摘 要 目的：探討B(tài)細(xì)胞淋巴瘤因子10（BCL10）基因多態(tài)性與急性胰腺炎（AP）的相關(guān)性。方法：選取 90例AP患者為AP組，另選取87名健康者為對(duì)照組。查閱NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選BCL10的10個(gè)常見(jiàn)單核苷酸多態(tài)性（SNPs）位點(diǎn)，采用SNapShot法微測(cè)序法檢測(cè)BCL10的SNPs位點(diǎn)。關(guān)聯(lián)分析BCL10 SNPs位點(diǎn)與AP嚴(yán)重程度、發(fā)病原因、臨床檢查指標(biāo)的關(guān)系，探討AP的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)果：AP組BCL10 rs4949928位點(diǎn)C等位基因頻率及CC+CT基因型較對(duì)照組升高（P<0.05）。二元logistic回歸分析顯示糖尿病、飲酒史、BCL10 rs4949928位點(diǎn)C基因是AP的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P<0.05）。結(jié)論：BCL10基因多態(tài)性可能與AP發(fā)病相關(guān)，rs4949928位點(diǎn)C等位基因突變是相關(guān)原因。

關(guān)鍵詞 BCL10 單核苷酸多態(tài)性 急性胰腺炎

中圖分類(lèi)號(hào)：R576； R363.14 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2024）19-0072-05

引用本文 嚴(yán)寒， 徐萍， 王靜， 等. BCL10基因多態(tài)性與急性胰腺炎的關(guān)聯(lián)分析[J]. 上海醫(yī)藥， 2024， 45（19）： 72-76.

基金項(xiàng)目：上海市自然科學(xué)基金項(xiàng)目（20ZR1450900）

Correlation analysis of BCL10 gene polymorphism with acute pancreatitis

YAN Han， XU Ping， WANG Jing， LOU Xiaoli， LI Teng

（Department of Gastroenterology， the Central Hospital of Songjiang District， Shanghai 201600， China）

ABSTRACT Objective： To explore the relations of B-cell lymphoma factor 10 （BCL10） gene polymorphism with acute pancreatitis. Methods： A total of 90 patients with AP were selected as an AP group and 87 healthy people as a control group. The nucleotide database of National Center for Biotechnology Information was searched to screen 10 single nucleotide polymorphisms （SNPs） of BCL10， and the SNPs of BCL10 was detected by SNapShot micro sequencing. The relationship between BCL10 SNPs loci and the severity， pathogenesis and clinical examination indexes of AP were analyzed by correlation analysis， and the independent risk factors of AP were discussed. Results： The frequencies of CC+CT genotype and C allelic gene of BCL10 rs4949928 in the AP group were significantly higher than those in the control group （P<0.05）. The analysis of binary logistic regression model showed that history of diabetes， alcohol drinking and the C allelic gene of BCL10 were independent risk factors for AP （P<0.05） . Conclusion： BCL10 gene polymorphism is associated with AP and C allelic gene of BCL10 rs4949928 is the associated cause.

