【關鍵詞】苓桂術甘湯；miR-140-5p/TLR4/NF-κB；潰瘍性結腸炎；腸黏膜屏障；免疫平衡

【中圖分類號】R574.1 【文獻標志碼】A 【收稿日期】2024-01-03

潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）是常見的一種炎癥性腸道疾病，腹瀉、腹痛、膿血便、黏液便、體重減輕等是患者主要臨床癥狀，有時會伴有關節(jié)炎、肝膽管病等并發(fā)癥，患者病情遷延且易復發(fā)，是我國消化內(nèi)科常見的難治疾病[1-2]。UC作為一種腸道炎癥性疾病，Treg/Th17免疫平衡失衡引發(fā)的免疫炎癥在其發(fā)病過程中起到關鍵作用，通過調(diào)節(jié)Treg/Th17平衡來進行抗炎處理，可有效改善UC大鼠模型結腸炎癥狀[3]。miR-140-5p 是可調(diào)控炎癥反應的一種RNA分子，可通過抑制炎癥而減輕莢膜梭菌β2 毒素誘導的豬腸上皮細胞損傷[4]，Toll 樣受體4（toll like receptor 4，TLR4）是miR-140-5p的常見下游靶點，miR-140-5p可通過下調(diào)TLR4而抑制骨關節(jié)炎軟骨細胞中炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生[5]，而有研究表明TLR4/核轉錄因子-κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）信號與UC的發(fā)生發(fā)展關系密切，抑制其激活可通過抗凋亡、抗氧化和抗炎而減輕UC大鼠結腸組織損傷[6]，并可促使Treg細胞分化及其細胞因子的產(chǎn)生，同時抑制Th17細胞分化及其細胞因子的產(chǎn)生，進而通過恢復Treg/Th17細胞之間的免疫平衡、抑制免疫炎癥和重塑腸道微生物群而減輕UC小鼠結腸炎癥狀[7]，由此可知調(diào)控miR-140-5p/TLR4/NF-κB信號可能是治療UC的有效措施。苓桂術甘湯是具有健脾利水和溫陽化飲作用的經(jīng)典名方，現(xiàn)代藥理學研究表明該方可起到明顯免疫調(diào)控、抗炎與細胞保護作用[8]，可上調(diào)急性心肌梗死大鼠腸組織緊密連接蛋白表達并降低炎癥因子表達，進而通過抑制炎癥而減輕其腸黏膜屏障損傷[9]，另外苓桂術甘湯還可阻斷TLR4/Myd88/NF-κB信號傳導并抑制心力衰竭大鼠炎癥[10]，因而推測苓桂術甘湯可能通過調(diào)控miR-140-5p/TLR4/NF-κB信號介導UC 的發(fā)生發(fā)展過程，本文通過建立UC 大鼠模型，探究苓桂術甘湯調(diào)控miR-140-5p/TLR4/NF-κB信號通路對其腸黏膜屏障及免疫平衡的影響。

1材料

1.1 動物

SD雄性大鼠（體質(zhì)量190～220 g，6周齡左右，SPF級），購于遼寧長生生物技術有限公司，生產(chǎn)許可SCXK（遼）2020-0001。在動物飼養(yǎng)籠房中適應喂養(yǎng)，每籠不超過5只，溫度23～25 ℃，濕度55%～65%，每日早晨更換新飼料并保證飼料、干凈飲用水充足，保證12 h/12 h明暗循環(huán)照明。

