[摘要]目的：探討增生性瘢痕組織中Periostin的表達，評估光動力治療瘢痕有效性和安全性。方法：選擇2021年1月-2022年12月于筆者醫(yī)院皮膚科接受治療的84例增生性瘢痕患者為研究對象，收集手術(shù)或植皮修剪時棄用瘢痕和正常皮膚組織。采用熒光定量PCR檢測Periostin的mRNA表達水平；采用免疫組化檢測Periostin陽性表達；Western blot檢測Periostin的蛋白質(zhì)表達水平。根據(jù)治療方式將患者分為對照組（n=42）和觀察組（n=42），對照組接受糖皮質(zhì)激素皮損內(nèi)注射治療，觀察組接受光動力療法治療。評估兩組臨床治療效果、溫哥華瘢痕評分（VSS）、復(fù)發(fā)率以及不良反應(yīng)狀況。結(jié)果：與正常組織相比，增生性瘢痕組織中Periostin的mRNA、蛋白質(zhì)表達水平和陽性表達綜合評分均明顯升高（P＜0.05）。與對照組相比，觀察組治療后VSS評分和Periostin mRNA、蛋白質(zhì)表達水平均明顯降低（P＜0.05）；對照組和觀察組臨床總有效率分別為88.10%和97.61%，觀察組臨床總有效率明顯高于對照組（P＜0.05）；對照組和觀察組臨床復(fù)發(fā)率分別為4.76%和0.00%，不良反應(yīng)率分別為7.14%和4.76%，兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：Periostin在增生性瘢痕組織中呈異常高表達。光動力治療增生性瘢痕具有更好的效果，且復(fù)發(fā)率和不良反應(yīng)率低，其可能通過下調(diào)Periostin表達來抑制瘢痕形成，值得臨床上推廣應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞]增生性瘢痕；骨膜蛋白；表達；光動力；治療效果

[中圖分類號]R758.73" " [文獻標志碼]A" " [文章編號]1008-6455（2024）11-0027-05

Effect of Photodynamic Therapy on Hypertrophic Scars and Its Impact on Periostin Expression

LIU Zhongbo， ZHAO Jingjie， JIANG Jian， LIU Yu， PAN Jiaoni， TONG Xin

（ Department of Burn and Plastic Surgery， General Hospital of Northern Theater Command， Shenyang 110016，

Liaoning， China ）

Abstract： Objective" This study was to investigate the expression of Periostin in proliferative scar tissue and evaluate the efficacy and safety of photodynamic therapy for scars. Methods" A total of 84 patients with proliferative scars treated at the dermatology department of the author's hospital from January 2021 to December 2022 were selected for this study. Discarded scar tissue and normal skin samples were collected during surgery or skin grafting. Fluorescence quantitative PCR was employed to detect the mRNA expression levels of Periostin; immunohistochemistry was employed to assess positive expression of Periostin; and Western blotting was adopted to measure the protein expression levels of Periostin. Based on the treatment methodology， patients were divided into a control group （n=42） and an observation group （n=42）. The control group received intralesional corticosteroid injection therapy， while the observation group underwent photodynamic therapy. Clinical treatment outcomes， Vancouver scar scale （VSS） scores， recurrence rates， and adverse reaction conditions were evaluated for both groups. Results" Compared to normal tissue， the mRNA and protein expression levels of Periostin， as well as the comprehensive positive expression score， were markedly elevated in proliferative scar tissue （P＜0.05）. After treatment， the VSS scores and Periostin mRNA and protein expression levels in the observation group were drastically reduced compared to the control group （P＜0.05）. The overall clinical effective rates were 88.10% in the control group and 97.61% in the observation group， with the observation group showing a considerably higher effective rate （P＜0.05）. The clinical recurrence rates were 4.76% for the control group and 0.00% for the observation group， while the adverse reaction rates were 7.14% and 4.76%， respectively， with no statistically significant difference between the two groups （P＞0.05）. Conclusion" Periostin is abnormally highly expressed in proliferative scar tissue. Photodynamic therapy for proliferative scars demonstrates superior efficacy， with lower recurrence and adverse reaction rates， potentially inhibiting scar formation by downregulating Periostin expression. This approach is worthy of clinical promotion and application.

