王文瑞，韓文華，董愛愛，王維峰

摘要目的：觀察腧穴“解郁方”對(duì)慢性不可預(yù)測(cè)輕度應(yīng)激（CUMS）抑郁大鼠下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）/酪氨酸激酶B受體（TrkB）/環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）信號(hào)通路的影響。方法：40只無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)Sprague Danley（SD）雄性大鼠隨機(jī)分為空白組（10只）、模型組（10只）、西藥組（10只）、針刺組（10只），除空白組外，其余3組連續(xù)28 d 構(gòu)建CUMS抑郁大鼠模型，造模成功后，西藥組連續(xù)14 d灌胃鹽酸帕羅西汀混懸液，每日1次；針刺組針刺百會(huì)、太沖、神門，每日1次，每次20 min，連續(xù)針刺14 d。蘇木素-伊紅（HE）染色觀察大鼠海馬病理變化，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定血清促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、皮質(zhì)醇（CORT）水平；免疫組化（IHC）檢測(cè)海馬BDNF、TrkB表達(dá)情況，蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western Blot）及實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）測(cè)定海馬BDNF、TrkB、CREB蛋白及mRNA的表達(dá)。結(jié)果：與空白組比較，模型組血清CRH、ACTH和CORT含量上升（P＜0.01），海馬病理?yè)p傷嚴(yán)重，海馬BDNF、TrkB平均光密度降低（P＜0.01），BDNF、TrkB、CREB蛋白及mRNA明顯下降（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，針刺組血清CRH、ACTH、CORT含量下降（P＜0.05），海馬病理?yè)p害明顯減輕，BDNF、TrkB平均光密度明顯增加（P＜0.05），BDNF、CREB、TrkB蛋白及mRNA表達(dá)水平上升（P＜0.05）。結(jié)論：腧穴“解郁方”可能通過調(diào)節(jié)HPA軸和調(diào)控BDNF/TrkB/CREB信號(hào)通路，改善CUMS誘導(dǎo)的大鼠抑郁樣行為。

關(guān)鍵詞抑郁癥；慢性不可預(yù)測(cè)輕度應(yīng)激；腧穴“解郁方”；下丘腦-垂體-腎上腺軸；腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子/酪氨酸激酶B受體/環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白信號(hào)通路；海馬；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.08.011

Effects of Acupuncture "Jieyu Formula" on Hypothalamic-pituitary-adrenal Axis and BDNF/TrkB/CREB Pathway in Rats with Chronic and Unpredictable Mild Stress-induced Depression

WANG Wenrui， HAN Wenhua， DONG Aiai， WANG Weifeng

The Second Clinical College of Shanxi Medical University， Jinzhong 030619， Shanxi， China

