蒙國懿　郭文娟　付晶鳳　高麗　許銀鳳

【摘 要】 目的：初步探討姜狀三七的活血化瘀作用，為今后資源的開發(fā)利用及深入研究奠定基礎(chǔ)。方法：實(shí)驗(yàn)分為生理鹽水組、阿司匹林陽性對照組及姜狀三七水提物低、中、高濃度組，采用重量法測定各組體外兔血栓、血塊溶解率；采用ADP誘導(dǎo)體外兔血小板聚集，并測定各組聚集率。結(jié)果：姜狀三七水提物低濃度組對體外兔血栓的溶解率明顯高于生理鹽水組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且具有時間依賴性，其中8 h的溶解率達(dá)到了72.0%；而姜狀三七水提物各濃度組對體外兔血塊的溶解率影響不明顯（P>0.05）；此外，各濃度的姜狀三七水提物及陽性藥阿司匹林明顯抑制體外兔血小板聚集（P<0.01），其中，中濃度組的血小板聚集抑制率可達(dá)53.9%，與阿司匹林組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：姜狀三七水提物在一定濃度范圍內(nèi)能促進(jìn)體外兔血栓溶解和抑制血小板聚集，提示姜狀三七具有一定的活血化瘀作用。

【關(guān)鍵詞】 姜狀三七；活血化瘀；血小板；ADP

【中圖分類號】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2024）10-0046-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.10.zgmzmjyyzz202410010

Promoting Blood Circulation and Removing Blood Stasis of Water Extract from Panax zingiberensis

MENG Guoyi1 GUO Wenjuan1 FU Jingfeng1 GAO Li2 XU Yinfeng1*

1.Yunnan University of Business Management，Kunming 650032，China;

2.Yunnan Institute of Materia Medica，Kunming 650100，China

Abstract：Objective The effect of Panax zingiberensi on promoting blood circulation and removing blood stasis was preliminarily discussed in order to lay a foundation for further development and utilization of resources.Methods The experiment is divided into normal saline group， aspirin positive control group， low， medium and high concentration groups of water extracts from Panax zingiberensis. The dissolution rate of thrombus and blood clot in vitro in rabbit was determined by gravimetric method. Platelet aggregation was induced by ADP. The platelet aggregation rate of each group was measured by microplate reader. Result The dissolution rate of rabbit thrombus in vitro in the low concentration group of Panax zingiberensis water extract was significantly higher than that in normal saline group， the difference was statistically significant （P<0.05） and it is time dependent， the dissolution rate of 8h reached 72.0%. The effect of different concentration groups on the dissolution rate of blood clots was not obvious（P>0.05）. The inhibition rate of platelet aggregation in the medium concentration group was 53.9% and compared with aspirin group the difference was not statistically significant （P>0.05）.Conclusion In a certain concentration range， the water extract of Panax zingiberensis can promote thrombolysis and inhibit platelet aggregation in vitro， It is suggested that Panax zingiberensis has certain effect of promoting blood circulation and removing blood stasis.

Key words：Panax zingiberensis; Promoting Blood Circulation and Removing Blood Stasis; Platelets; ADP

血瘀是中醫(yī)辨證中的一種證型，中醫(yī)認(rèn)為血行不暢，壅滯于血脈或停留于臟腑組織器官之內(nèi)，或離經(jīng)之血不能及時消散或排出，瘀滯于某一處，呈凝滯狀態(tài)均為血瘀，常表現(xiàn)為疼痛、腫塊、出血及瘀血等病癥［1-2］，使用活血化瘀藥則是治療血瘀證的主要手段［2］。西醫(yī)學(xué)［3］認(rèn)為，血栓與血塊是血瘀證的基本病理變化和客觀性指標(biāo)，當(dāng)凝血功能異常時，血液在組織器官內(nèi)呈瘀滯狀態(tài)，此外，血小板的活化、聚集和釋放功能異常，均可使血液處于高凝狀態(tài)，從而易于形成血栓［4］，引發(fā)心肌梗塞、腦梗塞及肺栓塞等血栓性疾病，因而，活血化瘀對于該類疾病的治療具有重要意義。

姜狀三七（Panax zingiberensis C.Y.Wu et K.W.Feng.）為五加科人參屬植物，系云南特有的物種之一，主要產(chǎn)于云南蒙自、思茅、馬關(guān)等地區(qū)［5］。《中華本草》記載姜狀三七味苦，性溫，其根及根莖入藥，具有活血化瘀、止血、定痛的功效，民間常用于跌打損傷、虛癆咳嗽、外傷出血等病癥的治療［6］。目前，國內(nèi)外學(xué)者對姜狀三七的化學(xué)成分有較多的研究，主要含有人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rg2、人參皂苷Re、竹節(jié)參皂苷Ⅳa（4）、姜狀三七苷R1、三七素等化學(xué)成分［7-9］。但姜狀三七藥材的藥理學(xué)研究相對較少，僅見吳其國等學(xué)者［10］報道姜狀三七水提物具有一定的鎮(zhèn)痛與止血作用；然而其活血化瘀作用尚未見報道。因此，本研究通過觀察姜狀三七水提物對體外兔血栓、血塊溶解率的影響，以及對血小板聚集率的影響，初步探討姜狀三七的活血化瘀作用，旨在為姜狀三七的進(jìn)一步研究與利用提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物 健康家兔30只，雌雄各半，體重（2.5±0.5）kg，由沅江市惠源科教工程有限公司提供，生產(chǎn)許可證號：SCKK（湘）2019-0011。

