摘要：［目的］‘玉露香梨’果實(shí)萼片宿存嚴(yán)重降低其商品價(jià)值，篩選并鑒定其果實(shí)萼片發(fā)育關(guān)鍵基因，可為從分子水平培育萼片脫落的梨果實(shí)提供參考基因。［方法］以棚架栽培的‘玉露香梨’為試材，結(jié)合前期BSA 基因定位測(cè)序數(shù)據(jù)，對(duì)候選基因表達(dá)特征進(jìn)行驗(yàn)證、克隆并分析2 個(gè)生長(zhǎng)素酰胺合成酶基因GH3 家族生物信息特征。［結(jié)果］基因PbGH3. 3（Pbr007550）和PbGH3. 4（Pbr030571）在萼片的表達(dá)量排名第二；PbGH3. 3 和PbGH3. 4 CDS 長(zhǎng)度均為1806 bp，編碼601 個(gè)氨基酸，其中二者存在7 個(gè)氨基酸序列的差異，編碼的蛋白PbGH3. 3 和PbGH3. 4 序列與蘋(píng)果MdGH3. 1 的同源性最高；屬于不穩(wěn)定性蛋白，無(wú)信號(hào)肽的存在，定位于細(xì)胞質(zhì)；利用NCBI 網(wǎng)站CCD 工具分析發(fā)現(xiàn)均具有GH3 蛋白家族的GH3 superfamliy 保守結(jié)構(gòu)域，蛋白質(zhì)三級(jí)建模后發(fā)現(xiàn)為GH3. 1 AUXIN 綴合酶，涉及生長(zhǎng)素穩(wěn)態(tài)，屬于GH3 蛋白家族。STRING 互作網(wǎng)絡(luò)蛋白成員GO 和KEGG 功能富集分析表明PbGH3. 3 參與植物激素尤其是生長(zhǎng)素信號(hào)通路，推測(cè)PbGH3. 3 和PbGH3. 4 可能在‘玉露香梨’果實(shí)萼片脫落中通過(guò)IAA 信號(hào)通路發(fā)揮生物學(xué)功能。

關(guān)鍵詞：梨； 萼片； 生長(zhǎng)素?zé)燉０泛铣擅福?基因克??； IAA

中圖分類(lèi)號(hào)：S722.3；S661.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1671-8151（2024）03-0014-10

‘ 玉露香梨’傳統(tǒng)分類(lèi)上屬白梨系統(tǒng)，是山西農(nóng)業(yè)大學(xué)果樹(shù)研究所培育而成的‘庫(kù)爾勒香梨’型中熟紅梨品種，分別繼承其母本新疆‘ 庫(kù)爾勒香梨’、父本‘ 雪花梨’汁多味甜、皮薄肉細(xì)及果個(gè)大等優(yōu)點(diǎn)［1-2］，同時(shí)部分克服了香梨果形不正等缺點(diǎn)，具有抗逆性強(qiáng)、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)、地域適應(yīng)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)［3-5］。‘玉露香梨’2014 年被國(guó)家農(nóng)業(yè)部確定為梨果樹(shù)發(fā)展主導(dǎo)品種，并于2019 年入選中國(guó)農(nóng)業(yè)品牌目錄，隰縣玉露香梨又被農(nóng)業(yè)部選為2023 年農(nóng)業(yè)品牌精品培育名單。

根據(jù)梨果實(shí)成熟時(shí)萼片脫宿狀態(tài)，可將其分為宿萼果和脫萼果［6］?！衤断憷妗m優(yōu)點(diǎn)眾多，但果實(shí)萼片存在部分宿存現(xiàn)象。萼片位于花器官的最外層，主要包含上下表皮、維管束和葉肉細(xì)胞部分，進(jìn)化上其為葉的變態(tài)器官。萼片發(fā)育初期可保護(hù)內(nèi)部結(jié)構(gòu)，減少生殖器官受到外界諸如雨水沖刷及機(jī)械損傷的影響［7］。然而，‘玉露香梨’萼片宿存可致其果形不整齊、表面平整度下降、易生果銹等問(wèn)題。