Corresponding AuthorWANG Weifeng， E-mail： dzywwf@163.com

AbstractObjective：To observe the effects of "Jiyu Formula" on the hypothalamic-pituitary-adrenal（HPA） axis and? brain-derived neurotrophic factor（BDNF）/tyrosine kinase B receptor（TrkB）/cyclic adenosine phosphate reaction element binding protein（CREB） signaling pathway on chronic and unpredictable mild stress（CUMS） depressed rats.Methods：Forty specific pathogen free（SPF） grade SD male rats were randomly divided into blank group（10 rats），model group（10 rats），western medicine group（10 rats），and acupuncture group（10 rats）.Except for the blank group，the other three groups were continuously used to construct a depression rat model by CUMS for 28 days.After successful modeling，the western medicine group was gavaged Paxil hydrochloride suspension once a day for 14 days.In the acupuncture group，Baihui，Taichong and Shenmen were acupunctured once a day for 20 minutes each time for 14 days.The pathological changes of hippocampus were detected by hematoxylin-eosin（HE） staining，and the levels of serum adrenocorticotropin releasing hormone（CRH），adrenocorticotropin（ACTH） and cortisol（CORT） were detected by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.The expressions of BDNF and TrkB in hippocampus were detected by immunohistochemistry（IHC），and the expressions of BDNF，TrkB and CREB protein and mRNA in hippocampus were detected by Western Blot and real-time fluorescence quantification and polymerase chain reaction（PCR）.Results：Compared with blank group，the contents of serum CRH，ACTH and CORT in the model group significantly increased（P＜0.01），the hippocampal pathological injury was serious，the average optical density of BDNF and TrkB in hippocampus significantly decreased（P＜0.01）.The protein and mRNA levels of BDNF，TrkB，and CREB were significantly decreased（P＜0.05 or P＜0.01）.Compared with model group，the contents of serum CRH，ACTH and CORT in the acupuncture group significantly decreased（P＜0.05），the hippocampal pathological injury was significantly alleviated，the average optical density of BDNF and TrkB significantly increased（P＜0.05） The protein and mRNA levels of BDNF，TrkB，and CREB were significantly increased（P＜0.05）.Conclusion：Acupuncture "Jieyu Formula" could improve depression-like behavior induced by CUMS in rats by regulating HPA axis and BDNF/TrkB/CREB signaling pathway.

Keywordsdepression; chronic unpredictable mild stress; acupoint "Jieyu Formula"; hypothalamic-pituitary-adrenal axis; brain-derived neurotrophic factor/tyrosine kinase B receptor/cyclic adenosine phosphate reaction element binding protein signaling pathway; hippocampus; experimental study

抑郁癥（depression）是一組精神障礙疾病，主要表現(xiàn)為情緒不振、缺乏快感、思維遲鈍、認(rèn)知功能減退、睡眠障礙等臨床癥狀［1］。根據(jù)相關(guān)報(bào)道，抑郁癥已經(jīng)被確認(rèn)成為一種迅速增加的流行病，預(yù)計(jì)將成為2030年全球疾病負(fù)擔(dān)的主要疾病之一［2］。目前，臨床上廣泛應(yīng)用于抑郁癥治療的藥物有選擇性單胺遞質(zhì)再攝取抑制劑，如鹽酸帕羅西汀，雖然可以緩解部分抑郁癥癥狀，但這類藥物主要在單胺系統(tǒng)中發(fā)揮作用，作用部位比較單一，其受長(zhǎng)期服用、副作用大、病人難以堅(jiān)持等問題的制約［3］，只有40%～50%的抑郁癥狀可以緩解［4］。

針灸逐漸成為治療抑郁癥的一種重要替代療法，這在世界范圍內(nèi)已得到普遍認(rèn)可［5］。臨床研究及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均顯示，針刺治療抑郁癥效果頗佳［6-7］。現(xiàn)代研究表明，針刺可通過多層次、多靶點(diǎn)、多系統(tǒng)對(duì)抑郁癥及其兼癥起到很好的調(diào)節(jié)作用［8］。針刺治療抑郁癥臨床療效明顯，尚需進(jìn)行規(guī)范處方下的多重機(jī)制研究。本課題組前期經(jīng)過篩選之后發(fā)現(xiàn)針刺治療抑郁癥的有效腧穴組方為百會(huì)、神門、太沖（簡(jiǎn)稱腧穴“解郁方”［9］）。有研究發(fā)現(xiàn)腧穴“解郁方”能使血清炎性因子和激素水平降低［10］。本研究以下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）/酪氨酸激酶B受體（TrkB）/環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）信號(hào)通路為基礎(chǔ)，探討腧穴“解郁方”抗抑郁的可能作用機(jī)制，為腧穴“解郁方”治療抑郁癥提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1主要試劑與儀器

