關(guān)鍵詞分子印跡聚合物膜；拉莫三嗪；選擇性吸附；血漿

癲癇是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其特征是神經(jīng)元的反復(fù)異常放電[1]。在中國，癲癇是僅次于頭痛的第二大神經(jīng)科常見病，給患者和家屬帶來極大的痛苦[2]。藥物治療仍然是當(dāng)前控制癲癇發(fā)作的首選方法，但在癲癇的治療過程中，病人之間的個體化差異因素可能導(dǎo)致不同個體血藥濃度差異，進(jìn)而產(chǎn)生不同的藥效學(xué)作用及/或毒副反應(yīng)[3]。因此，開展血藥濃度測定，可優(yōu)化藥物的個體化用藥劑量，改善癲癇的治療效果或降低毒副反應(yīng)[4]。

拉莫三嗪（Lamotrigine，LTG）是用于部分和全身驚厥發(fā)作的廣譜抗癲癇藥物，在多種發(fā)作類型癲癇或發(fā)作類型不明確癲癇的治療中，LTG常是首選藥物[5]。但是，LTG可能導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用，甚至在急性期出現(xiàn)危及生命的風(fēng)險[6-7]。因此，測定LTG血藥濃度，并以此合理調(diào)整劑量，在癲癇治療中具有重要的臨床意義。當(dāng)前，LTG血藥濃度測定方法包括免疫分析法、氣相色譜法、高效液相色譜法及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[8]等。免疫分析法具有樣品處理簡單、測定迅速的特點，但該方法無法避免結(jié)構(gòu)類似物的干擾，測得的濃度通常高于真實血藥濃度[9-11]。色譜分析法可同時實現(xiàn)目標(biāo)物的分離與檢測，提供準(zhǔn)確的血藥濃度，是免疫分析法的理想替代方法，但色譜分析方法需要處理血漿樣品以保證測定結(jié)果準(zhǔn)確。

采用色譜測定LTG血藥濃度時，血漿樣品的處理方法包括甲醇或乙腈沉淀蛋白法[12-13]、液液萃取法[14]和固相萃取法[15]等，其中，基于分子印跡聚合物的固相萃取因其較強(qiáng)的選擇性吸附和抗內(nèi)源性物質(zhì)干擾能力在LTG的生物分析中備受關(guān)注[16-20]。分子印跡聚合物是一種對目標(biāo)分子具有特異性識別的材料，以其作為固相萃取的填料時，通常需要經(jīng)過稱重、裝填和離心等步驟，操作繁瑣，耗時較長。采用多孔膜材料作為分子印跡材料的載體所制備的分子印跡聚合物膜（Molecularlyimprintedpolymermembranes，MIPMs）集合了分子印跡聚合物的特異性識別和膜高滲透性的特點[21]，在各種樣品基質(zhì)中目標(biāo)物的選擇性提取研究中備受關(guān)注并得到了廣泛應(yīng)用[22-24]。但是，目前尚未見應(yīng)用于血漿中LTG選擇性提取的MIPMs的相關(guān)報道?；诖?，本研究以LTG為印跡分子、聚偏氟乙烯（Polyvinylidenefluoride，PVDF）膜為載體，構(gòu)建了一種適于選擇性提取血漿中LTG的MIPMs，以期用于臨床血漿樣本的快速處理。

1實驗部分

1.1儀器與試劑

QUANTAFEG450掃描電子顯微鏡（SEM，美國FEI公司）；Escalab250XiX射線光電子能譜分析儀（美國賽默飛公司）；ASAP2460比表面積及孔徑分析儀（BET，美國Millipore公司）；FT-IR360傅里葉變換紅外光譜儀（日本島津公司）；Waterse2695高效液相色譜儀（美國沃特世公司）；AB265-S梅特勒電子分析天平（瑞士梅特勒公司）；GenPureUV/UF超純水機(jī)（美國Millipore公司）；SorvallLegendMicro21R高速冷凍離心機(jī)（美國賽默飛公司）；LNG-T98A移動式真空離心濃縮儀（太倉華利達(dá)有限公司）。

