摘 要：目的：測定不同產(chǎn)地木瓜中齊墩果酸和熊果酸的含量。方法：以云南保山、大理兩產(chǎn)地的木瓜為試驗材料，通過正交試驗對提取方法進行優(yōu)化，采用高效液相色譜法測定木瓜中齊墩果酸和熊果酸含量。結果：當提取試劑為甲醇、浸泡時間為1 h、超聲時間為30 min時，提取效果最佳。結論：不同產(chǎn)地木瓜中齊墩果酸和熊果酸的含量有差異，為木瓜中齊墩果酸和熊果酸的含量測定提供理論依據(jù)。

關鍵詞：木瓜；高效液相色譜法（HPLC）；齊墩果酸；熊果酸；含量測定

Determination of Oleanolic Acid and Ursolic Acid in Papaya in Different Origin

RAN Yanrui， ZHANG Li， WANG Can， CHEN Yan， WANG Rui

（Kunming City Food and Drug Control Institute， Kunming 650000， China）

Abstract： Objective： To determine the content of oleanolic acid and ursolic acid in papaya from different regions. Method： Using papaya from Baoshan and Dali regions in Yunnan province as experimental materials， the extraction method was optimized through orthogonal experiments. High performance liquid chromatography was used to determine the content of oleanolic acid and ursolic acid in papaya. Result： The best extraction effect was achieved when the extraction reagent was methanol， soaking time was 1 h， and ultrasound time was"30 min. Conclusion： The main chemical components of papaya from different regions show differences in the content of oleanolic acid and ursolic acid， providing a theoretical basis for the determination of oleanolic acid and ursolic acid content in papaya.

Keywords： papaya; high performance liquid chromatography（HPLC）; oleanolic acid; ursolic acid; content determination

木瓜為薔薇科植物貼梗海棠的干燥近成熟果實，主產(chǎn)于安徽省、四川省、重慶市、貴州省和云南省等地，酸木瓜、百花木瓜在云南和貴州等地區(qū)常作食品使用，具有悠久的食用歷史[1-2]。木瓜中含有果酸、熊果酸等活性成分，其在抗菌、抗氧化、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等方面具有顯著作用[2]。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

白花木瓜、酸木瓜（云南騰沖），白花木瓜、酸木瓜（云南大理），各10 kg。齊墩果酸、熊果酸均為100 mg，中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙醇、乙酸乙酯和乙酸銨，均為色譜純。

1.2 儀器

Agilent1260高效液相色譜儀、電熱恒溫鼓風干燥箱、純水機/超純水一體機、數(shù)控超聲波清洗器。

1.3 樣品前處理

將木瓜清洗干凈，對半切開，清除木瓜籽后切成薄片，將薄片放于55 ℃烘箱內(nèi)烘干，將烘干后的木瓜片粉碎，存放于密閉容器中，備用。

1.4 前處理優(yōu)化

在前期單因素實驗的基礎上，選擇提取溶劑[3-4]、浸泡時間和超聲時間作為考察因素，以齊墩果酸和熊果酸的含量為評價指標，進行三因素三水平L9（33）正交試驗，正交因素水平見表1。

1.5 對照品溶液的制備

分別準確稱取齊墩果酸和熊果酸0.010 12 g和0.010 36 g，使用甲醇溶解并分別定容至5 mL，制成齊墩果酸、熊果酸濃度分別為2.024 0 mg·mL-1、2.072 0 mg·mL-1儲備液，用500 μL移液槍分別準確移取100 μL齊墩果酸和熊果酸到1 mL的容量瓶，然后用甲醇定容到刻度線，得到齊墩果酸的濃度為202.400 0 μg·mL-1，熊果酸的濃度為207.200 0 μg·mL-1的混標溶液。然后將混標溶液稀釋成7組不同濃度的標準溶液，齊墩果酸的濃度依次為3.162 5 μg·mL-1、6.325 0 μg·mL-1、12.650 0 μg·mL-1、25.300 0 μg·mL-1、50.600 0 μg·mL-1、101.200 0 μg·mL-1和202.400 0 μg·mL-1；熊果酸的濃度依次為3.237 5 μg·mL-1、6.475 0 μg·mL-1、12.950 0 μg·mL-1、25.900 0 μg·mL-1、51.800 0 μg·mL-1、103.600 0 μg·mL-1和207.200 0 μg·mL-1，上機測定。