鹽酸帕羅西?。ㄕ憬夥逅帢I(yè)有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20040533，批號(hào)：220403）；針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司生產(chǎn)，規(guī)格0.35 mm×25 mm，批號(hào)：216010）；蔗糖（天津天力化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20230402）；伊萊瑞特生產(chǎn)的大鼠促腎上腺皮質(zhì)激酶釋放激素（CRH）試劑盒（批號(hào)：KL03TF0J9073）；促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）試劑盒（批號(hào)：KL02D6206258，伊萊瑞特）；聯(lián)科生物生產(chǎn)的皮質(zhì)醇（CORT）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒（批號(hào)：A810030323）；RNA提取液（貨號(hào)：G3013，武漢賽維爾生物科技有限公司生產(chǎn)）；BDNF、TrkB、CREB、β-actin均為一抗、辣根過氧化物酶（HRP）-山羊抗兔（由Servicebio提供）。

自制曠場(chǎng)試驗(yàn)箱（100 cm×100 cm）；大鼠籠及固定板（由山西中醫(yī)藥大學(xué)提供）；臺(tái)式高速冷凍微量離心機(jī)（D3024R，DragonLab）；垂直電泳儀（SVE-2，Servicebio）；熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）儀（CFX Connect，Bio-rad）；武漢賽維爾生物科技有限公司生產(chǎn)的渦旋混勻儀（貨號(hào)SMV-3500）；電子天平［型號(hào)ME203E/02，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；酶標(biāo)檢測(cè)儀（型號(hào)Epoch，BioTeK生產(chǎn)）。

1.2動(dòng)物

在山西中醫(yī)藥大學(xué)科研樓實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，使用北京斯貝福有限公司提供的無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)Spragu Dowley（SD）雄性大鼠40只，體質(zhì)量130～150 g，許可證號(hào)為SCXK（京）2019-0010，標(biāo)準(zhǔn)鼠籠，飼養(yǎng)環(huán)境溫度維持在22～25 ℃，相對(duì)濕度控制在45%～50%，光照周期為12 h/12 h，日溫差≤4 ℃，大鼠在飼養(yǎng)期間自由活動(dòng)、飲水、攝食。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)山西中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，倫理批號(hào)：2021DW175。實(shí)驗(yàn)過程中符合國(guó)家和學(xué)校有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的管理和使用規(guī)定。

1.3方法

1.3.1模型制備

采用慢性不可預(yù)知溫應(yīng)激法（CUMS）制備大鼠抑郁模型［11］，使用刺激方法包括：24 h禁水，24 h禁食，5 min熱刺激，5 min 4 ℃冷水游泳，5 min夾尾，24 h傾斜籠具45°，24 h潮濕墊料，每天隨機(jī)給出1種應(yīng)激，保證不會(huì)連續(xù)出現(xiàn)相同的刺激。造模28 d后進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)（sucrose preference test，SPT）和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)（open field test，OFT）評(píng)價(jià)模型是否成功建立。

1.3.2動(dòng)物分組及干預(yù)方法

經(jīng)過1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)，大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、模型組、西藥組、針刺組，每組10只?？瞻捉M不施加任何應(yīng)激方式，每籠5只，正常喂養(yǎng)。模型組給予不可預(yù)見的28 d應(yīng)激刺激，單籠飼養(yǎng)。西藥組孤養(yǎng)，造模成功后給予鹽酸帕羅西汀，給藥劑量為3.3 mg/kg，臨用時(shí)溶于蒸餾水配成混懸液，以1 mL/100 g灌胃給藥，每日1次，連續(xù)14 d。針刺組孤養(yǎng)，造模成功后，選擇燕平教授團(tuán)隊(duì)前期通過實(shí)驗(yàn)論證治療抑郁癥的最佳穴位組方，即百會(huì)、神門、太沖。穴位定位參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［12］，針刺治療從造模第1天開始，留針20 min，每日1次，干預(yù)14 d。

1.3.3行為學(xué)檢測(cè)

1.3.3.1蔗糖偏好實(shí)驗(yàn)