植物器官脫落與遺傳生理特性、栽培調(diào)控技術(shù)、環(huán)境因子等有關(guān)［8-11］。其中，植物激素生長(zhǎng)素在器官脫落中發(fā)揮重要作用，如Meir 等［12］報(bào)道，當(dāng)組織內(nèi)游離生長(zhǎng)素（IAA）含量下降到一定閾值后，離區(qū)組織（Abscission zone， AZ）對(duì)乙烯（ETH）存在的敏感性增加，進(jìn)而誘導(dǎo)器官開(kāi)始脫落。在模式植物番茄脫落的研究中，用IAA 處理外植體后，生長(zhǎng)素?zé)燉０泛铣擅富颍℅retchen Hagen 3，GH3）表達(dá)上調(diào)，且能誘導(dǎo)外植體開(kāi)始脫落。以上研究均表明基因GH3 是IAA 誘導(dǎo)花脫落延遲的有效負(fù)調(diào)控因子［13］。本課題組前期利用‘ 玉露香梨’的雙親‘庫(kù)爾勒香梨’與‘雪花梨’雜交獲得F1萼片脫宿性狀分離群體，將構(gòu)建的萼片脫落與宿存的極端混池群體進(jìn)行全基因組集群分離測(cè)序（Whole genome bulked segregation analysis，DNA-BSA），定位到與其果實(shí)萼片脫落宿存關(guān)聯(lián)的基因GH3［14］，在‘庫(kù)爾勒香梨’數(shù)字表達(dá)圖譜數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)GH3 在脫落萼片內(nèi)表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步表明基因GH3 可能參與梨果實(shí)萼片脫落過(guò)程［15］。

基于此，本研究以棚架式栽培的‘玉露香梨’為研究材料，基于前期課題組萼片脫落宿存極端混池分析測(cè)序技術(shù)，成功定位到基因GH3，該基因參與梨果實(shí)萼片發(fā)育。為進(jìn)一步研究此基因家族成員功能，對(duì)篩選的2 個(gè)GH3 家族成員的表達(dá)量進(jìn)行驗(yàn)證。同時(shí)，對(duì)候選的2 個(gè)家族成員基因進(jìn)行克隆，并分析其生物信息學(xué)特征，為從分子水平研究‘玉露香梨’萼片脫落提供參考基因。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

材料來(lái)源于山西省晉中市太谷區(qū)的山西農(nóng)業(yè)大學(xué)果樹(shù)研究所（N37°21'17\"，E112°30'12\"）?！衤断憷妗脑耘嗄Ｊ綖殡p臂平行式。

主要試劑：克隆酶試劑盒Taq DNA、 DNA 分子Marker-DL2000、反轉(zhuǎn)錄酶試劑盒PrimeScript?RT reagent Kit 購(gòu)于TaKaRa（中國(guó)）公司，凝膠回收試劑盒Simgen、熒光定量PCR 實(shí)驗(yàn)用品與卡那霉素分別選自新景生物試劑開(kāi)發(fā)有限（杭州）公司，山西睿然科技有限公司和北京美億美生物技術(shù)有限公司。qRT-PCR 引物合成和DNA 序列測(cè)序均由生物工程技術(shù)有限公司（上海）完成。

載體與菌株：大腸桿菌菌株（E. coli）DH5α、載體pMD-19T 來(lái)自TaKaRa。

1. 2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)處理：選取樹(shù)勢(shì)相近，樹(shù)體健壯的‘ 玉露香梨’，于4 月上旬盛花初期，上午9 時(shí)，使用濃度為1000 mg·L-1 生長(zhǎng)延緩劑PP333 和蒸餾水，一次性噴施至整朵花全濕、有藥液滴落為止，用于誘導(dǎo)‘玉露香梨’果實(shí)萼片脫落。實(shí)驗(yàn)處理2 周后選取3個(gè)長(zhǎng)勢(shì)一致的‘玉露香梨’的枝條，作為3 次生物學(xué)重復(fù)，脫萼與宿存果的果皮、果肉、萼筒離區(qū)組織以及脫落幼果前的花瓣、萼片、葉片、葉芽的單個(gè)組織分別收集，作為RNA 提取材料。