1.6 色譜條件

色譜柱為Hypersll GOLD C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.2%乙酸銨（85∶15）；流速為0.6 mL·min-1；檢測波長為210 nm；柱溫為20 ℃。

1.7 樣品測定法

稱取騰沖白花木瓜粉末約0.5 g，置于離心管中，加入25 mL甲醇，密塞，振蕩25 min，浸泡1 h，在20 ℃的條件下超聲（功率100 W，頻率53 kHz）30 min，冷卻至室溫，離心10 min（轉速4 000 r·min-1），取上清液過0.22 μm濾膜，上機測定。

1.8 齊墩果酸、熊果酸的含量測定

齊墩果酸、熊果酸的含量計算公式為式中：X為試樣中齊墩果酸、熊果酸的含量，mg·kg-1；c為試樣液中齊墩果酸、熊果酸的質(zhì)量濃度，μg·mL-1；V為被測試樣的總體積，mL；m為稱取試樣的質(zhì)量，g；1 000—換算系數(shù)。計算結果用重復性條件下獲得的3次獨立測定結果的算數(shù)平均值表示，結果保留3位小數(shù)。

2 結果與分析

2.1 齊墩果酸和熊果酸對照品、供試品的色譜圖

將對照品、供試品上機檢測，對照品、供試品圖譜如圖1、圖2所示。

2.2 前處理條件優(yōu)化

由表2、表3可知，木瓜中齊墩果酸的最優(yōu)提取條件為A1B2C2，熊果酸的最優(yōu)提取條件為A1B2C2，即當提取溶劑為甲醇、浸泡時間為1 h、超聲時間為30 min時，齊墩果酸和熊果酸的提取量最優(yōu)，分別為1.443 mg·kg-1、4.144 mg·kg-1。

2.3 標準曲線的繪制

以齊墩果酸濃度為橫軸，峰面積為縱軸，繪制標準曲線，見圖3、圖4。齊墩果酸和熊果酸分別在3.162 5～202.400 0 μg·mL-1和3.237 5～207.200 0 μg·mL-1時，線性關系良好，齊墩果酸線性方程為Y=8.547 36x-18.619 69，R=0.999 8；熊果酸線性方程為Y=7.885 72x-18.107 12，R=0.999 7。相關系數(shù)＞0.995符合《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）要求。

2.4 回收率試驗

取適量的標準溶液和0.5 g的騰沖白花木瓜粉末混合，共4份，按照“1.6”和“1.7”處理后，連續(xù)測量4次，確定齊墩果酸和熊果酸的含量。由表4可知，齊墩果酸和熊果酸的平均加標回收率分別為96.96%和96.30%，說明本方法準確度良好，符合GB/T 27404—2008[5]的要求，可行性高。

2.5 不同產(chǎn)地木瓜中齊墩果酸和熊果酸含量的測定

準確稱取4種木瓜粉末各0.5 g，每個品種木瓜稱取兩份，按“1.7”項下的方法制備供試品溶液，在“1.6”的色譜條件下分別進樣測定。由表5可知，不同地區(qū)的木瓜中齊墩果酸和熊果酸的含量有差異。

3 結論

本文通過正交實驗設計，得到最佳提取條件為提取試劑甲醇、浸泡1 h、超聲30 min，在此條件下通過高效液相色譜方法進行檢測，能夠準確測定出木瓜中的齊墩果酸、熊果酸的含量，說明不同地區(qū)的木瓜中齊墩果酸和熊果酸的含量有一定差異。

參考文獻

[1] 郭坤元，張美德，吳育中，等.不同產(chǎn)區(qū)皺皮木瓜性狀及成分指標的比較研究[J].中藥材，2020，43（10）：2396-2400.

[2] 李聰，熊海容，彭曉蔓，等.木瓜提取物對小鼠脂肪肝的保護作用[J].現(xiàn)代食品科技，2018，34（7）：28-34.

[3] 鄒妍，鄢海燕.中藥木瓜的化學成分和藥理活性研究進展[J].國際藥學研究雜志，2019，46（7）：507-515.

[4] 朱學娟.ICP-MS測定木瓜中26種微量元素[J].惠州學院學報（自然科學版），2009，29（6）：15-18.

[5]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測：GB/T 27404—2008[S].北京：中國標準出版社，2008.

作者簡介：冉艷瑞（1992—），女，云南大理人，本科，助理工程師。研究方向：食品檢測。