張微 侯曉強(qiáng) 楊娜 楊秀平張微 侯曉強(qiáng) 楊娜 楊秀平

摘要目的：探討急性腦梗死（ACI）病人血清環(huán)狀RNAHECT結(jié)構(gòu)域E3泛素蛋白連接酶1（circ_HECTD1）表達(dá)情況，分析circ_HECTD1與病情嚴(yán)重程度的關(guān)系。方法：選取2020年9月—2021年11月開灤總醫(yī)院收治的ACI病人122例為ACI組，另選同期于本院體檢的健康志愿者122名為對照組。收集基本臨床資料，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRTPCR）法檢測血清circ_HECTD1水平。Pearson法分析ACI病人血清circ_HECTD1水平與臨床資料及美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表（NIHSS）評分的相關(guān)性；多因素Logistic回歸分析ACI嚴(yán)重程度的影響因素。結(jié)果：ACI組高血壓比例、空腹血糖、白介素（IL）6、IL1β、C反應(yīng)蛋白（CRP）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）及circ_HECTD1水平均高于對照組（P＜0.05）；中度組、重度組年齡、IL6、IL1β、空腹血糖、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于輕度組（P＜0.05）；多因素Logistic回歸分析顯示，糖尿病、IL6、IL1β及circ_HECTD1均是ACI病人中重度神經(jīng)缺損的危險(xiǎn)因素（P＜0.05）；血清circ_HECTD1水平與空腹血糖、WBC、IL6、IL1β、CRP及NIHSS評分均呈正相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論：ACI病人血清circ_HECTD1水平升高，且隨病情加重而增加，是中重度神經(jīng)缺損的危險(xiǎn)因素。

關(guān)鍵詞急性腦梗死；環(huán)狀RNAHECT結(jié)構(gòu)域E3泛素蛋白連接酶1；病情嚴(yán)重程度；白細(xì)胞介素；超敏C反應(yīng)蛋白

doi：10.12102/j.issn.16721349.2024.06.035

急性腦梗死（ACI）為常見的腦血管疾病，又稱為缺血性腦卒中，嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量，給家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)［1］。ACI是由于腦供血障礙、缺血、缺氧導(dǎo)致局部腦組織缺血壞死或軟化所致，占所有腦卒中病例的80%，具有高殘疾率和死亡率［23］。目前，盡管在溶栓和神經(jīng)保護(hù)劑等治療策略方面取得了較大進(jìn)展，但嚴(yán)重ACI病人的治療效果仍不理想，且盡早評估ACI病人的病情嚴(yán)重程度對疾病的治療及預(yù)后非常重要［4］。環(huán)狀RNA（circRNA）代表一組獨(dú)特的非編碼轉(zhuǎn)錄物，其形成共價(jià)閉合環(huán)，不具有5′端帽子和3′端多聚腺苷酸尾結(jié)構(gòu)［5］，circRNA在細(xì)胞質(zhì)中含量豐富，進(jìn)化上保守且相對穩(wěn)定，這賦予了circRNA許多潛在功能［6］，事實(shí)上，許多circRNAs表達(dá)改變與各種腦血管疾病如缺血性腦卒中有著千絲萬縷的聯(lián)系［7］。Wu等［8］研究表明，高表達(dá)的circRNATLK1在ACI后的神經(jīng)元損傷和神經(jīng)功能缺損中發(fā)揮作用。早期研究表明，circRNAHECT結(jié)構(gòu)域E3泛素蛋白連接酶1（circ_HECTD1）已被確定為高度特異性的circRNA，預(yù)測急性缺血性卒中復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的價(jià)值較高［9］。此外，敲低circ_HECTD1被證實(shí)可減輕腦缺血中的神經(jīng)元損傷［10］，提示circ_HECTD1在ACI中具有重要作用。然而，circ_HECTD1在ACI中的表達(dá)變化及與ACI病情進(jìn)展的關(guān)系尚未完全闡明。因此，本研究通過測定ACI病人血清circ_HECTD1的相對表達(dá)水平，并分析其與ACI病情嚴(yán)重程度的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2020年9月—2021年11月我院收治的ACI病人，根據(jù)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)篩選出122例作為ACI組，其中，男68例，女54例。另選同期122名于本院體檢的健康志愿者作為對照組，其中，男65名，女57名。ACI組納入標(biāo)準(zhǔn)：1）符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2018》［11］中ACI診斷標(biāo)準(zhǔn)；2）首次發(fā)病，發(fā)病至入院時(shí)間＜24h；3）臨床資料完整；4）病人或家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：1）合并惡性腫瘤或其他血液疾病者；2）肝腎功能嚴(yán)重不全者；3）精神疾病病人；4）不能配合研究者；5）有近期手術(shù)、感染史者。