KEY WORDS BCL10； single nucleotide polymorphisms； acute pancreatitis

急性胰腺炎（acute pancreatitis， AP）是由多種病因引起的異常胰酶激活，導(dǎo)致胰腺組織自身消化、水腫、出血壞死，人群中發(fā)病率約為3.34%～5.66%[1]。核因子-κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）信號(hào)通路是AP發(fā)病機(jī)制中調(diào)節(jié)促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生的重要通路，TNF-α、IL-6等促炎細(xì)胞因子可放大局部炎癥并導(dǎo)致炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，甚至導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征和多器官功能不全[2]。而B(niǎo)細(xì)胞淋巴瘤因子10（B-cell lymphoma factor 10， BCL10）是一種在人體組織中普遍表達(dá)的蛋白，其通過(guò) CARD結(jié)構(gòu)域形成的BCL10寡聚體表現(xiàn)出了對(duì)NF-κB信號(hào)通路的強(qiáng)力激活[3]，提示BCL10在AP病情發(fā)展中可能存在相關(guān)作用。本研究通過(guò)檢測(cè)BCL10單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms， SNPs），探討B(tài)CL10基因多態(tài)性與AP患病風(fēng)險(xiǎn)、病情程度和AP臨床檢查指標(biāo)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2021年6月—2022年6月在上海市松江區(qū)中心醫(yī)院治療的急性胰腺炎患者90例，在其入院48 h內(nèi)抽取其外周靜脈血，同時(shí)抽取87名健康人外周血作為對(duì)照組。對(duì)照組人群性別、年齡與急性胰腺炎組人群比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。急性胰腺炎組患者納入標(biāo)準(zhǔn)：AP診斷符合《中國(guó)急性胰腺炎診治指南（2021）》[4]。AP組與對(duì)照組排除標(biāo)準(zhǔn)：慢性胰腺炎或其他胰腺疾??；既往肝腎疾病、免疫系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤疾病。所有試驗(yàn)符合上海市松江區(qū)中心醫(yī)院倫理委員會(huì)相關(guān)規(guī)定（倫理批準(zhǔn)號(hào)：2020SQ017）。

1.2 研究方法

1.2.1 SNP位點(diǎn)篩選

從NCBI（National Cernter for Biotechnology Information）網(wǎng)站的單核苷酸多態(tài)性數(shù)據(jù)庫(kù)查詢BCL10的SNP位點(diǎn)，從30個(gè)最小等位基因頻率（minor allele frequency， MAF）大于0.05的BCL10位點(diǎn)中選取10個(gè)位點(diǎn)，分別位于BCL10基因的不同區(qū)域（表1）。

1.2.2 SNP檢測(cè)方法

SNapShot法微測(cè)序法檢測(cè)BCL10的基因多態(tài)性：保存于？80 ℃冰箱的外周靜脈血提取DNA，PCR法擴(kuò)增含BCL10 SNPs位點(diǎn)的DNA，PCR的反應(yīng)體系包含4種熒光標(biāo)記的核苷酸，擴(kuò)增條件：94 ℃ 3 min；94 ℃ 15 s、55 ℃ 15 s、72 ℃ 30 s共30循環(huán)；72 ℃ 3 min。加入延伸引物延伸純化后的PCR產(chǎn)物，延伸產(chǎn)物根據(jù)Snapshot試劑盒（ABI公司）指示處理后經(jīng)ABI 3730XL基因測(cè)序儀測(cè)序。根據(jù)峰移動(dòng)的位置確定延伸產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的SNP位點(diǎn)，而根據(jù)峰的顏色來(lái)確定SNP位點(diǎn)堿基種類(lèi)。

1.2.3 臨床指標(biāo)采集

患者入院48 h內(nèi)抽取靜脈血，測(cè)定C反應(yīng)蛋白、血清鈣和IL-6水平。收集AP患者病情程度、發(fā)病類(lèi)型資料。根據(jù)亞特蘭大分類(lèi)和定義將AP患者分為輕癥和重癥（包括中度重癥和重癥）[5]；發(fā)病類(lèi)型分為膽源性和非膽源性。膽源性AP的診斷標(biāo)準(zhǔn)：①符合AP的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②影像學(xué)提示膽總管結(jié)石或膽總管擴(kuò)張>4 mm（膽囊切除術(shù)后>8 mm）；③血清SB>40 μmol/L；④膽囊結(jié)石伴堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）或谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase，ALT）水平高于正常上限3倍；⑤排除高鈣血癥、高三酰甘油血癥和由乙醇、藥物、腫瘤等因素引起的AP。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較

本研究共納入90例急性胰腺炎患者為AP組，其中重癥52例，輕癥38例；87名健康者為對(duì)照組。通過(guò)一般資料的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較分析，兩組間年齡、性別、吸煙、原發(fā)性高血壓病史均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；對(duì)照組飲酒史、糖尿病病史低于AP組（表2，P<0.05），提示飲酒和糖尿病史可能增加AP的易感性。