苯巴比妥（Phenobarbital，PHB，≥98.0%）為江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司饋贈；奧卡西平（Oxcarbazepine，OXC，≥98.0%）、拉莫三嗪（LTG，≥98.0%）、卡馬西平（Carbamazepine，CBZ，≥98.0%）、甲基丙烯酸（Methacrylicacid，MAA，≥99.9%）購自上海麥克林科技有限公司；2，2-二苯基甘氨酸（≥98.0%）、苯偶酰（Benzil，BEN，≥98.0%）購自上海阿拉丁科技有限公司；PVDF膜購自德國默克公司；色譜純甲醇和乙腈（Acetonitrile，ACN）購自美國SEPSERV公司；偶氮二異丁腈（Azodiisobutyronitrile，AIBN，≥98.0%）購自上海安耐吉有限公司；甲基丙烯酸乙二醇酯（Ethyleneglycoldimethacrylate，EGDMA，≥98.0%）、4-乙烯基苯甲酸（4-Vinylbenzoicacid，VBA，≥97.0%）、甲基丙烯酸甲酯（Methylmethacrylate，MMA，≥99.5%）、三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯（Trimethylolpropanetrimethacrylate，TRIM，≥98.0%）、甲基丙烯酰胺（Methacrylamide，MAAm，≥98.0%）、丙烯酰胺（Acrylamide，AM，≥99.9%）、二甲基甲酰胺（Dimethylformamide，DMF，≥99.9%）均為分析純，購自上海阿拉丁科技有限公司；色譜純乙醇和乙酸（≥99.9%）購自國藥集團(tuán)上海有限公司；尼龍-66膜（Nylon-66，NY-66）、聚丙烯膜（Polypropylene，PP）和聚四氟乙烯膜（Polytetrafluoroethylene，PTFE）購自海寧市中力過濾設(shè)備廠。

1.2LTG-MIPMs的制備

將PVDF膜浸入甲醇中24h，用蒸餾水沖洗3次，再將PVDF膜浸入0.05mol/LAIBN甲醇溶液中10min，取出，晾干，剪成2cm×2cm，備用。準(zhǔn)確稱取51.22mgLTG（0.2mmol），移取約522μLMMA（6.0mmol）和2.5mLACN-DMF（1：1.5，V/V）溶液，均置于30mL錐形瓶中，超聲15min后置于室溫下預(yù)聚合2h；再準(zhǔn)確稱取16.76mgAIBN（0.1mmol），移取607μLEGDMA（3.0mmol），均置于預(yù)聚合溶液中。將活化好的PVDF膜（2cm×2cm）浸入所得的溶液中，在N2環(huán)境和室溫條件下反應(yīng)15min，再在N2環(huán)境、60℃油浴中反應(yīng)24h；取出PVDF膜，晾干，以甲醇-乙酸（9：1，V/V）和甲醇依次洗脫，即得LTG-MIPMs（圖1）。作為對照，除不加入模板分子外，采用相同程序制備非分子印跡膜（Non-molecularlyimprintedpolymermembranes，NIPMs）。

1.3材料的吸附性能考察

1.3.1等溫吸附

取25.02mgLTG置于25mL棕色容量瓶中，以甲醇溶解并定容，配制成1.00mg/mLLTG標(biāo)準(zhǔn)儲備液。準(zhǔn)確移取該標(biāo)準(zhǔn)儲備液適量，用水稀釋，得到不同濃度的LTG標(biāo)準(zhǔn)溶液。將LTG-MIPMs或NIPMs分別加入到5mL不同濃度（10、20、30、40、60、80和100μg/mL）的LTG標(biāo)準(zhǔn)溶液中，室溫靜置吸附2h。取吸附后溶液，經(jīng)0.22μm有機(jī)濾膜過濾后，采用HPLC-UV法測定LTG的濃度。按公式（1）計算吸附容量，按公式（2）、（3）和（4）的Langmuir、Freundlich和Dubinin-Radushkevich模型方程進(jìn)行擬合[16]：