1.2 供試品與試劑 姜狀三七采自云南省騰沖市界頭鎮(zhèn)黃家寨，由云南天江一方藥業(yè)有限公司趙仁主任藥師鑒定；阿司匹林為拜耳醫(yī)藥保健有限公司產(chǎn)品，國藥準(zhǔn)字J20171021，批號BJ57405；無水氯化鈣購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號20211009；牛血纖維蛋白原購自南京都萊生物技術(shù)有限公司，CAS號9001325；凝血酶購自安徽酷爾生物工程有限公司，CAS號9002044；ADP鈉鹽購自南京都萊生物技術(shù)有限公司，CAS號16178486。

1.3 儀器 HH.S21-4型水浴鍋為上海博訊實(shí)驗(yàn)有限公司產(chǎn)品；Multiskan sky 型全波長酶標(biāo)儀：美國 Thermo Fisher Scientific 公司產(chǎn)品；Motic M150B 生物顯微鏡：廈門麥克奧迪電氣股份有限公司產(chǎn)品。

1.4 供試品溶液制備 取姜狀三七根部171.5 g，粉碎，稱取粉末30 g于圓底燒瓶中，加入8倍量的蒸餾水，常溫浸泡30 min，100℃下回流提取了3次，每次1 h［11］，合并、濃縮、抽濾得到濃度為 250 mg/mL的濃縮液備用，使用時加蒸餾水分別稀釋至 50 mg/mL、120 mg/mL和200 mg/mL，即為低濃度、中濃度和高濃度的姜狀三七水提供試溶液。

1.5 姜狀三七水提物對體外兔血栓溶解率的測定［12］ 家兔耳緣靜脈注射25%烏拉坦（4 mL/kg）麻醉動物，分離右側(cè)頸總動脈，取血10 mL，注入預(yù)先加有 0.5% 纖維蛋白原溶液300 μL、50 g/L 氯化鈣溶液200 μL、1.0×105 U/L凝血酶溶液300 μL的20 cm硅化膠管中；止水夾夾閉兩端管口，恒溫水?。?7℃）放置20 min，形成實(shí)驗(yàn)性血栓，將血栓切成1 cm的小段，稱重，分別放入5 mL西林瓶中，隨機(jī)分為生理鹽水組、阿司匹林陽性對照組以及姜狀三七水提物低濃度組（50 mg/mL）、中濃度組（120 mg/mL）和高濃度組（200 mg/mL），每組給藥 4 mL，恒溫水?。?7℃），分別在1 h、2 h、4 h、6 h和8 h時取出血栓，吸干水分，稱重，按下式計(jì)算溶解率：

溶解率（%）=[（W-G）/W]×100%

（W：血栓初始質(zhì)量；G：實(shí)驗(yàn)后血栓質(zhì)量）

1.6 姜狀三七水提物對體外兔血塊溶解率的測定［12］ 家兔頸總動脈取血 20 mL至空培養(yǎng)皿中，恒溫水?。?7℃）15 min，血液凝固后取出，切成 0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm 的實(shí)驗(yàn)性血塊，用生理鹽水沖洗 3 次，吸干水分，稱重，放入西林瓶中，按照上述分組分別加入對應(yīng)藥物溶液4 mL，恒溫水?。?7℃），分別在24 h、48 h時取出血塊，吸干水分，稱重，按下式計(jì)算溶解率：

溶解率（%）=[（W-G）/W]×100%

（W：血塊初始質(zhì)量；G：實(shí)驗(yàn)后血塊質(zhì)量）

1.7 姜狀三七水提物對體外兔血小板的聚集實(shí)驗(yàn)［13］ 家兔頸總動脈取血15 mL，注入枸櫞酸鈉潤洗過的離心管中，1200 r/min離心10 min，取上清即為富集血小板血漿（PRP），剩余血液4000 r/min離心10 min，取上清即為貧血小板血漿（PPP）。用PPP調(diào)整PRP細(xì)胞密度至 3.0×108個/mL，將PRP加入96孔板，每孔200 μL，按照前述實(shí)驗(yàn)分組，每組給藥5 μL，移液槍吹打20 s混勻，37℃孵育5 min，各組分別加入40 μmol/LADP17 μL誘導(dǎo)血小板聚集，立即放入酶標(biāo)儀，波長655 nm，動態(tài)測定吸光度A，每30 s測定1次，間歇振搖20 s，直至吸光度A不再變化，按下式分別計(jì)算血小板聚集率與抑制率：