蔗糖偏好實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)抑郁癥一個(gè)經(jīng)典核心癥狀的測(cè)試即缺乏快感測(cè)試［13］。提前60 h訓(xùn)練大鼠飲用1%的蔗糖溶液：24 h給每只動(dòng)物2瓶1%的蔗糖溶液，以適應(yīng)糖水；24 h給予1瓶糖水，1瓶純凈水；之后，大鼠禁食禁水12 h。24 h給予大鼠事先稱量的1瓶純水和1瓶糖水，計(jì)算大鼠在24 h內(nèi)的糖水偏好度。糖水偏好度（%）＝糖水消耗量（g）／糖水消耗量（g）＋純水消耗量（g）×100%。

1.3.3.2曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)是一種評(píng)價(jià)大鼠自主活動(dòng)的方法，是評(píng)估其在新環(huán)境中自主活動(dòng)、探究行為和緊張程度的一種方法，當(dāng)活動(dòng)減少時(shí)，表明大鼠的探索行為減少、緊張程度增高，同時(shí)抑郁狀態(tài)也會(huì)增加［14］。在安靜環(huán)境下，將大鼠放入自制的曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)（共25格），每只單箱開展實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，記錄每只大鼠的水平跨越格數(shù)及上肢直立的次數(shù)。每只大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)束后均需清潔實(shí)驗(yàn)箱，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.3.4采用ELISA方法檢測(cè)血清CRH、ACTH、CORT水平

大鼠采用20%烏拉坦行腹腔注射麻醉，取5 mL腹主動(dòng)脈血，離心15 min（3 000 r/min），用移液槍將血清移入環(huán)氧樹脂（EP）管內(nèi)，在－80 ℃冰箱內(nèi)保存待測(cè)。采用ELISA法檢測(cè)，按ELISA試劑盒說(shuō)明書對(duì)大鼠血清CRH、ACTH、CORT含量進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.5用HE染色法觀察大鼠海馬CA3區(qū)細(xì)胞形態(tài)變化

取血后，行斷頭取腦術(shù)，將腦組織置于4%多聚甲醛溶液中固定，應(yīng)用HE染色方法，根據(jù)HE染色試劑盒說(shuō)明書制備石蠟切片，中性樹膠密封后，用顯微鏡觀察大鼠海馬區(qū)的病理變化。

1.3.6免疫組化法檢測(cè)大鼠海馬組織BDNF、TrkB含量

取石蠟切片經(jīng)脫蠟，根據(jù)BDNF、TrkB免疫組化說(shuō)明書進(jìn)行操作，經(jīng)過脫蠟至水、抗原修復(fù)、滅活，一抗孵育：滴加BDNF、trkB抗體，37 ℃濕盒孵育2 h，二抗孵育：滴加HRP-山羊抗兔，37 ℃孵育30 min，之后脫水透明封片后，用陽(yáng)性深淺評(píng)價(jià)陽(yáng)性強(qiáng)弱。

1.3.7大鼠海馬組織BDNF、TrkB、CREB的蛋白表達(dá)水平

蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western Blot）測(cè)定海馬BDNF、TrkB、CREB的蛋白表達(dá)。在海馬組織中加入10倍組織體積的裂解液進(jìn)行勻漿，收集上清液，用二喹啉甲酸法（BCA）測(cè)定總蛋白濃度，沸水浴變性15 min，十二烷基硫酸鈉（SDS）-聚丙烯酰胺（PAGE）凝膠電泳，進(jìn)行轉(zhuǎn)膜后，加上5%的牛奶，按1∶1 000添加配置好的BDNF、TrkB、CREB一抗，隔天用TBST緩沖液快速?zèng)_洗膜，滴加稀釋后的二抗（1∶5 000），常溫孵育30 min，TBST洗膜，曝光保存原始圖為TIFF格式，利用Image J軟件分析Western Blot 條帶灰度值，計(jì)算目的蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.3.8大鼠海馬組織BDNF、TrkB、CREB的 mRNA表達(dá)水平