其中，Qe為材料的吸附容量（mg/g），C0為LTG初始溶液的濃度（μg/mL），Ce為吸附平衡后溶液的濃度（μg/mL），V為吸附溶液體積（mL），W為印跡膜的干重（mg）；Q0為最大吸附量（mg/g），b為Langmuir模型常數(shù)；KF為Freundlich模型常數(shù)（mg/g），n為吸附強(qiáng)度；kad為吸附自由能相關(guān)的活度系數(shù)（mol2/J2），ε為Polanyi吸附勢（計算式為ε=RTln（1+1/Ce），其中，T為絕對溫度，R為氣體常數(shù)（8.314J·K/mol）。

1.3.2吸附動力學(xué)

將LTG-MIPMs或NIPMs分別加入到5mL60μg/mLLTG標(biāo)準(zhǔn)溶液中，室溫靜置吸附。分別在不同時間點（2、5、10、15、20、30、40、60、90和120min）從同一溶液中進(jìn)行多次取樣，經(jīng)0.22μm有機(jī)系濾膜過濾后，采用HPLC-UV法測定LTG的濃度。按公式（1）計算印跡膜的吸附容量，按公式（5）和（6）對其進(jìn)行偽一階和偽二階速率方程擬合[16]：

其中，t為吸附時間（min），Qt為時間t時吸附量（mg/g），k1為偽一階速率方程常數(shù)，k2為偽二階速率方程常數(shù)。

1.3.3吸附選擇性

將LTG-MIPMs或NIPMs分別加入到5mL60μg/mL的LTG、OXC、CBZ、PHB和BEN溶液中，室溫靜置吸附2h。取吸附后溶液，經(jīng)0.22μm有機(jī)系濾膜過濾，采用HPLC-UV法測定LTG的濃度。按公式（7）、（8）和（9）分別計算得到分配系數(shù)Kd、選擇性系數(shù)α和相對選擇系數(shù)β[16]：

1.3.4pH值對吸附性能影響

將LTG-MIPMs或NIPMs加入到5mL不同pH值的60μg/mLLTG標(biāo)準(zhǔn)溶液（以HNO3或NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至3.0、5.0、7.0、9.0和11.0）中，室溫下靜置吸附2h。取吸附后溶液，過0.22μm有機(jī)系濾膜，采用HPLC-UV測定LTG濃度。

1.4吸附-解吸附實驗

將LTG-MIPMs分別加入到5mL60μg/mLLTG標(biāo)準(zhǔn)溶液中，室溫靜置吸附30min。將吸附飽和的LTG-MIPMs加入到1mL甲醇中，室溫靜置20min進(jìn)行解吸附。

1.5重復(fù)利用性

將LTG-MIPMs加入到5mL60μg/mLLTG標(biāo)準(zhǔn)溶液中，室溫靜置吸附30min；取吸附后溶液測定LTG濃度，并計算吸附容量。將吸附飽和的LTG-MIPMs加入到1mL甲醇中，室溫靜置20min進(jìn)行解吸附，將解吸附后的LTG-MIPMs加入到5mL60μg/mLLTG標(biāo)準(zhǔn)溶液中，室溫靜置吸附30min，取吸附后溶液測定LTG的濃度，并計算吸附容量。如此重復(fù)實驗。