1.2方法

1.2.1臨床資料收集

收集ACI病人及健康志愿者性別、年齡、高血壓、糖尿病、吸煙、飲酒、白細(xì)胞介素（IL）6、IL1β、空腹血糖、三酰甘油（TG）、同型半胱氨酸（Hcy）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）、C反應(yīng)蛋白（CRP）、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）及白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）等資料。

1.2.2circ_HECTD1指標(biāo)檢測

采集病人（入院翌日清晨）及健康者（體檢當(dāng)日）空腹靜脈血5mL，于室溫下靜置15min，置于離心機(jī)中以3000r/min速率離心15min，取離心后上清液于無菌管，分為兩份，置于－80℃冰箱中保存待測。取一份血清樣本，室溫解凍，依據(jù)Trizol試劑（北京索萊寶科技有限公司提供）說明提取血清總RNA；測定總RNA純度及濃度，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（易錦生物提供）步驟逆轉(zhuǎn)錄，合成cDNA；采用ABI7500型實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRTPCR）儀（美國ABI公司）檢測血清中circ_HECTD1表達(dá)水平。以甘油醛3磷酸脫氫酶（GAPDH）為內(nèi)參，引物序列：circ_HECTD1正向引物為5′CACGTGTTATCAGGGGCCT3′，反向引物為5′CGCCACCCTTGCTTTTCAT3′；GAPDH正向引物為5′GCACCACCAACTGCTTA3′，反向引物為5′GCCATCCACAGTCTTCT3′。各樣品重復(fù)3次，減小實(shí)驗(yàn)誤差，2－△△Ct法（Ct為循環(huán)閾值）計(jì)算circ_HECTD1表達(dá)。

1.2.3IL6、IL1β、CRP檢測

另一份血清樣本用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測IL6、IL1β、CRP。各步操作均遵照試劑盒（上海哈靈生物科技有限公司）說明書進(jìn)行。

1.2.4分組

ACI組48h內(nèi)依據(jù)美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表（NIHSS）進(jìn)行評分，以評估病人神經(jīng)功能缺損程度。根據(jù)NIHSS評分，分為輕度組（NIHSS評分＜4分，54例）、中度組（NIHSS評分4～15分，56例）、重度組（NIHSS評分＞15分，12例）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS25.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。定性資料采用χ2檢驗(yàn)；符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，兩組間進(jìn)一步比較采用SNKq檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson法；采用多因素Logistic回歸分析ACI嚴(yán)重程度的影響因素。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1ACI組與對照組一般資料比較

ACI組高血壓比例、空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于對照組（P＜0.05）。詳見表1。

2.2不同病情嚴(yán)重程度ACI病人一般資料比較

中度組、重度組年齡、IL6、IL1β、空腹血糖、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于輕度組（P＜0.05）。詳見表2。

2.3多因素Logistic回歸分析

以ACI病人神經(jīng)功能缺損程度為因變量（輕度＝0，中重度＝1），將單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)作為自變量［年齡、空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC及circ_HECTD1以實(shí)測值輸入，糖尿?。ǚ瘢?，是＝1）、吸煙（否＝0，是＝1）］，納入多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，糖尿病、IL6、IL1β及circ_HECTD1均是ACI病人中重度功能缺損的危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。詳見表3。

2.4血清circ_HECTD1水平與部分臨床資料及NIHSS評分的相關(guān)性

血清circ_HECTD1水平與空腹血糖、WBC、IL6、IL1β、CRP及NIHSS評分均呈正相關(guān)（r值分別為0.311，0.330，0.401，0.541，0.473，0.579，P均＜0.05）。詳見表4。