1.2 主要試劑及儀器

苓桂術甘湯（茯苓、桂枝、甘草、白術），各組成藥材飲片購于安徽普仁中藥飲片有限公司；5%的2，4，6-三硝基苯磺酸（2，4，6-trinitrobenzenesulfonic acid solution，TNBS）水溶液（批號1029065），購于北京中科儀友化工技術研究；一步法反轉錄熒光定量PCR試劑盒、miR-140-5p antagomir及其陰性對照、miR-140-5p、TLR4、β-actin與U6引物，購于上海生工生物工程股份有限公司；總RNA提取試劑（Trizol）、大鼠白細胞介素（interleukin，IL）-6、IL-17、IL-10與轉化生長因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒，購于上海愛必信生物科技有限公司；大鼠外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）分離液，購于蘇州匯智和源生物技術有限公司；FITC標記的抗大鼠CD4一抗（CD4-FITC）、PE標記的抗大鼠IL-17A一抗（IL-17A-PE）、HRP 標記的小鼠抗兔二抗、PE 標記的抗大鼠Foxp3 一抗（Foxp3-PE）、兔源抗大鼠TLR4、p-NF-κB p65、NF-κB p65與β-actin一抗，購于英國Abcam公司等。

T 型超薄切片機、SM2010 R 切片機，購于德國Leica 公司；JEM-1400Flash透射電子顯微鏡，購于日本電子株式會社；ASOOZ酶聯(lián)免疫檢測儀，購于瑞士Tecan公司；CytoFLEX流式細胞儀，購于上海貝克曼庫爾特國際貿(mào)易有限公司；QQ1000 熒光定量PCR 儀，購于上海啟前電子科技有限公司；DYCZ-24DN垂直板電泳儀、DYY-7C電泳儀電源、WD-9413B型凝膠成像分析系統(tǒng)、DYCZ-TRANS2型轉印電泳儀，購于北京市六一儀器廠等。

1.3 方法

1.3.1 建立UC大鼠模型及分組干預 參照文獻[11]用TNBS誘導建立UC 模型：取SD 大鼠禁食但自由飲水24 h，以40mg/kg的戊巴比妥鈉進行麻醉，于結腸內(nèi)（深入肛門約8 cm）注入4 mL/kg的5%TNBS+50%乙醇混合液，倒置大鼠并捏緊肛門，5 min后于頭低足高位放置，待其自然蘇醒后放回飼養(yǎng)籠中繼續(xù)飼養(yǎng)3 d，若大鼠出現(xiàn)腹瀉、肛周污穢、稀便、便血等癥狀，表明UC模型建立成功，用隨機數(shù)表法隨機分為5組：模型組、苓桂術甘湯低劑量組、苓桂術甘湯高劑量組、NCmiR-140-5p 組、苓桂術甘湯高劑量組+miR-140-5p an?tagomir組，每組10只，另取10只大鼠以同樣方法向結腸內(nèi)注入等劑量生理鹽水+50%乙醇混合液，設為對照組。

取茯苓、桂枝、甘草、白術中藥飲片以4∶3∶3∶2的比例配比，加入10倍量的水浸泡、煮沸、過濾，然后再次加水重復1 次，將2 次的濾液進行濃縮，并配制為生藥含量為0.42、0.84 g/mL的苓桂術甘湯液備用。各組大鼠于造模成功后進行分組干預：苓桂術甘湯低劑量（4.2 g/kg）組、苓桂術甘湯高劑量（8.4 g/kg）組大鼠分別灌胃0.42、0.84 g/mL的苓桂術甘湯液10 mL/kg[9]，同時尾靜脈注射與苓桂術甘湯高劑量組+miR-140-5p antagomir 組等劑量的生理鹽水；NC-miR-140-5p組大鼠灌胃10 mL/kg的生理鹽水，同時尾靜脈注射miR-140-5p陰性對照（溶于生理鹽水，劑量參考說明書）；苓桂術甘湯高劑量組+miR-140-5p antagomir 組大鼠灌胃0.84 g/mL的苓桂術甘湯液10 mL/kg，同時尾靜脈注射miR-140-5p antagomir（溶于生理鹽水，劑量參考說明書）；模型組、對照組大鼠灌胃10mL/kg的生理鹽水，同時尾靜脈注射與苓桂術甘湯高劑量組+miR-140-5p antagomir組等劑量的生理鹽水，灌胃時每天1次，尾靜脈注射是每周2次，各組大鼠均在干預3周后采集標本做后續(xù)檢測。