1.6實際應(yīng)用能力評價

將LTG加入到大鼠空白血漿中，制備模擬血漿樣本。取0.5mL血漿，加入磷酸鹽緩沖液1.5mL，渦旋混合，加入LTG-MIPMs，室溫靜置吸附30min，取出LTG-MIPMs并將其置于1mL甲醇中解吸附20min后，再取出LTG-MIPMs，取解吸附溶液在40℃水浴下用N2吹干，殘渣用200μL甲醇-水（60∶40，V/V）復(fù)溶，10000r/min離心，取上清液進(jìn)行HPLC-UV分析。另取0.5mL血漿，加入1.5mL乙腈溶液，渦旋混合，10000r/min離心，上清液在40℃水浴下用N2吹干，殘渣用200μL甲醇-水（60∶40，V/V）復(fù)溶，10000r/min離心，上清液用HPLC-UV分析。

2結(jié)果與討論

2.1LTG-MIPMs制備參數(shù)的優(yōu)化

為獲得LTG-MIPMs的最佳制備參數(shù)，本研究采用單因素實驗法，分別考察了載體膜的類型、模板的用量、功能單體的類型及用量、交聯(lián)劑的類型及用量、引發(fā)劑的用量、致孔劑的類型及用量等對LTGMIPMs吸附容量的影響，結(jié)果見圖2。

以PVDF膜為載體，考察了LTG、EGDMA、AIBN和ACN-DMF（1∶1.5，V/V）的用量分別為0.20mmol、4.0mmol、0.10mmol和2.5mL時，濃度為6.0mmol的不同功能單體（MAA、VBA、MAAm、MMA和AM）對MIPMs吸附容量的影響，結(jié)果見圖2A，以MMA為功能單體時，所獲得的吸附容量最佳。在此實驗條件下，考察了MMA用量（4.0、5.0、6.0、7.0和8.0mmol）對MIPMs吸附容量的影響，結(jié)果見圖2B，當(dāng)MMA用量為6.0mmol，即模板分子/功能單體摩爾比為1∶30時，所制備的MIPMs具有最佳的吸附容量。

以PVDF膜為載體，考察了LTG、MMA、AIBN和ACN-DMF（1∶1.5，V/V）的用量分別為0.20mmol、6.0mmol、0.10mmol和2.5mL時，3.0mmol的EGDMA和TRIM對MIPMs吸附容量的影響，結(jié)果見圖2C，采用EGDMA為交聯(lián)劑所獲得的吸附容量顯著高于TRIM。在此實驗條件下，考察了EGDMA用量（2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mmol）對MIPMs吸附容量的影響，結(jié)果見圖2D，當(dāng)EGDMA用量為3.0mmol，即模板分子/功能單體/交聯(lián)劑摩爾比為1∶30∶15時，所獲得的吸附容量最佳。

以PVDF膜為載體，考察了LTG、MMA、EGDMA和ACN-DMF（1∶1.5，V/V）用量分別為0.20mmol、6.0mmol、3.0mmol和2.5mL時，AIBN用量（0.050、0.075、0.10、0.15和0.20mmol）對MIPMs吸附容量的影響，結(jié)果見圖2E，當(dāng)AIBN用量為0.10mmol時，所制備MIPMs的吸附容量最佳。

考察了LTG、MMA、EGDMA和AIBN用量分別為0.20、6.0、3.0和0.10mmol時，2.5mL的ACN、ACN-DMF（1.5∶1，V/V）、ACN-DMF（1∶1，V/V）、ACN-DMF（1∶1.5，V/V）和ACN-DMF（1∶2，V/V）對MIPMs吸附容量的影響，結(jié)果見圖2F，致孔劑為2.5mLACN-DMF（1∶1.5，V/V）所制備的MIPMs的吸附容量最佳?？疾炝薓MA、EGDMA、AIBN和ACN-DMF（1∶1.5，V/V）用量分別為6.0mmol、3.0mmol、0.10mmol和2.5mL時，模板分子用量（010、0.15、0.20、0.25、0.30mmol）對MIPMs吸附容量的影響，結(jié)果見圖2G，模板分子用量為0.20mmol所獲得的吸附容量最佳。