3討論

ACI發(fā)病率極高［2］，尤其近年來隨著老齡化的加劇和生活水平的提高，腦血管、糖尿病、高血壓等疾病的發(fā)病率逐步提升，腦血管疾病發(fā)病率及致殘率、致死率隨之增高［3，12］。因此，對于ACI嚴(yán)重程度的評估非常重要，可以給予相應(yīng)治療，降低ACI的殘疾率和死亡率。

本研究顯示，ACI組高血壓比例及空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC水平均高于對照組，說明高血壓、空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC可能與ACI的發(fā)病有關(guān)。高血壓負(fù)調(diào)節(jié)血管功能，動(dòng)脈粥樣硬化與高血壓有關(guān)，而脂質(zhì)代謝紊亂又與高血糖緊密相關(guān)，二者均可引起和加重腦梗死，導(dǎo)致腦組織損傷［13］。CRP、WBC、IL6、IL1β是炎癥反應(yīng)的重要指標(biāo)，其水平升高是造成神經(jīng)元損傷的重要原因，參與ACI發(fā)病過程［14］。由于基因表達(dá)的調(diào)節(jié)效力和分子結(jié)構(gòu)的特異性，circRNA已被證實(shí)是人類疾病中有前景的生物標(biāo)志物［15］。相關(guān)研究證實(shí)circRNAs的失調(diào)可能參與腦梗死過程［1617］。本研究發(fā)現(xiàn)，ACI組血清circ_HECTD1水平高于對照組，與相關(guān)研究結(jié)果［12］具有一致性，說明circ_HECTD1與ACI的發(fā)生有關(guān)，circ_HECTD1高表達(dá)與腦梗死過程中不可逆的神經(jīng)元損傷有關(guān)［18］，具體機(jī)制仍待進(jìn)一步研究。

本研究分析不同ACI嚴(yán)重程度病人血清circ_HECTD1水平發(fā)現(xiàn)，病情越嚴(yán)重血清circ_HECTD1水平越高，提示circ_HECTD1與ACI疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)，且是ACI中度、重度神經(jīng)功能缺損的危險(xiǎn)因素，提示circ_HECTD1可能參與ACI的發(fā)展。Zhang等［18］研究表明，敲低circ_HECTD1可以改善氧葡萄糖剝奪/再灌注誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷，推測circ_HECTD1可能通過調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞損傷參與ACI發(fā)展。ACI病人發(fā)病時(shí)，腦組織血氧嚴(yán)重不足，持續(xù)釋放大量氧自由基，神經(jīng)細(xì)胞損失和凋亡嚴(yán)重［19］。本研究中，中重度組年齡、IL6、IL1β、空腹血糖、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于輕度組。多因素Logistic回歸分析顯示，糖尿病、IL6、IL1β、circ_HECTD1均是中重度神經(jīng)缺損的危險(xiǎn)因素。其可能原因：糖尿病病人空腹血糖水平升高，可加劇ACI病人腦組織缺氧缺血程度，導(dǎo)致病情進(jìn)一步惡化［20］。另外，炎性因子IL6、IL1β也會(huì)加重ACI病人的腦組織血管內(nèi)皮損傷，破壞血腦屏障平衡，造成梗死區(qū)水腫，進(jìn)一步壓迫正常腦組織，加劇神經(jīng)缺損，導(dǎo)致ACI病情惡化［21］。相關(guān)性分析結(jié)果表明，血清circ_HECTD1水平與空腹血糖、WBC、IL6、IL1β、CRP及NIHSS評分均呈正相關(guān)，提示circ_HECTD1可能通過間接調(diào)控血糖、炎癥等影響ACI的病情嚴(yán)重程度。

綜上所述，ACI病人血清circ_HECTD1水平升高，且隨病情加重呈增高趨勢，是中重度神經(jīng)缺損的危險(xiǎn)因素。但本研究納入樣本量較少，且集中監(jiān)測某一時(shí)段問診病人，可能受環(huán)境條件影響，關(guān)于circ_HECTD1參與ACI病情進(jìn)展的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：20220824）

（本文編輯郭懷印）

作者單位開灤總醫(yī)院（河北唐山063000）

通訊作者侯曉強(qiáng)，Email：pqmqh39@163.com

引用信息張微，侯曉強(qiáng)，楊娜，等.急性腦梗死病人血清circ_HECTD1表達(dá)與病情嚴(yán)重程度的關(guān)系［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（6）：11391142.