實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)量BDNF、TrkB、CREB的mRNA表達(dá)。用Trizol試劑盒提取研磨組織后的總RNA，檢測(cè)其濃度及純度，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄總RNA為cDNA。用熒光定量PCR儀擴(kuò)增，計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量采用2－ΔΔCt法，以GAPDH為內(nèi)參，引物名稱及序列見表1。

1.3.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 25.0軟件，定量資料符合正態(tài)分布且方差齊時(shí)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組比較單因素方差分析，兩組數(shù)據(jù)分析均采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；定性資料采用例數(shù)、百分比（%）表示，采取χ2檢驗(yàn)；用Graphpad prism8.0作圖。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1腧穴“解郁方”對(duì)抑郁大鼠行為學(xué)的作用

2.1.1各組大鼠蔗糖偏好度比較

與空白組比較，模型組大鼠糖水消耗量顯著降低（P＜0.01），提示CUMS大鼠模型復(fù)制成功。針刺組、西藥組與模型組相比，糖水消耗量顯著提高（P＜0.01）；而西藥組和針刺組糖水消耗量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明腧穴“解郁方”可有效提高大鼠的快感度。詳見圖1。

2.1.2各組大鼠水平運(yùn)動(dòng)及垂直運(yùn)動(dòng)得分比較

與空白組比較，模型組大鼠水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)的得分減少（P＜0.01）；與模型組比較，針刺組、西藥組水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)的得分增加（P＜0.01），西藥組和針刺組水平運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng)得分比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可見針刺可有效提高抑郁大鼠的自主活動(dòng)，緩解其緊張度。詳見圖2。

2.2腧穴“解郁方”對(duì)大鼠海馬CA3區(qū)病理變化的影響

HE染色結(jié)果表明，空白組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞排列整齊，結(jié)構(gòu)完整；模型組海馬CA3區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)不明確，排列松散，存在異常結(jié)構(gòu)；與模型組比較，針刺組海馬CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)量較模型組明顯增加，排列較為整齊，表明大鼠海馬神經(jīng)元的病理?yè)p傷可通過腧穴“解郁方”得到改善。詳見圖3。

2.3腧穴“解郁方”對(duì)大鼠海馬組織中BDNF、TrkB表達(dá)的影響

與空白組比較，模型組大鼠海馬BDNF、TrkB的平均光密度值減少（P＜0.01）；與模型組相比，針刺組、西藥組BDNF、TrkB的平均光密度值明顯增加（P＜0.05），西藥組和針刺組BDNF、TrkB之間的平均光密度值表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見圖4、圖5。

2.4腧穴“解郁方”對(duì)大鼠血清CRH、ACTH、CORT的影響

與空白組比較，模型組大鼠血清CRH、ACTH、CORT含量增加（P＜0.01）；與模型組比較，針刺組、西藥組大鼠CRH、ACTH、CORT含量明顯下降（P＜0.05），西藥組與針刺組各項(xiàng)含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。證明腧穴“解郁方”對(duì)HPA軸亢進(jìn)有調(diào)節(jié)作用。詳見圖6。

2.5腧穴“解郁方”對(duì)抑郁大鼠海馬組織BDNF、TrkB、CREB蛋白的影響

與空白組比較，模型組大鼠海馬組織中BDNF、TrkB、CREB蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，針刺組、西藥組大鼠海馬組織中BDNF、TrkB、CREB蛋白表達(dá)水平明顯增加（P＜0.05）。結(jié)果表明，腧穴“解郁方”可提高大鼠海馬組織中BDNF、TrkB、CREB蛋白表達(dá)，從而改善大鼠的抑郁狀態(tài)。詳見圖7、圖8。