Key words： proliferative scar; Periostin; expression; photodynamic therapy; therapeutic efficacy

瘢痕是由于組織損傷或創(chuàng)傷引起的愈合過程中膠原蛋白的重新排列而形成的結(jié)締組織。瘢痕的性質(zhì)和外觀可以因個體差異、創(chuàng)傷類型和愈合過程中的因素而異，通常分為幾個亞型，包括肥厚型、萎縮型和息肉型，統(tǒng)稱為增生性瘢痕（Hypertrophic scar，HS）[1]。增生性瘢痕是組織創(chuàng)傷愈合過程的不完全替代，是創(chuàng)傷愈合中常見的并發(fā)癥[2]。過度生成的增生性瘢痕已經(jīng)顯著擾亂了患者的平常生活和工作，成為外科修復(fù)治療中備受關(guān)注的難題。增生性瘢痕的發(fā)病機制尚未完全清楚，但Periostin在其中扮演重要角色[3]。Periostin又稱成骨細胞特異性因子2（OSF-2），是一種細胞外基質(zhì)蛋白，其在創(chuàng)傷愈合過程中通過促進細胞遷移、增殖和血管生成等作用發(fā)揮重要功能[4-5]。近年來的研究表明，Periostin在多種組織創(chuàng)傷后表達水平升高，參與了纖維化反應(yīng)的調(diào)控[6-7]。此外，針對Periostin基因的擴增研究也日益受到關(guān)注。通過深入探究Periostin基因的功能及其在增生性瘢痕的表達，有望為開發(fā)增生性瘢痕針對性治療策略提供重要依據(jù)。

治療增生性瘢痕的方法包括手術(shù)治療、藥物治療、激光融解治療、冷凍療法及物理治療等。其中，手術(shù)治療是一種常見方式，但可能導(dǎo)致復(fù)發(fā)及嚴重后遺癥[8]。光動力療法是一種利用特定波長的光與光敏劑相互作用，從而引發(fā)生物體組織中光化學(xué)反應(yīng)的治療方法[9]。在治療增生性瘢痕方面，光動力療法已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注和研究。光動力療法可以有效減輕增生性瘢痕的癥狀，包括減少瘢痕組織的體積、改善瘢痕的顏色和質(zhì)地等。同時，光動力療法還可以減輕瘢痕引起的疼痛和瘙癢，提高患者的生活質(zhì)量[10-11]。光動力治療在治療增生性瘢痕過程中可能會引起一些局部反應(yīng)和副作用，如紅腫、瘙癢、燒灼感等不適癥狀。此外，對于某些光敏劑過敏或者治療不當(dāng)可能導(dǎo)致皮膚炎癥或色素沉著等不良反應(yīng)。雖然光動力治療在短期內(nèi)可能表現(xiàn)出一定的療效，但其長期治療效果和穩(wěn)定性尚待進一步的臨床驗證和研究。尤其是對于瘢痕的復(fù)發(fā)和再生長情況，需要更長期的隨訪和觀察。因此，本文探究增生性瘢痕患者組織中Periostin的mRNA和蛋白表達水平，評估光動力療法在增生性瘢痕治療中的應(yīng)用效果。

1" 資料和方法

1.1 一般資料：選擇2021年1月-2022年12月于筆者醫(yī)院皮膚科接受治療的84例增生性瘢痕患者為研究對象，根據(jù)治療方式分為對照組和觀察組，每組42例。對照組：男22例，女20例；年齡（28.1±4.5）歲；病程（1.9±0.6）年；面積（2.2±0.4）cm2；面頸處15例，胸背處10例，腰腹處9例，四肢處8例。觀察組：男24例，女18例；年齡（27.8±4.2）歲；病程（1.9±0.7）年；面積（2.1±0.7）cm2；面頸處14例，胸背處12例，腰腹處10例，四肢處6例。兩組患者基本資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。研究通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批。

1.2 納入標準：①符合Mohel標準[9]及《現(xiàn)代瘢痕學(xué)》中的增生性瘢痕診斷標準；②瘢痕病程≥6個月；③入院前半年內(nèi)未接受過其他治療；④患者及其家屬簽署知情同意書。

1.3 排除標準：①合并肝、腎等主要臟器功能失調(diào)；②合并高血壓、甲狀腺功能異常等基礎(chǔ)性疾??；③合并惡性腫瘤；④連續(xù)使用糖皮質(zhì)激素≥3個月；⑤妊娠、哺乳期女性或備孕期育齡女性；⑥合并精神類疾病；⑦存在感染性或免疫系統(tǒng)疾病；⑧對糖皮質(zhì)激素過敏或患有激素依賴性皮膚病。

