〔摘要〕 目的 研究天麻鉤藤飲對自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneously hypertensive rats， SHR）血管重塑的抑制作用及機(jī)制。方法 將大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型組、厄貝沙坦組和天麻鉤藤飲組。給藥過程中每周測量大鼠尾動(dòng)脈壓;給藥4周后，HE染色檢測胸主動(dòng)脈組織情況，測量與計(jì)算內(nèi)膜-中層厚度（intima-media thickness， IMT）、內(nèi)膜-中層厚度/管腔直徑（lumen diameter， LD），同時(shí)掃描電鏡檢查組織形態(tài)變化;免疫組織化學(xué)測定NADPH氧化酶2（NADPH oxidase 2， NOX2）、C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein， CHOP）、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose-regulating protein 78， GRP78）蛋白的表達(dá)情況;ELISA測定血漿中活性氧（reactive oxygen species， ROS）含量。結(jié)果 （1）尾動(dòng)脈壓檢測：與正常對照組比較，模型組大鼠收縮壓均顯著升高（Plt;0.05）;與模型組比較，給藥第1周起各治療組大鼠收縮壓均下降（Plt;0.05）。（2）胸主動(dòng)脈組織形態(tài)學(xué)檢測：掃描電鏡可見模型組胸主動(dòng)脈壁較正常對照組明顯增厚;與模型組比較，各治療組胸主動(dòng)脈壁厚度均降低。HE染色觀察可見正常對照組胸主動(dòng)脈血管結(jié)構(gòu)正常，未見動(dòng)脈管壁增生;模型組胸主動(dòng)脈壁明顯增厚，單位面積細(xì)胞核數(shù)量增多;與模型組比較，各治療組胸主動(dòng)脈壁厚度、單位面積細(xì)胞核數(shù)量均減少。與正常對照組比較，模型組胸主動(dòng)脈IMT、IMT/LD增加（Plt;0.05）;與模型組比較，各治療組胸主動(dòng)脈IMT、IMT/LD下降（Plt;0.05）。（3）免疫組織化學(xué)檢測胸主動(dòng)脈中NOX2、CHOP、GRP78蛋白表達(dá)水平：與正常對照組比較，模型組血管壁NOX2、CHOP、GRP78蛋白表達(dá)水平顯著上升（Plt;0.05）;與模型組比較，各治療組血管壁NOX2、CHOP、GRP78蛋白表達(dá)均下降（Plt;0.05）。（4）ELISA測定血漿中ROS含量：與正常對照組比較，模型組大鼠血漿中ROS含量顯著上升（Plt;0.05）;與模型組比較，各治療組ROS含量顯著下降（Plt;0.05）。結(jié)論 天麻鉤藤飲在降壓的同時(shí)抑制血管重塑，其機(jī)制可能與抑制NOX2/ROS通路介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 天麻鉤藤飲;高血壓;血管重塑;NOX2/ROS通路;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激

〔中圖分類號〕R285.5" " " " "〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2024.12.002

Inhibitory effects of Tianma Gouteng Drink on vascular remodeling and its impact on NOX2/ROS pathway and endoplasmic reticulum stress in SHR

QING Jun1，2， LIU Ping'an1， YAN Ran1， LIU Huiping1， LEI Xiaoming1， HUANG Jiawei3，

GUAN Pin2， LIU Huimin4， LIU Ting1， TANG Jiaqian1， ZHANG Guomin1*

1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. Hunan Provincial Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine， Changsha， Hunan 410006， China; 3. Nanning Hospital of Traditional Chinese Medicine， Nanning， Guangxi 530000， China; 4. The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China

