用MEGA 11軟件中的鄰接法(Neighbor-joining method)對(duì)ALV分離毒株gp85基因序列和ALV各亞群參考毒株進(jìn)行遺傳進(jìn)化樹分析,Bootstrap值設(shè)置為1 000。

表3 ALV各亞群參考毒株信息

1.8 間接免疫熒光鑒定ALV分離毒株 從7株分離毒株中選取氨基酸變化差異較大的5株,將盲傳2代后收取的病毒液接種于48孔板培養(yǎng)的DF-1細(xì)胞,未進(jìn)行接毒操作的細(xì)胞為陰性對(duì)照,放置于37 ℃、5%二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)7 d,進(jìn)行間接免疫熒光鑒定。將培養(yǎng)好的細(xì)胞用PBS漂洗3次,4%多聚甲醛室溫下固定20 min,PBS漂洗3次,加入0.2%TritonX-100穿透細(xì)胞,冰上孵育20 min,預(yù)冷的PBS漂洗3次,1% BSA 37 ℃封閉1 h,預(yù)冷的PBS漂洗2次,使用ALV p27單克隆抗體 1∶100稀釋,4 ℃過夜孵育,PBST漂洗4次,加入1∶100稀釋的FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG抗體,37 ℃避光孵育1 h,于熒光倒置顯微鏡下觀察發(fā)光情況。

2 結(jié)果

2.1 病毒分離 ELISA檢測(cè)結(jié)果有7份樣品為陽性,陽性率為17.5%(7/40),空白對(duì)照檢測(cè)結(jié)果為陰性。結(jié)果表明,從40份蛋清p27抗原陽性雞的無菌抗凝血樣本中分離獲得7株外源性ALV毒株。

2.2 病毒DNA提取和亞群鑒定 結(jié)果顯示,7株分離毒株中有3株用ALV-J-F/R引物能擴(kuò)增出特異性條帶,其余4株用ALV-K-F/R引物能擴(kuò)增出特異性條帶,與預(yù)期條帶大小基本相符,陰性對(duì)照無特異性條帶(圖1)。結(jié)果表明,7株ALV分離毒株中3株屬于ALV-J毒株,分別命名為CAU4932、CAU4860和CAU2259;4株屬于ALV-K毒株,分別命名為CAU5006、CAU7168、CAU7049和CAU7176。

圖1 7株ALV分離毒株的亞群鑒定

2.3 病毒gp85基因PCR擴(kuò)增和測(cè)序 PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示,7株分離毒株均在約1 000 bp位置擴(kuò)增出特異性條帶,符合gp85基因片段長度,陰性對(duì)照無擴(kuò)增條帶(圖2)。測(cè)序結(jié)果顯示,ALV-J分離株CAU4932、CAU4860和CAU2259的gp85基因片段長度為918 bp,編碼306個(gè)氨基酸;ALV-K分離株CAU7049、CAU5006、CAU7176和CAU7168的gp85基因片段長度為1 008 bp,編碼336個(gè)氨基酸。

圖2 7株ALV分離毒株gp85基因的PCR擴(kuò)增

2.4gp85基因序列和遺傳演化分析 分離毒株gp85基因核苷酸序列同源性比對(duì)結(jié)果顯示,同一亞群分離毒株間gp85基因核苷酸同源性較高,其中ALV-J分離毒株CAU4932、CAU4860和CAU2259的gp85基因核苷酸同源性為90.5%～95.2%,ALV-K分離毒株CAU5006、CAU7049、CAU7168和CAU7176的gp85基因核苷酸同源性為89.4%～92.3%。ALV-J分離毒株與ALV-J參考毒株HPRS103的gp85基因核苷酸同源性平均為83.2%(83.2%～83.3%);ALV-K分離毒株與ALV-K參考毒株JS11C1gp85基因核苷酸同源性平均為84.2%(84.0%～84.3%);其中ALV-J分離毒株中CAU2259與參考毒株SD13QJ01的gp85基因核苷酸序列同源性最高,為90.7%(圖3)。