1.3.2 檢測大鼠結腸黏膜損傷指數(shù)（colon mucosa damage in?dex，CMDI）、結腸長度并采集標本 3周干預完成后24 h以乙醚麻醉各組大鼠，切開腹腔后自腹主動脈采集大鼠外周血約2.5 mL，與等體積PBMC 分離液混勻后進行離心分離出PBMC，洗滌計數(shù)后將其細胞濃度調(diào)整為1×107個/mL備用；再次采集腹主動脈學約1 mL，4 ℃、2 000 r/min、12 min離心后將上清（即血清）存在-20 ℃冰柜備用。

取大鼠肛門到回盲部的結腸，測量其長度后評測CMDI，評測標準參考文獻[12]：結腸黏膜無水腫、充血、潰瘍等損傷癥狀，0分；結腸黏膜水腫、充血但未發(fā)生潰瘍，1分；結腸黏膜水腫、充血并出現(xiàn)輕度糜爛，但未發(fā)生潰瘍，2分；結腸黏膜水腫、充血并出現(xiàn)中度糜爛，且發(fā)生單個潰瘍，3分；結腸黏膜水腫、充血并出現(xiàn)高度糜爛，且發(fā)生多處潰瘍，4分；結腸黏膜水腫、充血并出現(xiàn)重度糜爛，且發(fā)生gt;1 cm的潰瘍，5分。

取CMDI評測后的各組大鼠結腸，剪下距離肛門約2 cm的結腸0.5 cm，在4%戊二醛中固定后進行梯度脫水、包埋、固化，用超薄切片機切為超薄片備用。再次剪下一段約5cm的結腸，取黏膜組織分為2份，一份加入Trizol試劑，于研缽內(nèi)研磨后提取其中總RNA，測出其濃度后存在-20 ℃冰柜備用；另一份結腸黏膜組織加入RAPI試劑，冰水浴中高速勻漿后提取其中總蛋白，用BCA法測出其濃度后存在-20 ℃冰柜備用。

1.3.3 透射電鏡觀察各組大鼠結腸黏膜屏障超微結構 取1.4中的結腸黏膜組織超薄片，以醋酸鈾和枸櫞酸鉛進行雙染，用透射電鏡對結腸黏膜屏障超微結構進行觀察和拍照。

1.3.4 流式細胞實驗檢測各組大鼠外周血Treg、Th17細胞比例及Treg/Th17比值 取1.4中的PBMC細胞懸液0.1 mL，以CD4-FITC 抗體避光孵育后洗滌，用PBS 重懸細胞后以Foxp3-PE（或IL-17A-PE）抗體避光孵育后洗滌，對照管加入等量同型對照抗體，然后以4%多聚甲醛0.5 mL進行重懸后上機，用流式細胞儀檢測外周血Treg、Th17細胞比例并計算Treg/Th17比值。

1.3.5 ELISA檢測大鼠血清免疫炎癥相關因子水平 取1.4中的血清用冰水浴解凍，采用ELISA試劑盒測定其中IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β1水平，具體檢測方法如試劑盒說明書中所示。

1.3.6 實時熒光PCR 檢測大鼠結腸黏膜組織miR-140-5p與TLR4 表達 取1.4 中的結腸黏膜組織總RNA，與miR-140-5p或TLR4、β-actin、U6引物、雙蒸水、酶預混液混勻制成20 μL的反應體系，按照一步法反轉錄熒光定量PCR試劑盒說明書中方法進行PCR擴增，40個循環(huán)后得到各組miR-140-5p或TLR4、β-actin、U6基因循環(huán)閾值，以2-ΔΔCt 算法分析量化各組miR-140-5p、TLR4相對表達，miR-140-5p以U6為內(nèi)參對照，而TLR4 以β-actin 為內(nèi)參對照，引物序列見表1。