〔Abstract〕 Objective To explore the inhibitory effects and related mechanism of Tianma Gouteng Drink on vascular remodeling in spontaneously hypertensive rats （SHR）. Methods The rats were randomized into normal control， model， irbesartan， and Tianma Gouteng Drink groups. The rat tail artery pressure was measured weekly during administration. After 4 weeks of administration， the tissue of the thoracic aorta was examined by HE staining; intima-media thickness （IMT） of the thoracic aorta was measured and the IMT/lumen diameter （LD） ratio was calculated; the morphological changes of the thoracic aorta were examined by scanning electron microscopy. Immunohistochemical analysis was performed to determine the protein expressions of NADPH oxidase 2 （NOX2）， C/EBP homologous protein （CHOP）， and glucose-regulating protein 78 （GRP78） in the thoracic aorta. ELISA was used to determine the plasma levels of reactive oxygen species （ROS）. Results （1） Tail artery pressure measurement： Compared with normal control group， the systolic blood pressure of rats in model group was significantly higher （Plt;0.05）; compared with model group， the systolic blood pressure of rats in all treatment groups decreased from the first week of administration （Plt;0.05）. （2） Histomorphological examination of the thoracic aorta： Scanning electron microscopy revealed that the wall of the thoracic aorta in model group was significantly thicker than that in normal control group; compared with model group， the thickness of the thoracic aortic wall was reduced in all treatment groups. HE staining showed that the vascular structure of the thoracic aorta in normal control group was normal， with no evidence of arterial wall proliferation; in model group， the wall of the thoracic aorta was significantly thickened， and the number of nuclei per unit area increased; compared with model group， both the thickness of the thoracic aortic wall and the number of nuclei per unit area were reduced in all treatment groups. Compared with normal control group， the IMT and IMT/LD of the thoracic aorta in model group increased （Plt;0.05）; compared with model group， the IMT and IMT/LD of the thoracic aorta decreased in all treatment groups （Plt;0.05）. （3） Immunohistochemical determination of NOX2， CHOP， and GRP78 protein expression levels in the thoracic aorta： Compared with normal control group， the protein expression levels of NOX2， CHOP， and GRP78 in the vascular wall of model group were significantly higher （Plt;0.05）; compared with model group， the protein expression levels of NOX2， CHOP， and GRP78 in the vascular wall decreased in all treatment groups （Plt;0.05）. （4） ELISA measurement of plasma ROS level： Compared with normal control group， plasma ROS level in model group significantly increased （Plt;0.05）; compared with model group， ROS levels of all treatment groups significantly decreased （Plt;0.05）. Conclusion Tianma Gouteng Drink can inhibit vascular remodeling while lowering blood pressure， and its mechanism may be related to the inhibition of endoplasmic reticulum stress mediated by NOX2/ROS pathway.

〔Keywords〕 Tianma Gouteng Drink; hypertension; vascular remodeling; NADPH oxidase 2/reactive oxygen species pathway; endoplasmic reticulum stress

高血壓是全球面臨的重大心腦血管疾病之一，血管重塑為高血壓發(fā)生發(fā)展過程中血管的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生一系列病理改變的結(jié)果，同時(shí)又是高血壓不斷進(jìn)展及靶器官損害的重要危險(xiǎn)因素[1]。新近研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與血管重塑發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激不僅影響血管內(nèi)皮功能，促進(jìn)血管平滑肌異常增生，亦可導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解紊亂[2-3]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激又受上游NADPH氧化酶2過氧化物酶 （NADPH oxidase 2， NOX2）/活性氧（reactive oxygen species， ROS）通路調(diào)節(jié)，NOX2催化產(chǎn)生的ROS作為信號分子，是介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的重要因素[4-5]。因此，我們推測NOX2/ROS通路介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與高血壓血管重塑發(fā)生機(jī)制，有待實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

肝陽上亢證為高血壓患者主要證型，血管重塑主要考慮兼夾瘀血阻絡(luò)證[6]。天麻鉤藤飲為治療高血壓的經(jīng)典名方，方中天麻、鉤藤平肝息風(fēng)兼通絡(luò)，為君。石決明重鎮(zhèn)平肝潛陽，加強(qiáng)平肝息風(fēng)之力;川牛膝引血下行，兼活血利水，共為臣藥。杜仲、桑寄生補(bǔ)益肝腎以培本;梔子、黃芩清肝降火，以折其亢陽;益母草助川牛膝活血利水之效，以利平肝陽;首烏藤、朱茯神寧心安神，均為佐藥。諸藥合用，共奏平肝潛陽、活血通絡(luò)之效。實(shí)驗(yàn)證實(shí)天麻鉤藤飲的降壓療效，并能改善血管內(nèi)皮功能[7]，但該方干預(yù)高血壓及血管重塑的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本研究以自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneously hypertensive rats，SHR）為研究對象，天麻鉤藤飲進(jìn)行干預(yù)，探討該方對SHR胸主動(dòng)脈血管重塑及NOX2/ROS通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響。