RNA 的提?。翰捎脤?shí)驗(yàn)室改良成熟的CTAB法分別提取梨不同組織部位樣品的總RNA。

cDNA 的合成：根據(jù)試劑盒說(shuō)明操作手冊(cè)，使用TaKaRa 公司的PrimeScript? RT reagent Kit 合成cDNA，去除核基因組DNA 反應(yīng)。

qRT-PCR 檢測(cè)方法：基于Primer Premier 5. 0軟件，參考中國(guó)白梨基因組（http：//gigadb. org/search/new？keyword=Pyrus+bretschneideri+），設(shè)計(jì)GH3 引物， 內(nèi)參基因?yàn)锳CTIN（KT943411. 1），對(duì)‘ 玉露香梨’萼筒的定量用cDNA 校準(zhǔn)，引物序列見(jiàn)表1。

基于ChamQTMSYBR?qPCR Master Mix的三步法擴(kuò)增，同時(shí)采用Light Cycler 96 進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)，3 次重復(fù)，反應(yīng)結(jié)束后分析溶解曲線并評(píng)估引物的特異性。反應(yīng)體系為20. 0 μL：包含2×ChamQ SYBR qPCR Master Mix 10 μL，F(xiàn)orward Primer（10uM）0. 6 μL，F(xiàn)orward Primer（10uM）0. 6 μL，cDNA 2. 0 μL，Nuclease-free Wa?ter 6. 8 μL。

生長(zhǎng)素酰胺合成酶基因PbGH3 的克隆：引物見(jiàn)表2，按照試劑盒說(shuō)明分別進(jìn)行目的基因擴(kuò)增、回收純化片段、載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)化并進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。

基因PbGH3. 3 與PbGH3. 4 的生物信息學(xué)分析：首先，在線分析GH3 蛋白序列的理化性質(zhì)（http：//www. expasy. ch/tools/protparam. Htm）；其次，預(yù)測(cè)蛋白GH3 結(jié)構(gòu)（http：//www. ebi. ac.uk/Tools/InterProScan/）；隨后，分析GH3 蛋白結(jié)構(gòu)域（https：//www. ncbi. nlm. nih. gov/Structure/cdd/wrpsb. cgi），結(jié)合DNAMAN 軟件，進(jìn)行多序列比對(duì)（https：//blast. ncbi. nlm. nih. gov/Blast）；之后，利用SOPMA（http：//meta-database. org/wiki/SOPMA）和Interactive（http：//swissmodel.expasy. org/interactive）預(yù)測(cè)GH3 蛋白質(zhì)二、三級(jí)結(jié)構(gòu)；然后，分別利用TMHMM（http：//www.cbs. dtu. dk/services/TMHMM/） 、SignalP（http：//www. cbs. dtu. dk/services/SignalP/）和PSORT Predition （http：//psort1. hgc. jp/form.html）進(jìn)行跨膜結(jié)構(gòu)、信號(hào)肽及亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)與分析；最后，基于STRING 進(jìn)行蛋白網(wǎng)絡(luò)互作分析（https：//version-12-0. string-db. org/）

2 結(jié)果與分析

2. 1 生長(zhǎng)素?zé)燉０泛铣擅富騁H3 在‘ 玉露香梨’中的表達(dá)特性分析

‘ 玉露香梨’基因PbGH3. 3 和PbGH3. 4 染色體定位發(fā)現(xiàn)均位于Chr5（圖1A）?；虮磉_(dá)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)在葉芽組織中的表達(dá)量顯著高于其他組織內(nèi)，在萼片中表達(dá)量次之，除‘玉露香梨’宿萼果果肉、宿萼果果皮和脫萼萼筒的基因表達(dá)量差異不顯著外，其余組織表達(dá)差異均顯著（圖1B）?；騊bGH3. 4 在‘ 玉露香梨’各個(gè)組織部位表達(dá)由高到低的順序依次為：脫萼果果肉gt; 萼片gt; 脫萼萼筒gt;宿萼果果皮gt;葉芽gt;花瓣gt;宿萼果果肉gt;脫萼果果皮gt; 宿萼萼筒gt; 葉片，其中在脫萼果果肉中表達(dá)最高。與此同時(shí)，與其它各組織比較，均存在顯著差異（圖1C）。此外，發(fā)現(xiàn)‘玉露香梨’基因PbGH3. 3 和PbGH3. 4 二者均在葉片組織中表達(dá)最低。對(duì)基因PbGH3. 3 在碭山酥梨組織表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，其在梨各個(gè)組織及果實(shí)發(fā)育不同時(shí)期中均有表達(dá)（圖1D）。