1.3.7 免疫印跡法檢測大鼠結腸黏膜組織miR-140-5p/TLR4/NF-κB信號相關蛋白表達 取1.4中的結腸黏膜組織總蛋白樣品，加熱變性后每組各取20 μg，上樣行電泳分離、濕式轉移，封閉蛋白非特異位點后孵育兔源抗大鼠TLR4或p-NF-κB p65、NF-κB p65、β-actin一抗，洗膜后用HRP標記的小鼠抗兔二抗行抗原抗體反應，用化學試劑顯影后拍照，用Image pro軟件定量各組蛋白灰度值，用內(nèi)參β-actin作對照量化各組TLR4或p-NF-κB p65、NF-κB p65相對表達，并計算p-NF-κB p65/NF-κB p65比值。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用統(tǒng)計SPSS 24.0 軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析。以均數(shù)±標準差（xˉ ± s）進行表示，多組間的差異比較進行單因素方差分析，兩兩之間進一步差異比較行LSD-t 檢驗。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 各組大鼠CMDI評分與結腸長度的檢測結果

與對照組比較，模型組大鼠CMDI 明顯升高（Plt;0.0001），結腸長度明顯降低（Plt;0.000 1）。與模型組比較，苓桂術甘湯低劑量組、苓桂術甘湯高劑量組大鼠CMDI均降低（Plt;0.000 1、Plt;0.000 1），結腸長度均升高（Plt;0.05）；NC-miR-140-5p組大鼠CMDI、結腸長度無明顯變化（CMDI：P=0.9986；結腸長度：P=0.999 6）。與苓桂術甘湯低劑量組比較，苓桂術甘湯高劑量組大鼠CMDI降低（Plt;0.000 1），結腸長度升高（Plt;0.000 1）。與苓桂術甘湯高劑量組比較，苓桂術甘湯高劑量組+miR-140-5p antagomir 組大鼠CMDI 升高（Plt;0.000 1），結腸長度降低（Plt;0.000 1）。見表2。

2.2 各組大鼠腸黏膜屏障超微結構的檢測結果

對照組大鼠結腸黏膜屏障超微結構完好：上皮細胞間緊密結構正常且細胞排列整齊，表面微絨毛結構完整、清晰；模型組大鼠結腸黏膜屏障超微結構損傷嚴重：上皮細胞間緊密結構破損、不完整、不連續(xù)，表面微絨毛腫脹稀疏；與模型組比較，苓桂術甘湯低劑量組、苓桂術甘湯高劑量組大鼠結腸黏膜屏障超微結構損傷均減輕且苓桂術甘湯高劑量組減輕程度更大，NC-miR-140-5p組大鼠結腸黏膜屏障超微結構損傷無明顯變化；與苓桂術甘湯高劑量組比較，苓桂術甘湯高劑量組+miR-140-5p antagomir組大鼠結腸黏膜屏障超微結構損傷加重。見圖1。

2.3 各組大鼠外周血Treg/Th17免疫平衡的檢測結果

與對照組比較，模型組大鼠Th17細胞比例明顯升高（Plt;0.000 1），Treg細胞比例、Treg/Th17比值明顯降低（Treg細胞比例：Plt;0.000 1；Treg/Th17 比值：Plt;0.000 1）。與模型組比較，苓桂術甘湯低劑量組、苓桂術甘湯高劑量組大鼠Th17細胞比例均降低（Plt;0.000 1、Plt;0.000 1），Treg細胞比例、Treg/Th17比值均升高（Treg細胞比例：Plt;0.000 1、Plt;0.000 1；Treg/Th17 比值：P=0.000 6、Plt;0.000 1）；NC-miR-140-5p 組大鼠Th17 細胞比例、Treg 細胞比例、Treg/Th17 比值無顯著變化（Th17細胞比例：P=0.999 9；Treg細胞比例：P=0.999 7；Treg/Th17比值：Pgt;0.999 9）。與苓桂術甘湯低劑量組比較，苓桂術甘湯高劑量組大鼠Th17細胞比例降低（Plt;0.000 1），Treg細胞比例、Treg/Th17 比值升高（Treg 細胞比例：Plt;0.000 1；Treg/Th17比值：Plt;0.000 1）。與苓桂術甘湯高劑量組比較，苓桂術甘湯高劑量組+miR-140-5p antagomir組大鼠Th17細胞比例升高（Plt;0.000 1），Treg細胞比例、Treg/Th17比值降低（Treg細胞比例：Plt;0.000 1；Treg/Th17比值：Plt;0.000 1）。見圖2、表3。