1 材料

1.1" 動(dòng)物來源

SPF級WKY大鼠，雄性，7周齡，8只[北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK（京）2021-0006];SPF級SHR，雄性，7周齡，24只[北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK（京）2021-0006]。飼養(yǎng)條件：溫度20～26 ℃，濕度40%～70%的SPF級環(huán)境中，自由飲食攝水。本研究經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批號2022041701）

1.2" 實(shí)驗(yàn)試劑

一抗：NOX2（批號：DF6520）購自江蘇親科生物研究中心有限公司;CHOP（批號：15204-1-AP）、GRP78（批號：66574-1-Ig）均購自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司。二抗：辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG（H+L）（批號：ZB-2301）購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。ROS熒光法測試盒（批號：E-BC-K138-F）購自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司。檸檬酸鈉（批號：S116311）購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。檸檬酸（批號：77-92-9）購自天津市大茂化學(xué)試劑廠。牛血清白蛋白V（BSA）（批號：A8020）、伊紅染色液（批號：G1100）、Scott藍(lán)化液（批號：G1865）均購自北京索萊寶科技有限公司。蘇木素染液（批號：ZLI-9610）購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。DAB顯色試劑盒（批號：CW0125M）、中性樹脂膠（批號：CW0136）均購自江蘇康為世紀(jì)生物科技股份有限公司。超凈高級封片膠（批號：YZB）購自江蘇貝索生物工程有限公司。

1.3" 主要設(shè)備

小動(dòng)物無創(chuàng)血壓儀（型號：BP2010AUL）購自北京軟隆生物技術(shù)有限公司;掃描電鏡（型號：FEI Quanta250）購自美國菲達(dá)康有限責(zé)任公司;離子濺射儀（型號：108Auto）購自英國Cressington公司;組織脫水機(jī)（型號：KD-TS3S1）購自浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司;石蠟包埋機(jī)（型號：HistoCore Arcadia）、切片機(jī)（型號：HistoCore BIOCUT）、攤片機(jī)（型號：Leica HI1210）均購自德國Leica公司;全自動(dòng)酶標(biāo)儀（型號：WD-2012B）購自北京市六一儀器廠;顯微鏡（型號：BX43）購自日本OLYMPUS公司;電熱恒溫培養(yǎng)箱（型號：DHP-9082B）購自上海一恒科學(xué)儀器有限公司;高速冷凍離心機(jī)（型號：TGL-16.5M）購自上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1" 分組

WKY大鼠作為正常對照組。SHR隨機(jī)平均分為3組：模型組、厄貝沙坦組、天麻鉤藤飲組。

2.2" 試劑配制

天麻鉤藤飲液：藥物購自湖南省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院門診中藥房，成人每日用量為天麻9 g，川牛膝、鉤藤各12 g，石決明18 g，梔子、杜仲、黃芩、益母草、桑寄生、首烏藤、朱茯神各9 g，生藥總量為114 g，成人按60 kg計(jì)算，大鼠等效劑量計(jì)算為114 g/60 kg×6.3=11.97 g/kg。藥品制備：將所有中藥放入煎藥灌中浸泡1 h，武火煮沸后改文火繼續(xù)煎煮1 h，將煎煮所得藥液倒出，加入與第一次煎煮同等體積純水繼續(xù)煎煮1 h，將兩次所得藥液攪拌混合，所得混合液按照生藥含量1.197 g/mL濃縮，待中藥藥液冷卻后放入冰箱冷藏。大鼠灌胃劑量10 mL/kg。

厄貝沙坦液：厄貝沙坦片150 mg/片（杭州賽諾菲安萬特民生制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字J20030113），成人每日用量150 mg，大鼠等效劑量為15.75 mg/kg。取厄貝沙坦片用研缽捻碎后加入純水，配制成1.575 mg/mL的藥液。大鼠灌胃劑量10 mL/kg。