2.6腧穴“解郁方”對(duì)抑郁大鼠海馬組織中BDNF、TrkB、CREB mRNA表達(dá)的影響

與空白組比較，模型組大鼠海馬組織中BDNF、TrkB、CREB mRNA表達(dá)水平明顯下降（P＜0.05或P＜0.01）；與模型組比較，針刺組、西藥組BDNF、TrkB、CREB mRNA表達(dá)水平明顯增加（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腧穴“解郁方”能夠增加BDNF、TrkB、CREB mRNA的表達(dá)，從而起到緩解大鼠抑郁癥狀的作用。詳見圖9。

3討論

CUMS是一種應(yīng)激反應(yīng)，被認(rèn)為是研究抑郁癥病理生理機(jī)制的最佳模型［13］，因此，本研究利用CUMS法誘導(dǎo)大鼠抑郁模型，模型組經(jīng)過CUMS法造模后，糖水偏好度等降低，HE染色結(jié)果顯示大鼠海馬細(xì)胞出現(xiàn)溶解現(xiàn)象，細(xì)胞排列紊亂，證明CUMS法造模會(huì)造成大鼠海馬組織的損傷。謝保弟［15］研究顯示，腧穴“解郁方”可能通過對(duì)抑郁大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用使海馬神經(jīng)細(xì)胞減少相對(duì)較少。本研究顯示腧穴“解郁方”可使大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞排列趨于規(guī)則，破壞溶解現(xiàn)象減少。

抑郁癥是一種常見的精神類疾病，其發(fā)病機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜［16］。本研究從HPA軸失衡和BDNF兩個(gè)角度闡述抑郁癥的相關(guān)機(jī)制。在抑郁癥的發(fā)病過程中，HPA軸起著重要的作用［17］。研究表明，HPA軸在應(yīng)激狀態(tài)下可被過度激活，導(dǎo)致大量應(yīng)激激素釋放，如CRH、ACTH、CORT等，導(dǎo)致機(jī)體負(fù)反饋機(jī)制受損和紊亂［18］。高水平的應(yīng)激激素會(huì)進(jìn)一步損害顳葉和海馬的結(jié)構(gòu)和功能，引起錐體神經(jīng)元萎縮和再生功能障礙，最終表現(xiàn)為抑郁癥狀［19］。本研究ELISA結(jié)果顯示，模型組大鼠血清中CRH、ACTH、CORT含量顯著升高，提示抑郁大鼠發(fā)生了HPA軸的失衡。

BDNF屬于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族，是一種在前額葉皮層和海馬有高度表達(dá)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中分布最廣泛的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子［20］。BDNF能維持情緒和認(rèn)知功能，對(duì)學(xué)習(xí)和記憶起著至關(guān)重要的作用，可以促進(jìn)軸突生長(zhǎng)、樹突細(xì)胞成熟，提高突觸可塑性［21］。BDNF啟動(dòng)一系列下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，與TrkB受體高親和力結(jié)合后，通過促進(jìn)神經(jīng)元的生存、發(fā)育、生長(zhǎng)和分化，起到調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)突觸可塑性和神經(jīng)再生的作用，達(dá)到抗抑郁的作用［22］。巴戟天可通過BDNF/TrkB/CREB信號(hào)通路對(duì)抑郁大鼠海馬神經(jīng)元損傷發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用，改善抑郁行為［23］；電針可通過增加海馬組織型纖溶酶原激活物（tPA），激活BDNF/TrkB通路從而起到抗抑郁作用［24］；激活BDNF/TrkB/CREB通路可改善腦卒中后抑郁大鼠的抑郁樣行為［25］。以上研究均說(shuō)明BDNF/TrkB/CREB通路在抑郁癥中發(fā)揮重要作用。