考察了LTG、MMA、EGDMA、AIBN、ACN-DMF（1∶1.5，V/V）用量分別為0.20mmol、6.0mmol、3.0mmol、0.10mmol和2.5mL時，不同支持膜（PVDF、PP、PTFE和NY-66）對MIPMs的吸附容量的影響，結(jié)果見圖2H。采用PVDF為支持膜，所制得的MIPMs具有最佳的吸附容量，推測其原因可能為PVDF膜所含氟原子具有較大的電負(fù)性，并且兩個氟原子之間具有較大的空間間隔，在活化過程中，更易與AIBN的偶氮基團(tuán)發(fā)生化學(xué)性的相互作用。

綜上，以PVDF為載體膜，0.20mmolLTG為模板分子，MMA為功能單體，EGDMA為交聯(lián)劑，模板分子/功能單體/交聯(lián)劑的摩爾比為1∶30∶15，0.10mmolAIBN為引發(fā)劑，2.50mLACN-DMF（1∶1.5，V/V）為致孔劑時，所制備的LTG-MIPMs對LTG具有較好的吸附容量。

2.2材料表征

圖3為PVDF膜、NIPMs、LTG-MIPMs和未洗脫模板的LTG-MIPMs的物理形貌及SEM圖。由圖3A～3D可見，NIPMs呈現(xiàn)出比PVDF略深的灰色，這可能是由于PVDF膜表面覆蓋分子印跡聚合物所致；洗去模板的LTG-MIPMs呈現(xiàn)出淡黃色，可能是未完全洗盡的LTG所呈現(xiàn)的顏色；未洗去模板的MIPMs呈現(xiàn)出深黃色，可能是LTG所呈現(xiàn)的顏色。由圖3E～3H可見，PVDF膜上分布著密集的不規(guī)則孔穴；NIPMs表面呈現(xiàn)出不規(guī)則的堆積層；未洗去模板的LTG-MIPMs表面呈現(xiàn)均勻且致密的堆積層，這可能是由于在合成分子印跡聚合物過程中加入了模板分子所致；洗去模板的LTG-MIPMs表面呈現(xiàn)出松散且較均勻的規(guī)則堆積層，這可能是洗去模板分子所致。

以PVDF膜為本底，采用FT-IR對LTG-MIPMs和NIPMs進(jìn)行分析，結(jié)果見圖4A，兩個化合物譜圖中1722和1638cm?1左右處的吸收峰可能為MMA和EGDMA的C=O和C=C的伸縮振動峰；LTGMIPMs譜圖中3000cm?1左右的雙峰可能為殘留LTG的N—H伸縮振動峰。材料的XPS分析結(jié)果見圖4B，PVDF膜、NIPMs和LTG-MIPMs均在結(jié)合能為295eV處出現(xiàn)明顯的特征峰，對應(yīng)C1s；與PVDF膜相比，NIPMs和LTG-MIPMs在538eV處出現(xiàn)O1s特征峰，表明基膜表面產(chǎn)生了印跡聚合物。

由圖4C可見，PVDF膜、MIPMs及NIPMs分別在450、430和400℃之前表現(xiàn)出較好的熱穩(wěn)定性，失重率為3%；PVDF的失重可能是因游離水丟失所致，而MIPMs及NIPMs的失重則可能是游離水丟失和分子印跡聚合物分解所致。PVDF膜、MIPMs及NIPMs分別在445～480℃、430～480℃和400～480℃范圍內(nèi)失重變化明顯，失重率為60%，這主要是由PVDF分解所致。最終殘留質(zhì)量百分比的高低順序為PVDFlt;NIPMslt;MIPMs，推測可能是PVDF膜表面上印跡了一層聚合物，導(dǎo)致NIPMs和MIPMs質(zhì)量高于PVDF膜，因此NIPMs和MIPMs殘留質(zhì)量百分比均高于PVDF膜；未加入模板分子時，NIPMs表面印跡聚合物的質(zhì)量高于MIPMs，因而其殘留質(zhì)量百分比低于MIPMs。