2.3" 動(dòng)物給藥及處理

動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，厄貝沙坦組每日灌胃10 mL/kg厄貝沙坦液，天麻鉤藤飲組每日灌胃10 mL/kg天麻鉤藤飲液，正常對照組及模型組每日灌胃等量生理鹽水。連續(xù)灌胃4周，處死前每周進(jìn)行血壓測量。4周后，丙泊酚麻醉后大鼠下腔靜脈采血收集血清，置低溫凍存。其后處死大鼠，取胸主動(dòng)脈于4%多聚甲醛中固定，或勻漿低溫凍存?zhèn)溆谩?/p>

2.4" 指標(biāo)檢測

2.4.1" 大鼠尾動(dòng)脈壓測定" 大鼠置于BP2010AUL型小動(dòng)物無創(chuàng)血壓檢測儀保定器內(nèi)，保定器溫度調(diào)整為37 ℃，血壓儀傳感器套于大鼠尾巴距尾根部約2 cm處，等待示數(shù)穩(wěn)定，無創(chuàng)血壓儀開始自動(dòng)檢測血壓，每只大鼠重復(fù)3次測試，取3次檢測平均收縮壓。藥物干預(yù)前及干預(yù)后每周測量一次大鼠尾動(dòng)脈壓。

2.4.2" 掃描電鏡" 固定好的樣本經(jīng)0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液（pnospnate buffered saline， PBS）（pH 7.4）漂洗3次，每次15 min。0.1 mol/L PBS（pH 7.4）配制1%鋨酸室溫避光固定1～2 h，0.1 mol/L PBS（pH 7.4）漂洗3次，每次15 min;組織依次入30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%乙醇中，每次15 min，乙酸異戊酯15 min進(jìn)行脫水處理;脫水處理好的樣本放入臨界點(diǎn)干燥儀內(nèi)進(jìn)行干燥;之后樣本進(jìn)行導(dǎo)電處理：樣本緊貼于導(dǎo)電碳膜雙面膠上放入離子濺射儀樣品臺(tái)上進(jìn)行噴金30 s左右;掃描電子顯微鏡下觀察采圖。

2.4.3" HE染色" 已固定好的組織樣本經(jīng)75%、85%、95% Ⅰ、95% Ⅱ、100% Ⅰ、100% Ⅱ乙醇溶液脫水各60 min，放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明各45 min，再放入石蠟Ⅰ、石蠟Ⅱ、石蠟Ⅲ透蠟各50～60 min，石蠟包埋，切片。將石蠟切片進(jìn)行烤片，然后脫蠟，水化。將已入蒸餾水后的切片放入蘇木素染液中染色3 min，鹽酸乙醇分化液分化15 s，稍水洗，藍(lán)化液返藍(lán)15 s，流水沖洗，伊紅染色3 min，流水沖洗，脫水，封片，鏡檢。此外，進(jìn)行采圖及測算，于顯微鏡下觀察并采圖，每組選取16張圓形或類圓形切片，使用軟件image pro plus 6.0測量IMT并計(jì)算IMT/LD。

2.4.4" 免疫組織化學(xué)檢測" 已固定好的組織樣本經(jīng)75%、85%、95%Ⅰ、95%Ⅱ、100%Ⅰ、100%Ⅱ乙醇溶液脫水各60 min，放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明各45 min，再放入石蠟Ⅰ、石蠟Ⅱ、石蠟Ⅲ透蠟各50～60 min，石蠟包埋，切片。將石蠟切片進(jìn)行烤片，然后脫蠟，水化。接著將切片放入切片架中，加入抗原修復(fù)液（檸檬酸緩沖液），高壓鍋加熱煮沸，放入切片煮5 min，歇5 min，再煮5 min，離開熱源自然冷卻，棄去抗原修復(fù)液;將切片用PBS淋洗;加入新鮮配制的3%過氧化氫溶液，以去除內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育10 min，PBS充分淋洗。棄掉組織多余的PBS，在玻片上滴加5%牛血清白蛋白（bovine serum albumin， BSA），37 ℃封閉30 min。棄掉組織多余的封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗;4 ℃孵育過夜。再加入辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG（H+L）（1/100），37 ℃孵育30 min，PBS充分淋洗。顯色復(fù)染DAB顯色3-5 min，在顯微鏡下掌握染色程度，PBS或自來水沖洗1 min;蘇木精復(fù)染3 min，鹽酸酒精分化，返藍(lán);自來水沖洗1 min，脫水、透明、封片、鏡檢。