圖3 gp85基因核苷酸序列同源性比對(duì)

分離毒株gp85蛋白氨基酸序列同源性比對(duì)結(jié)果顯示,同一亞群分離毒株間gp85基因編碼氨基酸同源性很高,其中ALV-J分離毒株CAU4932、CAU4860和CAU2259的gp85蛋白氨基酸同源性為95.1%～99.3%,ALV-K分離毒株CAU5006、CAU7049、CAU7168和CAU7176的gp85蛋白氨基酸同源性為94.0%～99.7%;ALV-J分離毒株與ALV-J參考毒株HPRS103的gp85蛋白氨基酸同源性平均為86.7%(85.3%～87.6%),ALV-K分離毒株與ALV-K參考毒株JS11C1的gp85蛋白氨基酸同源性平均為93.9%(93.1%～94.6%);ALV-J、ALV-K分離毒株gp85蛋白氨基酸序列與ALV-A、ALV-B參考毒株同源性較低,3株ALV-J分離毒株與ALV-A參考毒株氨基酸同源性平均僅為39.8%(39.5%～40.3%),與ALV-B參考毒株氨基酸同源性平均僅為40.5%(40.3%～40.8%);4株ALV-K分離毒株與ALV-A參考毒株gp85蛋白氨基酸同源性平均為81.5%(81.1%～82.0%),與ALV-B參考毒株gp85蛋白氨基酸同源性平均為77.1%(75.7%～77.8%)(圖4)。

圖4 gp85蛋白氨基酸序列同源性比對(duì)

通過對(duì)氨基酸序列進(jìn)行對(duì)比分析,ALV-J分離毒株CAU2259與英國分離參考毒株 HPRS103分別有45個(gè)氨基酸突變、3個(gè)氨基酸缺失和1個(gè)氨基酸增加;ALV-J分離毒株CAU4860與HPRS103株分別有38個(gè)氨基酸突變和2個(gè)氨基酸缺失;ALV-J分離毒株CAU4932與HPRS103株分別有39個(gè)氨基酸突變和2個(gè)氨基酸缺失,這3株ALV-J分離毒株突變率分別為16.0%、13.1%和13.4%。ALV-J分離毒株CAU2259、CAU4860和CAU4932在高變區(qū)(hr1和hr2)分別有22、19和19個(gè)氨基酸突變。3株ALV-J分離毒株之間有16個(gè)氨基酸突變和2個(gè)氨基酸缺失,在hr1和hr2有7個(gè)氨基酸變異。結(jié)果表明,gp85蛋白的氨基酸變異在整個(gè)序列均有發(fā)生,但在hr1和hr2相對(duì)變異較多(圖5)。

圖5 ALV-J分離毒株gp85蛋白氨基酸可變區(qū)序列比對(duì)分析

預(yù)測(cè)ALV-J分離毒株gp85蛋白B細(xì)胞抗原表位,結(jié)果顯示,3株ALV-J分離毒株均缺失了第117位氨基酸,CAU2259毒株第189、238、239位突變成賴氨酸,第190位突變成精氨酸,第192位突變成絲氨酸,第194、215位突變成天冬氨酸,第212位突變成谷氨酰胺,第214位突變成脯氨酸,第216位氨基酸缺失,以上氨基酸變化均發(fā)生在預(yù)測(cè)的gp85蛋白B細(xì)胞優(yōu)勢(shì)抗原表位中(圖6),可能導(dǎo)致gp85蛋白抗原性發(fā)生變化。

圖6 ALV-J分離毒株gp85蛋白B細(xì)胞抗原表位預(yù)測(cè)