1.4 檢測方法

1.4.1 Periostin mRNA水平檢測：收集所有患者美容手術(shù)或者植皮修剪時切除的增生性瘢痕及鄰近的正常皮膚組織，Trizol試劑提取瘢痕組織和正常皮膚組織中總RNA，檢測RNA濃度和純度。根據(jù)PrimeScript? FAST RT reagent Kit with gDNA Eraser試劑盒（上海金畔生物科技有限公司）說明書逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。根據(jù)TB Green? Premix Ex Taq? Ⅱ（Tli RNaseH Plus），Bulk（北京寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司，中國）說明書，以cDNA為模板，進行熒光定量PCR檢測。由上海生工生物工程有限公司設(shè)計并合成Periostin定量引物，上游：5＇-CTCATAGTCGTATCAGGGGTC-3＇，下游：5＇-ACACAGTCGTTTTCTGTCCAC-3＇。同時以GAPDH為內(nèi)參，上游：5＇-CTCACCGGATGCACCAATGTT-3＇，下游：5＇-CGCGTTGCTCACAATGTTCAT-3＇。設(shè)定熒光定量PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5 min，接著在95℃進行變性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，總共循環(huán)40次。72℃延伸5 min。根據(jù)2-△△Ct法計算Periostin mRNA相對表達水平。

1.4.2 蛋白免疫組化法檢測Periostin蛋白表達：將收集到增生性瘢痕及鄰近的正常皮膚組織標本經(jīng)過常規(guī)脫水、透明、包埋后制成厚度為4μm的石蠟切片，利用二甲苯浸泡組織切片2次，每次5 min。隨后依次使用無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇和75%乙醇浸泡組織3 min，蒸餾水沖洗5 min。將組織切片置于檸檬酸緩沖液中，沸水浴10 min，蒸餾水沖洗3次×3 min。滴加3%過氧化氫孵育10 min，蒸餾水沖洗3次×3 min。滴加1∶1 000比例稀釋后的兔單克隆抗體Periostin（Abcam公司，英國），4℃過夜孵育，磷酸緩沖液沖洗3次×5 min。滴加稀釋后二抗，室溫條件下孵育1 h，磷酸緩沖液沖洗3次×5 min。DAB顯色液（賽摩飛世爾科技，中國）顯色處理6 min，自來水沖洗。利用蘇木精染色處理1 min，自來水沖洗。1%鹽酸酒精分化3 s，自來水沖洗。梯度酒精組織脫水，二甲苯透明組織后封片，顯微鏡下觀察染色后的組織結(jié)構(gòu)和細胞形態(tài)。顯微鏡下隨機選擇5個視野，根據(jù)染色強度和陽性細胞率的綜合評分標準，具體見表1。

1.4.3 蛋白免疫印跡檢測Periostin水平：利用RIPA裂解液提取皮膚組織中總蛋白，利用BCA蛋白定量試劑盒（Sigma Aldrich，美國）檢測提取蛋白濃度。沸水浴10 min后，取50 g蛋白質(zhì)通過月桂硫酸鈉和丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)分離蛋白，轉(zhuǎn)移到聚偏氟乙烯膜上，利用含有5%脫脂奶粉的封閉液封閉1 h（25℃），添加1∶1 000比例稀釋后的兔單克隆抗體Periostin和GAPDH（Abcam公司，英國），4℃過夜孵育。TBST洗膜3次，添加1∶5 000比例稀釋后的HRP標記兔抗人IgG抗體（Abcam公司，英國），室溫條件下孵育1 h。TBST洗膜3次，利用超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司，中國）進行蛋白顯色，凝膠成像系統(tǒng)顯影后，檢測Periostin蛋白質(zhì)相對表達水平。

1.5 治療方法

1.5.1 對照組：對照組患者采用醋酸曲安奈德注射液（規(guī)格：1 ml∶40 mg；批準文號：國藥準字H20033525；浙江仙琚制藥股份有限公司）聯(lián)合2%鹽酸利多卡因注射液（規(guī)格：5 ml∶100 mg；國藥準字H32024798；濟川藥業(yè)集團有限公司）注射治療。混勻注射至瘢痕組織，直至變白，每3 d治療1次。

1.5.2 觀察組：觀察組患者采用氨基酮戊酸濕敷瘢痕組織后使用LED光動力治療儀（徐州市科諾醫(yī)學(xué)儀器設(shè)備有限公司，中國）距離皮損25 cm處照射，紅光波長625 nm，單次照射時間為20 min，每隔10 d進行1次治療，連續(xù)治療4次。治療后的反應(yīng)過程將持續(xù)觀察，并根據(jù)患者的情況進行進一步調(diào)整。