2. 2 ‘ 玉露香梨’PbGH3 家族成員cDNA 全長(zhǎng)序列的克隆分析

提取梨果實(shí)萼片離區(qū)組織（圖2A）RNA，反轉(zhuǎn)錄后并基于T-A 克隆技術(shù)（圖2B），成功克隆出2個(gè)家族成員PbGH3. 3 和PbGH3. 4。以‘ 玉露香梨’萼片離區(qū)組織為材料提取并反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，經(jīng)PCR 擴(kuò)增（圖2C）檢測(cè)測(cè)序，獲得目的基因的全長(zhǎng)CDS，長(zhǎng)度均為1806 bp，起始密碼子為ATG，終止密碼子為T(mén)AA。編碼蛋白分析發(fā)現(xiàn)存在7 個(gè)氨基酸序列差異，如在1081 bp 處存在G/A變異而導(dǎo)致編碼的氨基酸不同（圖2D 和2E）。

2. 3 ‘玉露香梨’蛋白PbGH3. 3 和PbGH3. 4 進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建結(jié)果分析

PbGH3. 3 蛋白與蘋(píng)果（XP_008373075. 1）的同源性為97. 84%，與甜櫻桃（XP_021827312. 1）的同源性為92. 15%，與李（XP_008236406. 1）的同源性為91. 82%，與桃（XP_007199763. 1）的同源性為91. 82%，與杏（XP_034228093. 1）的同源性為91. 65%；PbGH3. 4 與蘋(píng)果、甜櫻桃、李、桃和月季的相似性分別為97. 17%、92. 49%、92. 49%、92. 49% 和87. 85%。利用MEGA 7. 0，PbGH3. 3和PbGH3. 4 蛋白與其他薔薇科等15 種物種的系統(tǒng)進(jìn)化結(jié)果發(fā)現(xiàn)‘玉露香梨’PbGH3 二者蛋白與蘋(píng)果MdGH3. 1 的同源性最高（圖3B）。

2. 4 ‘玉露香梨’PbGH3. 3 和PbGH3. 4 蛋白特性分析

PbGH3. 3 和PbGH3. 4 均編碼601 個(gè)氨基酸，蛋白分子式均為C5319H8834N1806O2178S520，相對(duì)分子質(zhì)量均是14. 96 kDa，等電點(diǎn)相同為4. 90，同時(shí)編碼氨基酸內(nèi)的負(fù)電荷殘基（Asp+Glu）和正電荷的殘基（Arg+Lys） 均為0。此外，PbGH3. 3 和PbGH3. 4 蛋白的半衰期均為10 h，表現(xiàn)為不穩(wěn)定，而蛋白質(zhì)不穩(wěn)定性指數(shù)（II）、脂肪指數(shù)和親水性的平均值（GRAVY）分別為43. 33 與54. 41、86. 96 與24. 75、?0. 237 與0. 916，其中前者蛋白為親水性，后者則為疏水性。

PbGH3. 3 與PbGH3. 4 主要分別由37. 10%與38. 27% 的α-螺旋、6. 32% 與5. 16% 的β-折疊、42. 26% 與41. 93% 的無(wú)規(guī)則卷曲以及14. 31% 與4. 64% 的延伸鏈組成（圖4A 和4B）。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能域預(yù)測(cè)其保守結(jié)構(gòu)域發(fā)現(xiàn)，二者蛋白結(jié)構(gòu)域中均具有GH3 蛋白家族的GH3 super family保守結(jié)構(gòu)域（圖4C 和4D）。

蛋白PbGH3. 3 無(wú)信號(hào)肽（圖4E），而蛋白PbGH3. 4 存在信號(hào)肽（Sec/SPI）的可能性為0. 000 6（圖4F）。PbGH3. 3 和PbGH3. 4 蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、線粒體、過(guò)氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體的可能性分別為47. 8% 與45. 0% 、26. 1% 與0% 、13. 0% 與10. 0% 、8. 7%與30. 0% 、4. 3% 與0% 、0% 與10. 0% 。因此，預(yù)測(cè)二者定位于細(xì)胞質(zhì)的可能性最大。