ALV-K分離毒株CAU5006與GDFX0603氨基酸同源性最高,為96.1%;ALV-K分離毒株CAU7176與中國分離參考毒株 JS11C1分別有22個(gè)氨基酸突變和1個(gè)氨基酸增加;ALV-K分離毒株CAU5006和CAU7049與JS11C1株分別有19個(gè)氨基酸突變和1個(gè)氨基酸增加,ALV-K分離毒株CAU7168與JS11C1株分別有18個(gè)氨基酸突變和1個(gè)氨基酸增加,這4株ALV-K分離毒株突變率分別為6.8%、6.0%、6.0%和5.7%,突變幅度差異不大。ALV-K分離毒株CAU7176、CAU5006、CAU7049和CAU7168在hr1和hr2分別有5、5、6和6個(gè)氨基酸突變;4株ALV-K分離毒株之間有24個(gè)氨基酸突變,在hr1和hr2有8個(gè)氨基酸變異(圖7)。

圖7 ALV-K分離毒株 gp85蛋白氨基酸可變區(qū)序列比對(duì)分析

預(yù)測(cè)ALV-K分離毒株gp85蛋白B細(xì)胞抗原表位,結(jié)果顯示,4株ALV-K分離毒株中CAU5006和CAU7176第139位氨基酸突變?yōu)樘K氨酸,CAU7049和CAU7168毒株第139位突變?yōu)榫彼?CAU7176毒株第171位氨基酸,CAU5006、CAU7049和CAU7168毒株第176位氨基酸突變成天冬氨酸,CAU5006、CAU7049和CAU7168毒株第195位氨基酸突變?yōu)榫彼?CAU7176毒株第197位突變?yōu)榻z氨酸、第199位突變?yōu)楸奖彼?CAU5006、CAU7049和CAU7168毒株第200位突變?yōu)楸奖彼?4株ALV-K分離毒株在第216位均突變成精氨酸,CAU7176毒株第271位突變?yōu)楦拾彼?以上氨基酸變化均發(fā)生在預(yù)測(cè)的gp85 B細(xì)胞優(yōu)勢(shì)抗原表位中(圖8),可能導(dǎo)致gp85蛋白抗原性發(fā)生變化。

圖8 ALV-K分離毒株gp85蛋白 B細(xì)胞抗原表位預(yù)測(cè)

分離毒株gp85基因核苷酸序列遺傳進(jìn)化樹如圖9所示,3株ALV-J分離毒株CAU4932、CAU4860和CAU2259與ALV-J各參考毒株在同一進(jìn)化分支上,屬于ALV-J毒株;4株分離毒株CAU7049、CAU5006、CAU7176和CAU7168與ALV-K各參考毒株在同一進(jìn)化分支上,屬于ALV-K毒株;3株ALV-J分離毒株間親緣關(guān)系很近,且與2001年美國分離毒株ADOL-7501親緣關(guān)系較近,屬于同一遺傳進(jìn)化分支,而與ALV-J代表毒株HPRS103親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn);4株ALV-K分離株與日本分離毒株Oki_009以及JS13-DX5、JS13-LH1和SDAUAK-13等國內(nèi)分離的ALV-K毒株親緣關(guān)系較近。

圖9 7株ALV分離毒株與參考毒株基于gp85基因核苷酸序列的遺傳進(jìn)化樹

2.5 間接免疫熒光鑒定ALV分離毒株 使用ALV p27單克隆抗體進(jìn)行間接免疫熒光鑒定,結(jié)果如圖10所示,5株分離毒株CAU7176、CAU5006、CAU4860、CAU2259和CAU7049在熒光顯微鏡下均可看到綠色熒光,陰性對(duì)照未見特異性綠色熒光。結(jié)果表明,該5株分離毒株可在DF-1細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并存在可被抗體識(shí)別的p27抗原表位。

圖10 ALV分離毒株間接免疫熒光鑒定(200×)