2.4 各組大鼠血清免疫炎癥相關因子水平的檢測結果

與對照組比較，模型組大鼠血清IL-6、IL-17水平明顯升高（IL-6：Plt;0.000 1；IL-17：Plt;0.000 1），IL-10、TGF-β1水平明顯降低（IL-10：Plt;0.000 1；TGF-β1：Plt;0.000 1）。與模型組比較，苓桂術甘湯低劑量組、苓桂術甘湯高劑量組大鼠血清IL-6、IL-17 水平均降低（IL-6：Plt;0.000 1、Plt;0.000 1；IL-17：Plt;0.000 1、Plt;0.000 1），IL-10、TGF-β1 水平均升高（IL-10：Plt;0.000 1、Plt;0.0001；TGF-β1：Plt;0.000 1、Plt;0.000 1）；NC-miR-140-5p組大鼠血清IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β1水平無明顯變化（IL-6：P=0.999 0；IL-17：P=0.922 4；IL-10：P=0.995 9；TGF-β1：Pgt;0.999 9）。與苓桂術甘湯低劑量組比較，苓桂術甘湯高劑量組大鼠血清IL-6、IL-17 水平降低（IL-6：Plt;0.000 1；IL-17：Plt;0.000 1），IL-10、TGF-β1水平升高（IL-10：Plt;0.000 1；TGF-β1：Plt;0.000 1）。與苓桂術甘湯高劑量組比較，苓桂術甘湯高劑量組+miR-140-5p antagomir組大鼠血清IL-6、IL-17水平升高（IL-6：Plt;0.000 1；IL-17：Plt;0.000 1），IL-10、TGF-β1 水平降低（IL-10：Plt;0.000 1；TGF-β1：Plt;0.000 1）。見表4。

2.5 各組大鼠結腸黏膜組織緊密連接蛋白表達的檢測結果

與對照組比較，模型組大鼠結腸黏膜組織claudin-1、claudin-4蛋白表達顯著降低（claudin-1：Plt;0.000 1；claudin-4：Plt;0.000 1）。與模型組比較，苓桂術甘湯低劑量組、苓桂術甘湯高劑量組大鼠結腸黏膜組織claudin-1、claudin-4蛋白表達均升高（claudin-1：Plt;0.000 1、Plt;0.000 1；claudin-4：Plt;0.000 1、Plt;0.000 1）；NC-miR-140-5p組大鼠結腸黏膜組織claudin-1、claudin-4蛋白表達無顯著變化（claudin-1：Pgt;0.999 9；claudin-4：P=0.999 6）。與苓桂術甘湯低劑量組比較，苓桂術甘湯高劑量組大鼠結腸黏膜組織claudin-1、clau?din-4 蛋白表達升高（claudin-1：Plt;0.000 1；claudin-4：Plt;0.000 1）。與苓桂術甘湯高劑量組比較，苓桂術甘湯高劑量組+miR-140-5p antagomir 組大鼠結腸黏膜組織claudin-1、claudin-4蛋白表達降低（claudin-1：Plt;0.000 1；claudin-4：Plt;0.000 1）。見圖3、表5。