2.4.5" 血漿ROS檢測" 每孔加入100 μL的血漿，加入100 μL稀釋好的ROS熒光探針。設(shè)置激發(fā)波長502 nm，發(fā)射波長530 nm檢測熒光值。

2.5" 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 27.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，定量結(jié)果采用“x±s”表示。兩組之間定量數(shù)值比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組之間定量數(shù)值比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用S-N-K法。以檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，Plt;0.05表示差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 結(jié)果

3.1" 尾動(dòng)脈壓檢測

與正常對照組比較，模型組大鼠收縮壓均顯著升高（Plt;0.05）;與模型組比較，給藥第1周起各治療組大鼠收縮壓均下降（Plt;0.05）。詳見圖1。

3.2" 掃描電鏡

掃描電鏡觀察各組大鼠胸主動(dòng)脈形態(tài)，正常對照組胸主動(dòng)脈壁結(jié)構(gòu)正常，未見動(dòng)脈管壁增生，模型組胸主動(dòng)脈壁明顯增厚。與模型組比較，各治療組胸主動(dòng)脈壁厚度均降低。詳見圖2。

3.3" HE染色

HE染色觀察各組大鼠胸主動(dòng)脈結(jié)構(gòu)，正常對照組胸主動(dòng)脈血管結(jié)構(gòu)正常，未見動(dòng)脈管壁增生;模型組胸主動(dòng)脈壁明顯增厚，單位面積細(xì)胞核數(shù)量增多;與模型組比較，各治療組胸主動(dòng)脈壁厚度降低、單位面積細(xì)胞核數(shù)量減少。詳見圖3。

3.4" 形態(tài)學(xué)指標(biāo)檢測

與正常對照組比較，模型組胸主動(dòng)脈IMT、IMT/LD增加（Plt;0.05）;與模型組比較，各治療組胸主動(dòng)脈IMT、IMT/LD下降（Plt;0.05）。詳見表1。

3.5" 免疫組織化學(xué)檢測

與正常對照組比較，模型組大鼠胸主動(dòng)脈血管壁NOX2、GRP78、CHOP蛋白表達(dá)水平上升（Plt;0.05）;與模型組比較，各治療組血管壁NOX2、GRP78、CHOP蛋白表達(dá)水平均下降（Plt;0.05）。詳見圖4。