血小板聚集率（%）=（At0-At）/At0×100%

血小板聚集抑制率（%）=（生理鹽水組聚集率-給藥組聚集率）/生理鹽水組聚集率×100%

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)采用均值加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，使用IBM SPSS 27.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。多組比較使用One-way ANOVA單因素方差分析，方差齊時使用LSD統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行組間兩兩比較，方差不齊時用Dunnetts T3法檢驗(yàn)，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 姜狀三七水提物對體外兔血栓溶解率的影響 表1顯示，姜狀三七水提物組的血栓溶解率有明顯升高趨勢，且具有時間依賴性，但與生理鹽水組比較，僅低濃度組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），8 h的血栓溶解率達(dá)到了72%，較生理鹽水組高約1倍；阿司匹林組的血栓溶解率與生理鹽水組比較，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 姜狀三七水提物對體外兔血塊溶解率的影響 表2顯示，與生理鹽水組比較，姜狀三七水提物低、中和高濃度組的血塊溶解率雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），但均有明顯升高趨勢，在48 h時，分別達(dá)到了61.5%、63.3%和55.4%，而阿司匹林組的血塊溶解率與生理鹽水組比較亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異（P>0.05）。

2.3 姜狀三七水提物對體外兔血小板聚集率的影響 表3顯示，與生理鹽水組相比，姜狀三七水提物各濃度組及陽性對照藥阿司匹林組的血小板聚集率顯著降低（P<0.01），其中姜狀三七水提物中濃度組的血小板聚集抑制率高達(dá)53.9%，與阿司匹林組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示姜狀三七水提物能夠抑制體外兔血小板的聚集，且作用強(qiáng)度與水提物濃度有關(guān)。

3 討論

血栓是由于血管內(nèi)膜受損，血液中的不溶性纖維蛋白、沉積的血小板、積聚的白細(xì)胞和紅細(xì)胞沉積于受損處，造成血流部分或完全瘀塞，導(dǎo)致組織血液供應(yīng)障礙，引發(fā)血栓性疾病，西醫(yī)通常采用溶栓藥進(jìn)行治療［14］，中醫(yī)則常用活血化瘀藥物治療該類疾病。在本實(shí)驗(yàn)條件下，發(fā)現(xiàn)低濃度的姜狀三七水提物對血栓具有一定的促血栓溶解作用，而中高濃度的姜狀三七水提物僅有促溶趨勢，表明姜狀三七水提物在一定的濃度范圍內(nèi)對血栓有溶解作用。血塊是由于血管損傷破裂，血液外滲流出，凝積于組織內(nèi)或皮膚表面形成的血腫塊，臨床上也常用活血化瘀藥進(jìn)行治療［1，15-17］；本研究結(jié)果顯示，姜狀三七水提物對血塊僅有促溶趨勢，并未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明姜狀三七水提物對血栓的溶解作用更強(qiáng)。此外，血小板聚集在血栓的形成過程中起到重要作用，本研究采用血小板聚集誘導(dǎo)劑ADP誘導(dǎo)體外兔血小板凝集，發(fā)現(xiàn)姜狀三七水提物能夠抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集，其中濃度組的效價與阿司匹林組相當(dāng)，提示姜狀三七水提物還具有一定的抗血小板聚集作用；據(jù)報道人參皂苷Rg1、人參皂苷Rg2、人參皂苷Re，以及竹節(jié)參皂苷Ⅳa（4）也具有一定的抗血小板聚集作用［18-20］，但姜狀三七的抗血小板聚集作用是否與所含的這些化學(xué)物質(zhì)有關(guān)還有待進(jìn)一步研究。此外，吳其國等［10］學(xué)者觀察到灌胃給予小鼠姜狀三七水提物還具有一定的止血作用。這些研究結(jié)果均初步提示姜狀三七水提物具有溶栓、抗栓和止血作用，其相應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)值得深入研究。

4 結(jié)論

姜狀三七水提物具有一定的溶栓和抗栓作用，為姜狀三七的活血化瘀功效提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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（收稿日期：2023-11-03 編輯：陶希睿）

基金項(xiàng)目：云南省教育廳科學(xué)研究基金（2019J0973）。

作者簡介：蒙國懿（1991—），男，壯族，碩士，講師，研究方向?yàn)樗幚韺W(xué)教學(xué)與研究。E-mail：mgyfifa7@163.com

作者簡介：許銀鳳（1982—），女，漢族，碩士，副教授，研究方向?yàn)橹兴帉W(xué)教學(xué)與研究。E-mail：95432849@qq.com