選取結(jié)構(gòu)相似性最高的VvGH3. 1 蛋白（吲哚-3- 乙酸煙酰胺基合酶）晶體結(jié)構(gòu)（GMQE 為84. 56% ，QMEAN 為? 1. 17）建模（ 圖5A），PbGH3. 3 和PbGH3. 4 蛋白質(zhì)三級(jí)建模后發(fā)現(xiàn)，兩者蛋白均為GH3-1 AUXIN 綴合酶（圖5B 和圖5C），二者含有生長(zhǎng)素穩(wěn)態(tài)、無(wú)多聚體的形成，均具有1xV1N 配體（圖5D）與1x［（（2S ，3R ，4R ，5R）-5-（6- 氨基嘌呤-9- 基）-3，4-（雙氧化蒽基）氧雜戊基-2- 基］2-（1H- 吲哚-3- 基）磷酸氫乙酯相同配體（ 圖5E），其中前者的V1N. 3 包括4? 內(nèi)的19 個(gè)殘基和16 種PLIP 交互（ 圖5F），后者則有18 種PLIP 交互（ 圖5G）。

2. 5 ‘ 玉露香梨’PbGH3. 3 蛋白網(wǎng)絡(luò)互作分析

PbGH3. 3 全基因組的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)如圖6A 所示，節(jié)點(diǎn)數(shù)11，邊數(shù)24 ，平均節(jié)點(diǎn)度4. 36，平均局部聚類(lèi)系數(shù)為0. 762 ，PPI 富集P 值為1. 37×10-4 。對(duì)互作基因GO 功能分析發(fā)現(xiàn)，富集生物學(xué)過(guò)程前三的通路為激素介導(dǎo)的信號(hào)通路（GO ：0009755 ， 4. 26e-5），細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（GO ：0035556 ， 4. 6e-4）和細(xì)胞分裂素激活的信號(hào)通路（GO ：0009736 ， 4. 6e-4）（圖6B）；分子功能富集于酸性氨基酸連接酶活性（GO ：0016881 ， 4. 6e-4）?；蚓W(wǎng)絡(luò)互作成員KEGG功能分析富集于植物信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路（map04075 ， 5. 33e-14）（圖6C）。

3 討論

生長(zhǎng)素?zé)燉０泛铣擅富騁H3 在早期響應(yīng)植物生長(zhǎng)素信號(hào)通路發(fā)揮重要功能作用。曾文芳在對(duì)不同GH3 基因協(xié)同控制桃果實(shí)各個(gè)發(fā)育階段生長(zhǎng)素動(dòng)態(tài)平衡的研究中發(fā)現(xiàn)，PpGH3. 3 和PpGH3. 4 在果實(shí)成熟階段明顯表達(dá)上調(diào)，暗示它們可能參與了桃果實(shí)成熟衰老階段的發(fā)育［ 16］。根據(jù)周蘋(píng)的研究，GH3. 9 基因過(guò)表達(dá)植株中，雄蕊個(gè)數(shù)比雌蕊少且雄蕊明顯偏短，不利于擬南芥的自花授粉，進(jìn)而影響花器官衰?。?17］。劉妮等研究指出低IAA 水平有利于‘ 碭山酥梨’果實(shí)萼片脫落［ 4］。本實(shí)驗(yàn)‘ 玉露香梨’基因PbGH3. 3 在萼片中存在高表達(dá)，由于本實(shí)驗(yàn)萼片取樣處于盛花末期，為梨果實(shí)萼片脫落臨界期。因此，該時(shí)期基因PbGH3. 3 的高表達(dá)，可能誘導(dǎo)其萼片衰老脫落。本實(shí)驗(yàn)克隆的‘ 玉露香梨’基因PbGH3 尤其PbGH3. 3 可能通過(guò)負(fù)調(diào)控IAA 通路誘導(dǎo)梨果實(shí)萼片脫落。