1.6 觀察指標

1.6.1 瘢痕評分：溫哥華瘢痕量表（Vancouver scar scale，VSS）[12]通常用于評估瘢痕的外觀和組織結(jié)構(gòu)。采用VSS對兩組患者治療前的后瘢痕評分。VSS從色澤、厚度、血管分布和柔軟度方面進行綜合評分，總分為15分，分數(shù)的總和用于描述瘢痕的整體情況。VSS得分越高，則患者瘢痕越嚴重。

1.6.2 Periostin水平檢測：在醋酸曲安奈德注射液與光動力療法的治療的基礎(chǔ)上均進行瘢痕切除手術(shù)，并通過瘢痕切除手術(shù)獲取治療前后患者的增生性瘢痕組織（研究經(jīng)患者知情同意，且已獲得相關(guān)醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準）。并按照1.4.1和1.4.3小節(jié)方法檢測組織中Periostin mRNA和蛋白質(zhì)表達水平。

1.6.3 臨床療效判斷：治療后3個月進行臨床療效的評價[13]?；颊唏：厶師o痛覺及瘙癢感，90%～100%的瘢痕表現(xiàn)出平滑的質(zhì)地，顏色與正常皮膚接近，可視為痊愈；患者瘢痕處有輕微痛覺及瘙癢感，瘢痕表現(xiàn)出平滑的質(zhì)地，顏色變淺，呈輕微充血狀態(tài)，瘢痕體積縮小為顯效；患者瘢痕處的痛覺和瘙癢有緩解，20%～60%的瘢痕表現(xiàn)出平滑的質(zhì)地有效；患者瘢痕處仍舊疼痛瘙癢，瘢痕質(zhì)地較硬，顏色呈暗紅，伴有中重度充血，而且瘢痕體積無改變或增大，則可判定為無效。總有效率=（顯效+有效）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS 26.0進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以頻數(shù)或率表示，組間差異通過χ2檢驗進行比較。計量資料以（xˉ±s）表示，組間差異通過t檢驗比較；P＜0.05水平上具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2" 結(jié)果

2.1 增生性瘢痕和正常皮膚中Periostin表達差異：檢查增生性瘢痕患者的增生性瘢痕組織和正常皮膚組織中Periostin表達水平的差異。發(fā)現(xiàn)瘢痕組織中Periostin的mRNA和蛋白質(zhì)表達水平明顯高于正常組織（P＜0.05），而且瘢痕組織中Periostin的染色強度和陽性細胞率綜合評分也明顯大于正常組織（P＜0.05）。見圖1。

2.2 增生性瘢痕的治療有效性評價

2.2.1 VSS評分比較：結(jié)果顯示治療前兩組患者VSS評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），治療后兩組患者VSS評分均顯著降低（P＜0.05），且觀察組患者VSS評分明顯低于對照組（P＜0.05）。見表2。

2.2.2 Periostin表達水平比較：結(jié)果顯示治療前兩組患者Periostin mRNA和蛋白質(zhì)表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），治療后兩組患者Periostin mRNA和蛋白質(zhì)表達水平均顯著降低（P＜0.05），且治療后觀察組患者Periostin mRNA和蛋白質(zhì)表達水平更低（P＜0.05）。見圖2。

2.2.3 臨床療效比較：對照組總有效率88.10%。觀察組總有效率97.61%。觀察組患者治療后總有效率明顯高于對照組（P＜0.05）。見表3。

2.3 增生性瘢痕的治療安全性評價：經(jīng)過為期1年對兩組患者治療安全性的隨訪統(tǒng)計，結(jié)果顯示對照組患者復(fù)發(fā)率為4.76%（2/42），觀察組患者復(fù)發(fā)率為0.00%（0/42），兩組對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。對照組患者治療期間出現(xiàn)色素沉著3例（7.14%）；觀察組治療期間出現(xiàn)皮膚萎縮1例（2.38%），色素沉著1例（2.38%），即說明兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