材料的氮吸附等溫線和孔徑分布曲線見圖4D和4E，BET的表征數(shù)據(jù)見表1。結(jié)果表明，與PVDF膜相比，LTG-MIPMs和NIPMs的比表面積小，表明在PVDF膜表面成功修飾了印跡層；與NIPMs相比，LTG-MIPMs具有較大的比表面積，這可能是MIPMs洗脫模板分子后產(chǎn)生印跡空穴所致。NIPMs及MIPMs的孔徑低于PVDF膜，證明PVDF膜表面成功印跡了聚合物；MIPMs的孔徑顯著高于NIPMs，可能是在MIPMs的分子印跡聚合物合成過程中加入了模板及合成后洗去模板所致。

2.3材料的吸附性能

2.3.1等溫吸附及動力學(xué)吸附

LTG-MIPMs和NIPMs對LTG的吸附等溫線及擬合模型曲線如圖5A～5D所示，Langmuir、Freundlich和Dubinin-Radushkevich模型方程的具體參數(shù)如表2所示，LTG-MIPMs對LTG的吸附容量隨著其濃度增加而增大，最大吸附容量為3.77mg/g，遠(yuǎn)大于NIPMs，表明LTG-MIPMs對LTG的吸附主要為特異性吸附；與其它兩個模型相比，Langmuir模型的擬合方程的R2=0.9823，理論最大吸附容量為4.59mg/g。因此，LTG-MIPMs對LTG的吸附過程更符合Langmuir模型，表明吸附表面不存在分子間相互作用，也不存在吸附分子之間的遷移，單層吸附發(fā)生在結(jié)合位點[16]。

LTG-MIPMs及NIPMs對LTG的吸附動力學(xué)曲線和擬合模型曲線見圖5E～5F，吸附動力學(xué)常數(shù)如表3所示，LTG-MIPMs對LTG的吸附容量在前30min迅速增加，隨后逐漸達(dá)到平衡，平衡吸附容量為3.01mg/g；與偽一階速率方程相比，偽二階速率方程的R2更高，達(dá)到了0.9998（圖5G），并且平衡吸附容量的理論值Qe（cal）更接近實測值Qe（exp），表明LTG-MIPMs對LTG的吸附過程更符合偽二階動力學(xué)模型。此結(jié)果表明靶分子與MIPMs之間的化學(xué)相互作用參與了吸附過程，并且吸附速率可能受控于靶分子在空穴內(nèi)的運動[16]。

2.3.2pH值對材料吸附性能的影響

考察了pH值（3.0、5.0、7.0、9.0和11.0）對LTG的吸附性能的影響。如圖6A所示，pH=3.0時MIPMs和NIPMs對LTG的吸附容量均顯著低于其它pH值時的相應(yīng)吸附容量。這可能是因為當(dāng)pH值遠(yuǎn)低于LTG的pKa（5.7）時，LTG呈非解離狀態(tài)，無法與MIPMs印跡點或NIPMs之間產(chǎn)生氫鍵或π-π相互作用；當(dāng)pH值為5.0、7.0、9.0和11.0時，MIPMs或NIPMs對LTG的吸附容量無明顯差異。