2.2 基因型頻率及等位基因頻率差異比較

通過(guò)檢測(cè)、分析和比較10個(gè)SNP位點(diǎn)，與對(duì)照組相比，AP組rs4949928位點(diǎn)C等位基因頻率、CT+CC基因型頻率明顯升高（表3，P<0.05）。rs2647396、rs12024371、rs2735593、rs962409、rs3768235、rs1060846、rs2735594、rs4949927、rs12134420等位基因和基因型頻率差異在兩組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示BCL10 rs4949928位點(diǎn)多態(tài)性可能是AP易感性的重要因素。

2.3 BCL10 rs4949928位點(diǎn)基因型與AP的關(guān)聯(lián)分析

90例胰腺炎患者中，rs4949928位點(diǎn)CC+CT基因型共有14例，TT基因型共有76例，按照基因型差異分為兩組（CC+CT組和TT組），兩組間病情嚴(yán)重程度、是否為反復(fù)發(fā)作性胰腺炎、胰腺炎類(lèi)型及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表4）。

2.4 胰腺炎危險(xiǎn)因素logistic回歸分析

將對(duì)照組和AP組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)（糖尿病病史、飲酒史、rs4949928位點(diǎn)基因型）納入二元logistic回歸模型中，結(jié)果提示，飲酒史、糖尿病史、BCL10 rs4949928位點(diǎn)C等位基因突變是AP的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。Hosmer-Lemeshow檢驗(yàn)P=0.98，提示模型擬合情況良好，預(yù)測(cè)值與真實(shí)值之間并無(wú)顯著差異；Omnibus檢驗(yàn)P<0.01，判斷模型整體具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表5）。

3 討論

近年來(lái)基因多態(tài)性研究發(fā)現(xiàn)，單個(gè)堿基突變也是導(dǎo)致疾病發(fā)生的危險(xiǎn)因素[6]。基因多態(tài)性在急性胰腺炎中也有很多相關(guān)研究，炎癥因子的單核苷酸突變?cè)黾覣P患病風(fēng)險(xiǎn)[7]，囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子突變可通過(guò)損害胰腺導(dǎo)管細(xì)胞加重AP的嚴(yán)重程度[8]。因此單核苷酸多態(tài)性的研究可以拓展我們對(duì)于胰腺炎發(fā)病機(jī)制的理解，同時(shí)對(duì)臨床診療、用藥提供相應(yīng)的指導(dǎo)。

我們前期研究發(fā)現(xiàn)，BCL10可以通過(guò)與CARD9形成復(fù)合體，參與SAP發(fā)病過(guò)程中NF-κB信號(hào)通路的激活[9]，表明BCL10以連接含CARD的支架蛋白的作用，誘導(dǎo)激活NF-κB通路，而NF-κB可以調(diào)節(jié)胰腺炎病程中促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，放大炎癥反應(yīng)。我們還發(fā)現(xiàn)，BCL10在AP患者發(fā)病48 h內(nèi)的單核細(xì)胞中表達(dá)升高[10]。在前期研究的基礎(chǔ)上，通過(guò)本研究繼續(xù)探討B(tài)CL10基因多態(tài)性與急性胰腺炎發(fā)病及轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性。

BCL10 FAM大于0.05的SNPs位點(diǎn)僅有30個(gè)，既往對(duì)BCL10基因多態(tài)性的研究主要聚焦在癌癥領(lǐng)域，如生殖細(xì)胞腫瘤、多發(fā)性骨髓瘤等[11-12]，其基因多態(tài)性在炎癥等方面的影響尚不清楚。我們選取了10個(gè)分別位于BCL10基因不同區(qū)域的SNPs位點(diǎn)，結(jié)果顯示急性胰腺炎患者BCL10 rs4949928位點(diǎn)C等位基因頻率及CC+CT基因型較普通人群升高。二元logistic回歸分析提示糖尿病、飲酒史、BCL10 rs4949928位點(diǎn)C→T是AP的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。糖尿病和飲酒與AP的發(fā)生有密切關(guān)聯(lián)已有多年研究，2型糖尿病并發(fā)急性胰腺炎的風(fēng)險(xiǎn)是健康人群的2.83倍[13]，重度飲酒者終生胰腺炎總體風(fēng)險(xiǎn)為2%～5%，甚至發(fā)展為慢性胰腺炎[14]。這些均提示檢測(cè)BCL10基因多態(tài)性可能有助于篩查急性胰腺炎易感人群，有較好的疾病預(yù)防價(jià)值。