‘ 玉露香梨’PbGH3. 3 和PbGH3. 4 長(zhǎng)度均為1806 bp ，二者具有7 個(gè)氨基酸序列的差異，編碼601 個(gè)氨基酸，進(jìn)行同源性氨基酸序列對(duì)比后發(fā)現(xiàn)，與蘋(píng)果、甜櫻桃、李、桃、杏的同源性均在90% 以上，表明PbGH3. 3 和PbGH3. 4在進(jìn)化上比較保守；對(duì)編碼的蛋白結(jié)構(gòu)域分析后發(fā)現(xiàn)PbGH3. 3 和PbGH3. 4 具有GH3 super?family 結(jié)構(gòu)域，說(shuō)明它們屬于生長(zhǎng)素?zé)燉０泛铣擅割?lèi)。不同物種基因GH3 在序列長(zhǎng)度、理化特性存在差異［ 18］，但均具有保守的GH3 結(jié)構(gòu)域，與Ostrowski 等人報(bào)道的結(jié)果一致，說(shuō)明GH3 蛋白家族在進(jìn)化上存在保守結(jié)構(gòu)域［ 19］。

‘ 玉露香梨’蛋白PbGH3. 3 和PbGH3. 4 無(wú)信號(hào)肽，說(shuō)明2 個(gè)蛋白屬于非分泌蛋白；對(duì)蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行理化性質(zhì)分析，發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)克隆的基因編碼蛋白不具穩(wěn)定性。蛋白質(zhì)三級(jí)建模后發(fā)現(xiàn)PbGH3. 3 和PbGH3. 4 蛋白為GH3-1 AUXIN 綴合酶，與VvGH3 的吲哚-3-乙酸酰胺基合酶的晶體結(jié)構(gòu)相似性最高，涉及生長(zhǎng)素穩(wěn)態(tài)，與前人研究結(jié)果一致，具有生長(zhǎng)素結(jié)合特性［ 20］。

SignalP 預(yù)測(cè)‘ 玉露香梨’PbGH3. 3 和PbGH3. 4 蛋白信號(hào)肽功能時(shí)，當(dāng)預(yù)測(cè)分值大于閾值0. 5 時(shí)，默認(rèn)為該蛋白含有信號(hào)肽；反之，分值小于閾值時(shí)，則不具信號(hào)肽［ 21-22］?！?玉露香梨’的PbGH3. 4 的生長(zhǎng)素?zé)燉０返鞍缀铣擅傅牡鞍仔盘?hào)肽（Sec/SPI）的預(yù)測(cè)分值是0. 000 6 ，表明‘ 玉露香梨’的PbGH3. 4 序列含有信號(hào)肽的可能性極低，不具備蛋白信號(hào)指引的功能。說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)克隆的‘ 玉露香梨’PbGH3. 3 和PbGH3. 4 基因?qū)儆诰幋a生長(zhǎng)素?zé)燉０泛铣擅福珶o(wú)信號(hào)肽功能?！?玉露香梨’PbGH3. 3 蛋白網(wǎng)絡(luò)互作GO 和KEGG 功能富集分析表明其可能通過(guò)植物激素尤其是生長(zhǎng)素信號(hào)通路參與梨果實(shí)組織的發(fā)育。

4 結(jié)論

基因PbGH3. 3 與PbGH3 在‘ 玉露香梨’果實(shí)萼片等組織中存在差異表達(dá)，成功克隆出2個(gè)IAA 信號(hào)通路關(guān)鍵生長(zhǎng)素?zé)燉０泛铣擅富?，明確了生長(zhǎng)素酰胺合成酶基因GH3 的2 個(gè)關(guān)鍵基因生物信息特征，均含GH3 superfamily保守結(jié)構(gòu)域，屬GH3 蛋白家族。本實(shí)驗(yàn)可為從生長(zhǎng)素信號(hào)通路研究‘ 玉露香梨’萼片的脫落分子機(jī)理提供參考基因?；騁H3 如何通過(guò)IAA 通路影響萼片發(fā)育的機(jī)制有待進(jìn)行更深入的功能驗(yàn)證。

致謝

感謝大連理工大學(xué)的Noman Ali 博士對(duì)本文英文摘要的修改潤(rùn)色。

We thank Dr. Noman Ali， from School of Bioengineering， DalianUniversity of Technology， Dalian， 116024， Liaoning， People'sRepublic of China， for his revision in English abstract.