2.6 各組大鼠結腸黏膜組織miR-140-5p/TLR4/NF-κB 信號相關因子表達的檢測結果

與對照組比較，模型組大鼠結腸黏膜組織TLR4 mRNA與蛋白表達、p-NF-κB p65/NF-κB p65顯著升高（TLR4 mRNA：Plt;0.000 1；TLR4蛋白：Plt;0.000 1；p-NF-κB p65/NF-κB p65：Plt;0.000 1），miR-140-5p表達顯著降低（Plt;0.000 1）。與模型組比較，苓桂術甘湯低劑量組、苓桂術甘湯高劑量組大鼠結腸黏膜組織TLR4 mRNA與蛋白表達、p-NF-κB p65/NF-κB p65均降低（TLR4 mRNA：Plt;0.000 1、Plt;0.000 1；TLR4蛋白：Plt;0.000 1、Plt;0.0001；p-NF-κB p65/NF-κB p65：Plt;0.0001、Plt;0.000 1），miR-140-5p表達均升高（Plt;0.000 1、Plt;0.0001）；NC-miR-140-5p組大鼠結腸黏膜組織TLR4 mRNA與蛋白表達、p-NF-κB p65/NF-κB p65、miR-140-5p表達無顯著變化（TLR4 mRNA：P=0.999 8；TLR4蛋白：P=0.995 9；p-NF-κB p65/NF-κB p65：P=0.999 2；miR-140-5p：Pgt;0.999 9）。與苓桂術甘湯低劑量組比較，苓桂術甘湯高劑量組大鼠結腸黏膜組織TLR4 mRNA與蛋白表達、p-NF-κB p65/NF-κB p65降低（TLR4 mRNA：Plt;0.000 1；TLR4 蛋白：Plt;0.000 1；p-NF-κB p65/NF-κB p65：Plt;0.000 1），miR-140-5p 表達升高（Plt;0.000 1）。與苓桂術甘湯高劑量組比較，苓桂術甘湯高劑量組+miR-140-5p antagomir 組大鼠結腸黏膜組織TLR4mRNA 與蛋白表達、p-NF-κB p65/NF-κB p65 升高（TLR4mRNA：Plt;0.000 1；TLR4蛋白：Plt;0.000 1；p-NF-κB p65/NF-κB p65：Plt;0.000 1），miR-140-5p表達降低（Plt;0.000 1）。見圖4，表6。

3 討論

隨著飲食結構和生活方式的改變，我國UC患病人數(shù)逐年提升，已成為亟需解決的臨床問題，如今主要依賴藥物控制UC癥狀，皮質(zhì)類固醇類激素、水楊酸類藥物、免疫抑制劑等是常用藥物，但會引發(fā)腹瀉、發(fā)燒、皮疹、腎損傷、抽筋等諸多毒副作用，嚴重限制了其臨床療效，因而需探尋無毒副作用的安全治療方法[13-14]。本文采用TNBS誘導建立UC模型，結果顯示，大鼠出現(xiàn)腹瀉、肛周污穢、稀便、便血等癥狀，其CMDI升高而結腸長度降低，揭示UC模型建立成功。

中醫(yī)學認為脾胃虛弱、運化失司、濕熱蘊結是UC 的主要病機，治療應以溫陽健脾、清熱燥濕為主，苓桂術甘湯是張仲景所著《傷寒雜病論》中的經(jīng)典方劑，由茯苓、桂枝、白術、甘草組成，茯苓作為君藥健脾、利水、化飲，桂枝作為臣藥降逆平?jīng)_、溫陽化氣，白術作為佐藥健脾燥濕，甘草調(diào)和諸藥使其共奏健脾利水、溫陽燥濕之功，研究顯示苓桂術甘湯可顯著調(diào)節(jié)心衰小鼠腸道菌群結構，修復其腸黏膜屏障[15]，而加味苓桂術甘湯能保護腎纖維化大鼠腸黏膜[16]，因而推測苓桂術甘湯可能對UC具有治療作用。本文結果顯示，以苓桂術甘湯干預治療UC大鼠，可減輕大鼠結腸黏膜屏障超微結構損傷，降低其CMDI、Th17 細胞比例、血清IL-6 與IL-17 水平，升高其結腸長度、Treg 細胞比例、Treg/Th17 比值、血清IL-10與TGF-β1水平、結腸黏膜組織clau?din-1、claudin-4蛋白表達，表明苓桂術甘湯可促使Treg細胞分化及其抗炎細胞因子IL-10與TGF-β1產(chǎn)生釋放，同時抑制Th17細胞分化及其促炎細胞因子IL-6與IL-17產(chǎn)生釋放，繼而減輕Treg/Th17免疫失衡引發(fā)的免疫炎癥，揭示苓桂術甘湯可通過調(diào)控Treg/Th17免疫平衡并促使其向Treg偏移來抑制免疫炎癥，進而減輕結腸黏膜屏障損傷，最終改善其結腸炎癥狀。