本研究為單中心實(shí)驗(yàn)，今后需多中心大樣本進(jìn)一步來(lái)驗(yàn)證BCL10基因多態(tài)性與急性胰腺炎發(fā)病的相關(guān)性，以及rs4949928位點(diǎn)C突變對(duì)胰腺炎發(fā)展轉(zhuǎn)歸、診治的影響，C突變?nèi)绾螌?dǎo)致患者更易發(fā)作AP的機(jī)制也需進(jìn)一步深入探討。

參考文獻(xiàn)

[1] 岳小芳， 潘小艷. C反應(yīng)蛋白、纖維蛋白原和D二聚體在急性胰腺炎早期病情評(píng)估中的價(jià)值[J]. 實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)， 2017， 35（5）： 699-701.

[2] Bae GS， Park KC， Koo BS， et al. Nardostachys jatamansi inhibits severe acute pancreatitis via mitogen-activated protein kinases[J]. Exp Ther Med， 2012， 4（3）： 533-537.

[3] Willis TG， Jadayel DM， Du MQ， et al. Bcl10 is involved in t（1；14）（p22；q32） of MALT B cell lymphoma and mutated in multiple tumor types[J]. Cell， 1999， 96（1）： 35-45.

[4] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)外科學(xué)分會(huì)胰腺外科學(xué)組. 中國(guó)急性胰腺炎診治指南（2021）[J]. 中華外科雜志， 2021， 59（7）： 578-587.

[5] Banks PA， Bollen TL， Dervenis C， et al. Classification of acute pancreatitis—2012： revision of the Atlanta classification and definitions by international consensus[J]. Gut， 2013， 62（1）： 102-111.

[6] Berry NK， Scott RJ， Rowlings P， et al. Clinical use of SNPmicroarrays for the detection of genome-wide changes in haematological malignancies[J]. Crit Rev Oncol Hematol， 2019， 142： 58-67.

[7] Zhu X， Hou C， Tu M， et al. Gene polymorphisms in the interleukins gene and the risk of acute pancreatitis： a metaanalysis[J]. Cytokine， 2019， 115： 50-59.

[8] Trapp S， Aghdassi AA， Glaubitz J， et al. Pancreatitis severity in mice with impaired CFT R function but pancreatic sufficiency is mediated via ductal and inflammatory cells-Not acinar cells[J]. J Cell Mol Med， 2021， 25（10）： 4658-4670.

[9] Wang J， Tian J， He YH， et al. Role of CARD9 in inflammatory signal pathway of peritoneal macrophages in severe acute pancreatitis[J]. J Cell Mol Med， 2020， 24（17）： 9774-9785.

[10] Yang ZW， Weng CZ， Wang J， et al. The role of Card9 overexpression in peripheral blood mononuclear cells from patients with aseptic acute pancreatitis[J]. J Cell Mol Med， 2016， 20（3）： 441-449.

[11] Zhou Y， Guo Y， Wang Y. Identification and validation of a seven-gene prognostic marker in colon cancer based on single-cell transcriptome analysis[J]. IET Syst Biol， 2022， 16（2）： 72-83.

[12] Hayashi Y， Watanabe T， Nakada M， et al. BCL10 single nucleotide polymorphism and its association with CSF dissemination of primary intracranial germ cell tumors[J]. Pediatr Neurosurg， 2009， 45（4）： 291-295.

[13] 王華燁， 羅和生. 飲酒、吸煙、飲食因素與急性胰腺炎的相關(guān)性研究[J]. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志， 2020， 29（4）： 374-378.

[14] Noel RA， Braun DK， Patterson RE， et al. Increased risk of acute pancreatitis and biliary disease observed in patients with type 2 diabetes： a retrospective cohort study[J]. Diabetes Care， 2009， 32（5）： 834-838.