3.6" 血漿ROS檢測

與正常對照組比較，模型組大鼠血漿中ROS含量明顯上升（Plt;0.05）;與模型組比較，各治療組ROS含量明顯下降（Plt;0.05）。詳見圖5。

4 討論

高血壓血管重塑是血管對各種刺激的復(fù)雜的動(dòng)態(tài)反應(yīng)過程，發(fā)生發(fā)展機(jī)制復(fù)雜，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能是其中重要病理環(huán)節(jié)之一。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以影響內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、增殖和血管新生能力，使血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)完整性和功能受損[8-9]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激亦能促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的凋亡與表型轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致血管壁增厚[3]。此外，在椎間盤退變中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激破壞細(xì)胞外基質(zhì)的合成和降解平衡，在血管中可能改變血管壁的結(jié)構(gòu)和力學(xué)特性[10]。上述研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能是血管重塑的促進(jìn)因素。本實(shí)驗(yàn)中，SHR血壓不斷升高，胸主動(dòng)脈組織單位細(xì)胞數(shù)增多、紊亂，管壁增生、增厚，發(fā)生了血管重塑，血管壁上GRP78及CHOP蛋白表達(dá)增加。GRP78在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時(shí)表達(dá)上調(diào)，為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)志物。CHOP為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的重要因子。GRP78及CHOP蛋白均表達(dá)上調(diào)證實(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與高血壓血管重塑的發(fā)生與發(fā)展。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激由上游的NOX2/ROS通路介導(dǎo)。NOX是廣泛存在于體內(nèi)組織和器官中的膜蛋白，是體內(nèi)ROS的主要及唯一直接來源。NOX2是首個(gè)發(fā)現(xiàn)的NOX家族蛋白，主要位于血管壁上[11]。NOX2利用亞單位NADPH作為電子供體，催化氧分子還原一個(gè)電子生成O2-，進(jìn)而催化生成H2O2、HOCL、ONOO-等ROS，造成細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)的失衡，最終導(dǎo)致氧化應(yīng)激[12-13]。NOX2催化產(chǎn)生的ROS作為信號分子，參與血管壁上內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等諸多生理病理環(huán)節(jié)的調(diào)節(jié)[14]。氧化應(yīng)激可損傷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)，干擾其正確折疊和加工，引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。過量的ROS干擾內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的二硫鍵形成，影響蛋白質(zhì)的構(gòu)象，觸發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的信號通路。氧化應(yīng)激與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相互影響，參與高血壓血管重塑[15]。此外，ROS還可能通過影響鈣離子平衡等機(jī)制，進(jìn)一步加重內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的應(yīng)激狀態(tài)[16]。綜上，NOX2/ROS通路可能介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激從而導(dǎo)致血管重塑。本實(shí)驗(yàn)中，SHR血壓升高、胸主動(dòng)脈血管重塑及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)鍵蛋白升高的同時(shí)，血管壁上NOX2表達(dá)上調(diào)，ROS含量明顯升高，表明NOX2/ROS通路與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激密切相關(guān)，NOX2/ROS通路介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能是血管重塑的發(fā)生發(fā)展機(jī)制之一。但是因?yàn)槿狈﹃P(guān)鍵蛋白NOX2的特異性抑制組作為對照，尚不能完全證實(shí)上述機(jī)制，本課題組后續(xù)擬在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中采用沉默NOX2基因等方法進(jìn)一步研究論證。

高血壓多歸屬于中醫(yī)學(xué)“眩暈”范疇，而對高血壓血管重塑無相應(yīng)病名及確切描述，被認(rèn)為是高血壓并發(fā)的脈絡(luò)病癥。肝陽上亢為高血壓患者主要病機(jī)，血管重塑者主要兼夾瘀血阻絡(luò)[6]。天麻鉤藤飲作為眩暈病要方，主要由天麻、鉤藤、石決明、梔子、黃芩、川牛膝、杜仲、益母草、桑寄生、首烏藤、朱茯神組成，共奏平肝潛陽、活血通絡(luò)之效。研究證實(shí)天麻鉤藤飲可改善陰虛陽亢證患者中醫(yī)癥候與控制血壓[17-18]，此外尚可調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能[7]。但天麻鉤藤飲在高血壓及高血壓血管重塑中的具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)中，天麻鉤藤飲能降低SHR的血壓，同時(shí)下調(diào)胸主動(dòng)脈管壁上NOX2表達(dá)，使ROS產(chǎn)生減少，繼而降低血管壁上內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)鍵蛋白CHOP與GRP78的表達(dá)，從而抑制血管重塑。上述結(jié)果表明天麻鉤藤飲可能通過抑制NOX2/ROS通路介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，達(dá)到逆轉(zhuǎn)高血壓血管重塑的作用。

綜上所述，天麻鉤藤飲降壓的同時(shí)能抑制血管重塑，可能是通過抑制NOX2/ROS通路介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激實(shí)現(xiàn)的，為高血壓血管重塑機(jī)制的研究和天麻鉤藤飲作用靶點(diǎn)的探討提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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〔基金項(xiàng)目〕國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（81973920）;湖南省中醫(yī)藥研究院一般課題（202025）;湖南省教育廳科學(xué)研究青年項(xiàng)目（21B0378）;湖南省自然科學(xué)基金-醫(yī)衛(wèi)行業(yè)聯(lián)合基金項(xiàng)目（2024JJ9466）;湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（E2022007）;湖南省教育廳科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目（22A0260）;湖南省研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目（CX20220821，CX20230836，CX20230827）;湖南中醫(yī)藥大學(xué)研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目（2023CX111，20213747）;長沙市2022年度指導(dǎo)性科技計(jì)劃項(xiàng)目（kzd22005）;湖南省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目（20A385）。

〔通信作者〕*張國民，男，博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，E-mail：834095773@qq.com。