3" 討論

增生性瘢痕的發(fā)生率較高，常見誘因包括局部或全身因素，局部因素包括手術(shù)刺激、外力牽拉、炎癥反應(yīng)等，全身因素包括性別、年齡、甲狀腺功能亢進等，但是其發(fā)生的具體機制還有待進一步闡明[14]。在皮膚全層發(fā)生損傷時，真皮成纖維細胞中Periostin的表達異常升高[15]。Periostin是一種細胞外基質(zhì)蛋白，在皮膚發(fā)育和維持體內(nèi)平衡中起著至關(guān)重要的作用，以促進成骨細胞增殖、分化，也參與皮膚疾病，如系統(tǒng)性/局限性硬皮病、創(chuàng)傷愈合和異常瘢痕形成[16-18]。王齊等發(fā)現(xiàn)Periostin蛋白主要分布于成纖維細胞核周圍的胞漿中，并在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的成纖維細胞中表達水平升高[19]。Zhang Z等也證實瘢痕疙瘩和增生性瘢痕組織中Periostin的表達水平高于正常皮膚[20]。本研究納入84例增生性瘢痕患者為研究對象，檢查瘢痕組織和正常皮膚組織中Periostin表達水平差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)增生性瘢痕組織中Periostin的mRNA、蛋白質(zhì)表達水平和陽性表達率與無皮損皮膚有顯著差異。Nikoloudaki G等[21]證實Periostin在創(chuàng)傷后7 d達到峰值，其介導(dǎo)體外單核細胞/巨噬細胞遷移能力的增強，促進腫瘤壞死因子-α表達，從而促進瘢痕形成周細胞的增殖。Yin SL等發(fā)現(xiàn)異常瘢痕中Periostin表達水平升高，Periostin通過促進RhoA/ROCK途徑介導(dǎo)并刺激人真皮成纖維細胞分泌轉(zhuǎn)化生長因子-β1，從而促進異常瘢痕形成[22]。這些研究結(jié)果提示Periostin在異常瘢痕的發(fā)生中具有重要的調(diào)節(jié)作用。

由于真皮成纖維細胞明顯增加造成過多的膠原蛋白被合成并沉積在損傷區(qū)域，形成的瘢痕組織是增生性瘢痕的主要病理學(xué)特征，屬于纖維增生性疾病。光動力療法具有微創(chuàng)、毒副小和并發(fā)癥率低等優(yōu)勢，通過光波照射來促進局部纖維成分降解，抑制膠原纖維合成和膠原纖維過度增生，從而改善局部皮損部位的瘢痕癥狀[23]。研究結(jié)果顯示，在治療增生性瘢痕患者時，光動力療法的臨床總有效率明顯高于局部注射糖皮質(zhì)激素治療。余南生等人研究發(fā)現(xiàn)5-氨基酮戊酸光動力療法具有抑制成纖維細胞增殖的作用，同時能夠降低羥脯氨酸的含量[24]。研究發(fā)現(xiàn)5-氨基酮戊酸光動力療法可以通過氧化損傷來抑制成纖維細胞的生長和增殖[25]。本研究發(fā)現(xiàn)，光動力療法用于增生性瘢痕患者治療的觀察組VSS評分（色澤、厚度、血管分布和柔軟度方面）明顯低于局部注射糖皮質(zhì)激素治療的對照組，并且Periostin表達水平明顯降低。朱志娟等發(fā)現(xiàn)5-氨基酮戊酸光動力療法能夠通過抑制細胞中膠原蛋白CollagenⅢ的合成，從而抑制瘢痕疙瘩形成[26]。提示光動力療法用于增生性瘢痕組織，可以通過減少膠原蛋白和細胞外基質(zhì)合成，調(diào)控Periostin等瘢痕相關(guān)基因異常表達，從而抑制瘢痕形成。最后，本研究發(fā)現(xiàn)局部糖皮質(zhì)激素注射治療增生性瘢痕患者的治療復(fù)發(fā)率和不良反應(yīng)率與光動力療法效果相似[27]。證實了光動力療法的安全性，這一發(fā)現(xiàn)為臨床治療提供了新的選擇，特別是對于那些對局部注射糖皮質(zhì)激素治療效果不佳或有不良反應(yīng)的患者。

綜上，Periostin在增生性瘢痕組織的發(fā)生機制中發(fā)揮重要作用。而光動力療法用于增生性瘢痕治療中，具有較好的效果和安全性。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，光動力療法能夠顯著降低增生性瘢痕組織中Periostin的表達水平，這為探索治療手段中Periostin的調(diào)控機制提供了新的線索。研究能夠為增生性瘢痕的臨床預(yù)防和治療提供重要參考。

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[收稿日期]2024-01-30

本文引用格式：劉中波，趙靜杰，姜健，等.光動力治療增生性瘢痕的效果及對Periostin表達的影響[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2024，33（11）：27-31.