在腧穴“解郁方”中，百會(huì)位于頭部，是督脈與足太陽(yáng)之會(huì)，具有開竅醒神，調(diào)節(jié)陰陽(yáng)之效；神門穴為手少陰心經(jīng)原穴，氣血輸注之處，可起到安定心神、調(diào)節(jié)氣血的作用；太沖為足厥陰肝經(jīng)之原穴，具有調(diào)暢氣機(jī)的作用，與情緒調(diào)節(jié)功能有著密切的聯(lián)系。三穴相配，上中下共調(diào)，可達(dá)到調(diào)和陰陽(yáng)、疏肝解郁、安神定志的功效，進(jìn)而達(dá)到治療抑郁癥的目的。喬瑞瑞［26］研究顯示，腧穴“解郁方”可降低大鼠血清中ACTH、CORT的含量，起到治療抑郁作用；李佳豪等［27］研究顯示，腧穴“解郁方”通過激活與BDNF相關(guān)信號(hào)通路，改善大鼠抑郁行為。CUMS法誘導(dǎo)的大鼠海馬組織BDNF、TrkB、CREB蛋白含量及mRNA表達(dá)水平降低，經(jīng)腧穴“解郁方”干預(yù)后，BDNF、TrkB、CREB蛋白含量及mRNA表達(dá)水平上升，可能與調(diào)節(jié)BDNF/TrkB/CREB信號(hào)通路有關(guān)。

綜上所述，腧穴“解郁方”可能通過拮抗HPA軸失衡及調(diào)節(jié)BDNF/TrkB/CREB信號(hào)通路，從而改善抑郁大鼠的抑郁樣行為。

參考文獻(xiàn)：

［1］ZHOU Y H，LEUNG D，LIN J K，et al.Experiences of seeking and accessing medical care among persons with major depression：a qualitative descriptive study of persons with depression in China［J］.Front Psychiatry，2023，14：1092711.

［2］ZULKIPLY S H，ABDUL MANAF R，DAHLAN R，et al.Effect of 'Kuat' a theory- and web-based health education intervention on mental heal th literacy among university students：a study protocol［J］.PLoS One，2023，18（3）：e0283747.

［3］ZHOU C H，CHEN Y H，XUE S S，et al.rTMS ameliorates depressive-like behaviors and regulates the gut microbiome and medium- and long-chain fatty acids in mice exposed to chronic unpredictable mild stress［J］.CNS Neurosci Ther，2023，29（11）：3549-3566.

［4］ZHANG Y，ANOOPKUMAR-DUKIE S，DAVEY A K.SIRT1 and SIRT2 modulators：potential anti-inflammatory treatment for depression？［J］.Biomolecules，2021，11（3）：353.

［5］邵欣，朱春霖，楊萬(wàn)芳，等.撳針耳穴治療中風(fēng)后抑郁增效的臨床研究［J］.四川中醫(yī)，2023，41（3）：211-213.

［6］倪思銘，蔣星卓，彭?yè)碥?調(diào)神解郁法針刺聯(lián)合鹽酸舍曲林片治療卒中后抑郁：隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)［J］.中國(guó)針灸，2023，43（1）：19-22;66.

［7］YAMAMOTO T，KAWANOKUCHI J，NAGAOKA N，et al.Antidepressant effects of acupuncture in a murine model：regulation of neurotrophic factors［J］.Acupunct Med，2023，41（1）：38-47.

［8］孫繼飛，陳麗梅，王智，等.抑郁癥的針灸作用機(jī)制及療效研究進(jìn)展［J］.世界中醫(yī)藥，2023，18（2）：291-295.

［9］燕平，金曉飛.電針治療抑郁癥最佳腧穴處方及電針頻率篩選的研究［C］//.第十八屆針灸對(duì)機(jī)體功能的調(diào)節(jié)機(jī)制及針灸臨床獨(dú)特經(jīng)驗(yàn)研討會(huì)會(huì)議論文集.重慶：2016.

［10］李佳茹，張蕊，楊郁鵬，等.電針腧穴“解郁方”對(duì)抑郁癥模型大鼠血清炎癥因子及激素水平的影響［J］.中國(guó)民間療法，2020，28（24）：97-98;119.