參考文獻(xiàn)

［1］張曉偉， 白牡丹， 郝國(guó)偉， 等. 玉露香梨生長(zhǎng)期內(nèi)干物質(zhì)和氮磷鉀元素積累規(guī)律分析［J］. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2020， 48（11）：1758-1762.

Zhang X W， Bai M D ， Hao G W， et al. Analysis on theaccumulation law of dry matter， nitrogen， phosphorus andpotassium during the growth period of Yuluxiang pear［J］.Shanxi Agricultural Science， 2020， 48（ 11）：1758-1762.

［2］李曉梅， 郭黃萍， 黃軍保. 玉露香梨及其在黃土高原地區(qū)建園技術(shù)［J］. 中國(guó)果樹(shù)， 2004， 5（1）： 23-24.

Li X M， Guo H P， Huang J B. Yuluxiang pear and its gardeningtechnology in the Loess Plateau［J］. China Fruits， 2004， 5（1）：23-24.

［3］陸鳳勤. 玉露香梨的引種表現(xiàn)及栽培技術(shù)要點(diǎn)［J］. 中國(guó)農(nóng)業(yè)信息， 2015， 174（6）：81-82.

Lu F Q. Introduction performance and cultivation techniques ofYuluxiang pear［J］. China Fruit News， 2015， 174（6）： 81-82.

［4］劉妮， 陶書(shū)田， 張紹鈴， 等. 授粉品種對(duì)'庫(kù)爾勒香梨'果實(shí)萼片宿存及品質(zhì)的影響［J］. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2011， 34（3）：43-47.

Liu N， Tao S T， Zhang S L， et al. Effect of different pollinizervarieties on calyx retention and quality for 'Kuerlexiangli' fruit［J］. Journal of Nanjing Agricultural University， 2011， 34（3）：43-47.

［5］陳園園， 羅嘉亮， 李凱， 等. 梨脫萼果與宿萼果品質(zhì)比較［J］.北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2018， 33（1）：15-21.

Chen Y Y， Luo J L， Li K， et al. Compatine studies on qualityand texture of leaving calyx and persistent calyx fruits in pear［J］. Journal of Beijing University of Agriculture， 2018， 33（1）：15-21.

［6］張光富， 李玲. 植物的萼片與苞片［J］. 生物學(xué)教學(xué)， 2011，36（7）：71.

Zhang G F， Li L. Sepals and bracts of plants［J］. BiologyTeaching， 2011， 36（7）：71.

［7］何子順， 牛建新， 吳忠華， 等. 庫(kù)爾勒香梨花萼發(fā)育規(guī)律研究［J］. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2007， 44（03）：377-381.

He Z S， Niu J X， Wu Z H， et al. A Study on development lawof calyx of Korla fragrant pear（Pyrus brestschneideri Rehd）［J］.Xinjiang Agricultural Sciences， 2007， 44（03）：377-381.

［8］木合塔爾·扎熱. 庫(kù)爾勒香梨樹(shù)光能利用效率及宿萼果和粗皮果形成因子的研究［D］. 烏魯木齊：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2012.

Muhetal Z A. Study on light use efficiency and related factorswith calyx fruit and rough fruit of Korla Fragrant Pear［D］.Urumqi：Xinjiang Agricultural University， 2012.

［9］衡偉， 陳捷， 葉振風(fēng)， 等. 碭山酥梨幼果花萼發(fā)育及其調(diào)控技術(shù)研究［J］. 合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2010， 37（02）：238-243.

Heng W， Chen J， Ye Z F， et al. Development of calyx and itscontrolling techniques of young fruit of Dangshansu pear［J］.Hefei：Journal of Anhui Agricultural University， 2010， 37（02）：238-243.

［10］陳園園， 李凱， 宋宇琴， 等. PBO 對(duì)玉露香梨果實(shí)脫萼及品質(zhì)的影響［J］. 中國(guó)南方果樹(shù)， 2018， 47（5）：55-58.

Chen Y Y， Li K， Song Y Q， et al. Effects of PBO on calyxfalling and fruit quality of Yuluxiangli pear［J］. South ChinaFruits， 2018， 47（5）：55-58.