2.3.3吸附選擇性

采用LTG的結(jié)構(gòu)類似物及臨床應(yīng)用中可能同時服用的藥物（OXC、CBZ、PHB、BEN），考察了LTG-MIPMs和NIPMs對LTG的選擇性吸附能力；采用印跡因子（Imprintingfactor，IF，分子印跡聚合物和非分子印跡聚合物對模板分子的吸附量之比）、選擇性系數(shù)（α）和相對選擇性系數(shù)（β）評價分子印跡聚合物和非印跡聚合物對模板分子的選擇性吸附性能[25]。如圖6B所示，MIPMs對各化合物的吸附容量均高于NIPMs。由表4可知，LTG-MIPMs對LTG的吸附容量為3.57mg/g，均高于其它干擾物，但對PHB也有較高的吸附容量，推測可能是PHB的化學(xué)及空間結(jié)構(gòu)與LTG最相似所致。MIPMs對干擾物與LTG之間的選擇性吸附能力由高到低依次為BEN、OXC、CBZ和PHB，對應(yīng)的選擇性系數(shù)分別為2.60、2.15、1.78和1.34，而NIPMs對LTG及其干擾物的吸附容量差別和選擇性吸附能力均較小。與NIPMs相比，LTG-MIMPs對LTG的印跡因子達(dá)8.97，相對選擇性系數(shù)達(dá)13.07；對其它干擾物的印跡因子和相對選擇性系數(shù)由高到低依次為PHB、CBZ、BEN和OXC，而PHB、OXC和CBZ為臨床實際中可能出現(xiàn)的干擾物，BEN是化學(xué)工業(yè)中的結(jié)構(gòu)類似物，這表明本研究制備的LTG-MIPMs在LTG的靶向提取過程中具有較大的潛在應(yīng)用價值。

2.3.4吸附-解吸附條件的優(yōu)化

為獲得LTG-MIPMs的最佳吸附-解吸附條件，本研究分別考察了解吸附溶劑類型和體積、解吸附時間對LTG解吸附率（解吸附率（%）=吸附量/解吸附量×100）的影響，如圖6C～6E所示，當(dāng)解吸附溶劑為1mL甲醇、解吸附時間為20min時，解吸附效果最佳。

2.3.5重復(fù)利用性

選取同一批次的LTG-MIPMs和NIPMs進(jìn)行多次吸附-解吸附實驗以考察材料的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，隨著循環(huán)次數(shù)增加，由于少數(shù)識別位點在多次吸附-脫附過程中可能被LTG堵塞或遭到破壞，導(dǎo)致LTG-MIPMs對LTG的吸附容量逐漸降低；重復(fù)使用6次后，其吸附容量仍然可以達(dá)到首次吸附容量的86.66%（圖6F），說明所得LTG-MIPMs的重復(fù)利用性符合生物樣品的分析要求（變異值lt;15%）[26]。NIPMs對LTG的吸附為非特異性吸附，因此不受洗脫過程的影響，吸附容量并無明顯變化。

2.4材料的實際應(yīng)用能力評價

為考察所制備的MIPMs在實際血漿樣品中的應(yīng)用能力，本研究采用MIMPs處理模擬大鼠血漿樣本（LTG+大鼠空白血漿），并與經(jīng)典的乙腈沉淀法進(jìn)行比較，從提取率和抗基質(zhì)干擾兩個方面評價MIPMs在血漿樣品處理中的應(yīng)用潛能，結(jié)果見圖7和表5。MIPMs處理后血漿樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)的峰強(qiáng)度遠(yuǎn)低于乙腈沉淀蛋白法，而對LTG的提取率（提取率（%）=測得濃度/標(biāo)示濃度×100）在86.54%～90.48%之間，與乙腈沉淀蛋白法相比無明顯差異。上述結(jié)果表明，采用本研究制備的LTG-MIPMs對血漿進(jìn)行處理，不僅可實現(xiàn)血漿中LTG的高效靶向提取，還可顯著降低內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，在動物或臨床上LTG的血藥濃度測定中具有較好的應(yīng)用潛力。

3結(jié)論

采用PVDF膜為載體、LTG為模板分子、MMA為功能單體、EGDMA為交聯(lián)劑、AIBN為引發(fā)劑以及ACN-DMF（1∶1.5，V/V）為致孔劑，結(jié)合表面分子印跡和自由基聚合技術(shù)，制備了新型LTG-MIPMs材料，用于選擇性識別血漿中的LTG。此印跡膜具有對目標(biāo)分子LTG的選擇性良好、可重復(fù)使用、快速和簡便等優(yōu)勢，在處理含LTG的血漿樣品方面具有良好的應(yīng)用前景。