［11］WILLNER P.Animal models of depression：validity and applications［J］.Adv Biochem Psychopharmacol，1995，49：19-41.

［12］唐勇.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)［M］.3版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2021：1-5.

［13］HE L W，ZENG L，TIAN N，et al.Optimization of food deprivation and sucrose preference test in SD rat model undergoing chronic unpredictable mild stress［J］.Animal Model Exp Med，2020，3（1）：69-78.

［14］QIU W，WU Q，ZHANG K，et al.Xiaoyaosan ameliorates depressive-like behavior and susceptibility to glucose intolerance in rat：involvement of LepR-STAT3/PI3K pathway in hypothalamic arcuate nucleus［J］.BMC Complement Med Ther，2023，23（1）：116.

［15］謝保弟.腧穴“解郁方”對(duì)抑郁大鼠海馬影響的觀察［D］.太原：山西中醫(yī)藥大學(xué)，2017.

［16］尹一淑，劉軍蓮，王佳平，等.抑郁癥相關(guān)發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)綜述，2022，28（12）：2368-2372.

［17］WANG H，HU J，HU J，et al.Antidepressant effect of 4-Butyl-alpha-agarofuran via HPA axis and serotonin system［J］.Brain Res Bull，2023，198：3-14.

［18］LEITE J A，ORELLANA A M，ANDREOTTI D Z，et al.Ouabain reverts CUS-induced disruption of the HPA axis and avoids long-term spatial memory deficits［J］.Biomedicines，2023，11（4）：1177.

［19］LIU J，MENG T，WANG C，et al.Natural products for the treatment of depression：insights into signal pathways influencing the hypothalamic-pituitary-adrenal axis［J］.Medicine（Baltimore），2023，102（44）：e35862.

［20］GLIWINSKA A，CZUBILINSKA-ADA J，WIECKIEWICZ G，et al.The role of brain-derived neurotrophic factor（BDNF）in diagnosis and treatment of epilepsy，depression，schizophrenia，anorexia nervosa and Alzheimer′s disease as highly drug-resistant diseases：a narrative review［J］.Brain Sci，2023，13（2）：163.

［21］NUMAKAWA T，ODAKA H，ADACHI N.Actions of brain-derived neurotrophin factor in the neurogenesis and neuronal function，and its involvement in the pathophysiology of brain diseases［J］.Int J Mol Sci，2018，19（11）：E3650.

［22］ZHONG Y，DU Q，WANG Z，et al.Antidepressant effect of Perilla frutescens essential oil through monoamine neurotransmitters and BDNF/TrkB signal pathway［J］.J Ethnopharmacol，2024，318（pt a）：116840.

［23］王欽，刁麗梅，蔡蕭君.基于BDNF/CREB信號(hào)通路探討巴戟天對(duì)慢性應(yīng)激抑郁大鼠海馬神經(jīng)元損傷的影響［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2024，42（2）：69-74;275.

［24］羅彤.電針對(duì)CUMS抑郁模型大鼠海馬tPA/BDNF通路影響的實(shí)驗(yàn)研究［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2020.

［25］孫培養(yǎng)，儲(chǔ)浩然，李難，等.“通督調(diào)神” 針刺對(duì)腦卒中后抑郁大鼠海馬CREB/BDNF/TrkB信號(hào)通路的影響［J］.中國(guó)針灸，2022，42（8）：907-913.

［26］喬瑞瑞.腧穴“解郁方”的篩選及其對(duì)抑郁模型大鼠HPA軸的影響［D］.太原：山西中醫(yī)學(xué)院，2014.

［27］李佳豪，王建云，李靜蘭，等.針刺對(duì)抑郁大鼠海馬FKBPs/GR/BDNF信號(hào)通路相關(guān)因子表達(dá)的影響［J］.環(huán)球中醫(yī)藥，2023，16（8）：1487-1493.

（收稿日期：2023-10-21）

（本文編輯王雅潔）