miR-140-5p/TLR4/NF-κB是調(diào)控氧化應激、細胞凋亡、炎癥及免疫穩(wěn)態(tài)等過程的重要信號，上調(diào)miR-140-5p可抑制TLR4/NF-κB信號激活，進而通過抑制炎癥因子分泌而減輕多溴二苯醚-47誘導的草魚腎細胞損傷[17]，還可通過抑制細胞凋亡與炎癥而減輕糖尿病誘導的大鼠腎損傷[18]，阻斷TLR4/NF-κB信號傳導可通過抑制氧化應激、炎癥和細胞凋亡而保護UC大鼠腸上皮屏障，重塑紊亂的腸道微生物群和Treg/Th17 免疫平衡，進而緩解其結腸炎癥狀[7，19-20]。本文結果顯示，UC 大鼠結腸黏膜組織miR-140-5p 表達相比對照組顯著降低而TLR4mRNA、蛋白表達與p-NF-κB p65/NF-κB p65顯著升高，以苓桂術甘湯干預治療可逆轉UC大鼠上述因子變化趨勢，表明miR-140-5p/TLR4/NF-κB信號參與介導苓桂術甘湯對UC大鼠腸黏膜屏障功能及免疫平衡的改善作用；以苓桂術甘湯干預治療UC大鼠的同時下調(diào)miR-140-5p表達，可減弱苓桂術甘湯單獨干預對UC大鼠Treg細胞分化及其抗炎細胞因子IL-10與TGF-β1產(chǎn)生釋放的促進作用，同時減弱其對UC大鼠Th17細胞分化及其促炎細胞因子IL-6與IL-17產(chǎn)生釋放的抑制作用，最終削弱苓桂術甘湯頓渡干預對UC 大鼠免疫炎癥的減輕作用，揭示苓桂術甘湯可通過促使Treg/Th17免疫平衡向Treg偏移來抑制Treg/Th17免疫失衡引發(fā)的免疫炎癥；另外以苓桂術甘湯干預治療UC大鼠的同時下調(diào)miR-140-5p表達，可減弱苓桂術甘湯單獨干預對UC大鼠結腸黏膜組織TLR4蛋白表達及NF-κB磷酸化的抑制作用，降低了TLR4/NF-κB信號活性，并拮抗苓桂術甘湯單獨干預對UC大鼠免疫炎癥與結腸黏膜屏障損傷的減輕作用，最終逆轉其對UC大鼠結腸炎癥狀的緩解作用，揭示苓桂術甘湯改善UC大鼠免疫平衡穩(wěn)態(tài)并減輕其腸黏膜屏障損傷可能是通過上調(diào)miR-140-5p 來抑制TLR4/NF-κB信號激活實現(xiàn)的。

綜上所述，苓桂術甘湯可通過上調(diào)miR-140-5p而降低TLR4蛋白表達及NF-κB磷酸化，進而調(diào)控UC 大鼠Treg/Th17 免疫平衡并促使其向Treg 偏移，減輕其免疫炎癥及結腸黏膜屏障損傷，最終緩解大鼠結腸炎癥狀，阻斷miR-140-5p/TLR4/NF-κB信號傳導可能是其治療UC大鼠的藥理機制，本文為UC的臨床治療提供了新的藥物候選，有助于其臨床治療技術的改進和患者預后的改善。