［11］丁家鳴. 花期氣溫變化對(duì)庫(kù)爾勒香梨脫萼果和宿萼果形成的影響［D］. 烏魯木齊：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2015.

Ding J M. Effects of flowering temperature changes of abscisiccalyx and persistent calyx fruit of Korla fragrant pear formation［D］. Urumqi： Xinjiang Agricultural University， 2015.

［12］Meir S， Hunter D A， Chen J C， et al. Molecular changesoccurring during acquisition of abscission competence followingauxin depletion in Mirabilis Jalapa［J］. Plant Physiology，2006， 141（4）：1604-1616.

［13］Zuo X， Xu T， Qi M， et al. Expression patterns of auxinresponsivegenes during tomato flower pedicel abscission andpotential effects of calcium［J］. Australian Journal of Botany，2012， 60（1）：68.

［14］丁保朋. 梨果實(shí)萼片對(duì)果形的影響及其發(fā)育相關(guān)基因分析［D］. 太谷：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2020.

Ding B P. Study on the effect of the sepals of Pyrus fruit onfruit shape and its molecular mechanism［D］. Taigu： ShanxiAgricultural University， 2020.

［15］Qi X， Wu J， Wang L， et al. Identifying the candidate genesinvolved in the calyx abscission process of 'kuerlexiangli'（Pyrus Sinkiangensis Yu） by digital transcript abundancemeasurements［J］. BMC Genomics， 2013， 14（1）：727.

［16］曾文芳， 潘磊， 牛良， 等. 桃GH3 基因家族的生物信息學(xué)分析及其在果實(shí)發(fā)育中的表達(dá)［J］. 園藝學(xué)報(bào)， 2015， 42（05）：833-842.

Zeng W F， Pan L， Niu L， et al. Bioinformatics analysis ofpeach GH3 gene family and its expression in fruit development［J］. Acta Horticulture Sinica， 2015， 42（05）：833-842.

［17］周蘋(píng)， 唐冬英， 郭明， 等. 擬南芥GH3.9 基因的過(guò)表達(dá)及其表型分析［J］. 西北植物學(xué)報(bào)， 2015， 35（3）：5.

Zhou P， Tang D Y， Guo M， et al. Overexpression andphenotype Analysis of GH3.9 gene in Arabidopsis thaliana［J］.Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica， 2015， 35（3）：5.

［18］張曉峰， 焦鋒， 聶浩， 等. 桑樹(shù)MaGH3.6 基因的克隆與誘導(dǎo)表達(dá)及時(shí)間特異性［J］. 蠶業(yè)科學(xué)， 2013（2）：8.

Zhang X F， Jiao F， Nie H， et al. Cloning， induced expressionand temporal specificity of MaGH3.6 gene in Mulberry.Science of Sericulture， 2013（2）：8.

［19］Ostrowski M， Mierek-Adamska A， Porowińska D E T， et al.Cloning and biochemical characterization of indole-3-acetic acidaminoacid synthetase PsGH3 from pea. Plant PhysiolBiochem. 2016， 107：9-20.

［20］Wei L J， Yang B， Jian H J， et al. Genome-wide identification22and characterization of Gretchen Hagen3 （GH3） family genesin Brassica napus［J］. Genome， 2019， 62（9）：597–608.

［21］高利敏， 王鵬飛， 杜俊杰， 等. 歐李ChCCD1 基因的克隆與生物信息分析［J］. 分子植物育種， 2018， 16（05）：1426-1432.

Gao L M， Wang P F， Du J J， et al. Cloning andbioinformatics Analysis of CCD1 gene in Cerasus humilis［J］.Molecular Plant Breeding， 2018， 16（05）：1426-1432.

［22］邢磊， 郭園藝， 汪自慶， 等. 羊草GST 基因的克隆及序列分析［J］. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2020， 40（5）：48-56．

Xing L， Guo Y Y， Wang Z Q， et al. Cloning andbioinformatics analysis of GST gene of Leymus chinensis［J］.Journal of Shanxi Agricultural University （Natural ScienceEdition）， 2020， 40（5）：48-56.

（編輯：呂俊俐）

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目（32102364）