3 討論

自從1868年雞的淋巴肉瘤癥狀首次被報(bào)道以來,禽白血病作為一種免疫抑制性疾病在世界各地流行傳播,給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[18]。近十年來,我國大型種雞場高度重視禽白血病凈化并取得顯著成效,許多規(guī)模化雞場已達(dá)到規(guī)定的凈化標(biāo)準(zhǔn)[19]。但由于ALV高變異率和垂直傳播等特征,其仍在一些雞場流行,并不斷出現(xiàn)新毒株[20]。ALV-J毒株于1992年首次在英國被發(fā)現(xiàn)并報(bào)道,而后迅速傳播,導(dǎo)致家禽惡性腫瘤伴有骨髓性白血病,該亞群的高致病性使其相比ALV其他亞群更加普遍[21]。近年來,我國分離到的ALV新型K亞群毒株的復(fù)制能力和致病性較弱,但易與其他ALV亞群病毒混合感染,為ALV防控凈化增加難度[13]。ALV的糖基化包膜蛋白由env基因編碼,其中負(fù)責(zé)與宿主細(xì)胞受體結(jié)合的gp85蛋白具有高變異性[22]。

本試驗(yàn)從國內(nèi)某雞場無菌抗凝血樣本分離獲得7株ALV毒株,進(jìn)行g(shù)p85基因片段克隆和測(cè)序,其中3株為ALV-J毒株,gp85基因片段長度均為918 bp,4株為ALV-K毒株,gp85基因片段長度均為1 008 bp。其中CAU5006毒株與國內(nèi)分離株GDFX0603氨基酸同源性最高,為96.1%,遺傳進(jìn)化樹屬同一分支,表明該雞場流行的ALV-K毒株可能與GDFX0603是同一祖先。

本試驗(yàn)中分離獲得的ALV-K毒株與JS11C1毒株gp85蛋白氨基酸突變率為5.7%～6.8%;遺傳進(jìn)化樹顯示,ALV-K分離毒株gp85基因序列與日本參考毒株Oki_009以及JS13-DX5、JS13-LH1和SDAUAK-13等國內(nèi)分離毒株親緣關(guān)系較近,屬于同一分支,表明ALV-K毒株可能已在國內(nèi)和日本的雞群中傳播并存在了較長時(shí)間,且與廣西和山東的ALV-K毒株發(fā)生過基因重組。此外,雞群存在ALV-J和ALV-K共感染現(xiàn)象,感染ALV多種亞群的病雞臨床癥狀更為明顯[23]。

本試驗(yàn)中分離獲得ALV-J毒株與英國原型株HPRS103gp85基因片段核苷酸同源性為83.2%,氨基酸的變異在整個(gè)序列均有發(fā)生,但高變區(qū)hr1和hr2相對(duì)變異較多,其中某些氨基酸位點(diǎn)的變化可能導(dǎo)致蛋白疏水性改變,進(jìn)而導(dǎo)致gp85蛋白抗原表位發(fā)生變化,該結(jié)果證實(shí)了gp85 基因片段具有很強(qiáng)的變異性,同時(shí)也證實(shí)了ALV-J毒株感染雞群的范圍正在逐步擴(kuò)大。將ALV分離毒株gp85蛋白氨基酸序列與預(yù)測(cè)的gp85蛋白B細(xì)胞抗原表位對(duì)比發(fā)現(xiàn),ALV分離毒株gp85蛋白部分氨基酸突變發(fā)生在預(yù)測(cè)的B細(xì)胞抗原表位上,這可能使gp85蛋白抗原性發(fā)生變化,增加ALV分群鑒定難度。

綜上所述,本試驗(yàn)分離獲得7株ALV毒株,對(duì)其gp85基因進(jìn)行克隆、測(cè)序和遺傳進(jìn)化樹分析,豐富了ALV基因組庫資源,同時(shí)也為ALV演化特征提供了一定參考,但分離毒株gp85蛋白變異的具體流行規(guī)律和趨勢(shì)有待未來進(jìn)一步研究。我國地方品系雞群背景復(fù)雜,加之ALV具有隱性感染、混合感染和易突變的特性,目前我國尚不能達(dá)到ALV的全面凈化,未來應(yīng)進(jìn)一步深入研究ALV致病特征、流行規(guī)律和遺傳進(jìn)化演變等,通過健全完善嚴(yán)格的凈化體系,加速種雞群ALV凈化,減少禽白血病給我國養(yǎng)禽業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失。