關(guān)鍵詞地錦草；肝纖維化；TNF-α/NF-κB信號(hào)通路；苗藥

肝纖維化（hepaticfibrosis，HF）是指在各種致病因素的作用下使肝臟受到損傷，從而激活靜止?fàn)顟B(tài)的肝星狀細(xì)胞（hepaticstellatecell，HSC），使HSC大量增殖、轉(zhuǎn)化以及細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix，ECM）過度沉積和異常分布，最后形成纖維瘢痕的一種病理過程[1]。HF是眾多慢性重癥肝病的共同病理基礎(chǔ)，如果不加以防治會(huì)進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化，甚至肝癌[2―3]。研究指出，雖然HF是可逆的，但目前沒有批準(zhǔn)的可用于抗HF的藥物[4]；另有研究指出，肝臟疾病相關(guān)的死亡率會(huì)隨著HF的加劇而呈指數(shù)增長(zhǎng)[2]。因此，對(duì)HF進(jìn)行有效干預(yù)顯得尤為重要。

地錦草為大戟科植物地錦EuphorbiahumifusaWilld.或斑地錦EuphorbiamaculataL.的干燥全草，歸肝、胃、大腸經(jīng)，具有清熱解毒、涼血止血、活血化瘀、利濕退黃的功效[5]。地錦草始載于《嘉裕本草》，為我國(guó)貴州苗族常用藥[5]，又被稱為“地瓣草”（興義）、“斑鳩窩”（貴陽）”、“倒欠草”（銅仁）。在國(guó)醫(yī)大師周仲瑛的用藥案例中，地錦草常被用于治療HF和肝硬化[6]。地錦草的主要有效成分包括黃酮類、萜類、香豆素類等，具有抗腫瘤、降血脂、抗氧化、護(hù)肝等多種藥理作用[7]。有研究發(fā)現(xiàn)，地錦草及其提取物可明顯改善肝損傷小鼠的肝功能，初步證實(shí)了其對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[8]，但其是否可以緩解HF尚不明確。腫瘤壞死因子α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）/核因子κB（nuclearfactor-κB，NF-κB）信號(hào)通路的激活能誘導(dǎo)多種促炎介質(zhì)的轉(zhuǎn)錄，刺激HSC轉(zhuǎn)化與ECM的過度沉積，從而促進(jìn)HF的發(fā)生發(fā)展[9]。本研究擬從TNF-α/NF-κB信號(hào)通路出發(fā)，初步探討地錦草對(duì)HF大鼠的改善作用及機(jī)制，旨在為挖掘HF的潛在治療藥物奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括DYCZ-24DN型垂直電泳槽（北京六一儀器廠）、SH-523型化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（杭州申花科技有限公司）、L00686CeBlot?L1型快速濕轉(zhuǎn)儀（金斯瑞生物科技股份有限公司）、H1-16KR型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（湖南可成儀器設(shè)備有限公司）、MultiskanFC型酶標(biāo)儀（美國(guó)ThermoFisherScientific公司）、ND-100型超微量紫外-可見光分光光度計(jì)（杭州米歐儀器有限公司）、Chemray240型全自動(dòng)生化分析儀（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司）、QuantStudio6型實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）儀（美國(guó)ABI公司）、Fi3型生物顯微鏡（尼康株式會(huì)社）。

1.2 主要藥品與試劑

本研究所用主要藥品與試劑包括地錦草（地錦）配方顆粒（神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)230325Q，規(guī)格為1g配方顆粒相當(dāng)于中藥飲片3.5g），水飛薊賓膠囊（天津天士力圣特制藥有限公司，批號(hào)35070805，規(guī)格35mg），小鼠源甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）單抗、兔源NF-κBp65多抗、兔源核因子κB抑制蛋白α（inhibitor-κbindingproteinα，IκBα）多抗、兔源轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1）多抗（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，批號(hào)分別為10028230、00162675、10268-1-AP、21898-1-AP），α-兔源平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smoothmuscleactin，α-SMA）單抗（英國(guó)Abcam公司，批號(hào)1000229-37），兔源TNF-α多抗（上海碧云天生物技術(shù)股份有限公司，批號(hào)AF8208），兔源磷酸化NF-κBp65（p-NF-κBp65）多抗（江蘇親科生物研究中心有限公司，批號(hào)4c61978），反轉(zhuǎn)錄試劑盒、總RNA提取試劑、高靈敏性染料法定量PCR檢測(cè)試劑盒（南京諾唯贊生物科技股份有限公司，批號(hào)分別為7E731J3、7E1141H4、7E0962H4），丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alaninetransaminase，ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartatetransaminase，AST）測(cè)定試劑盒（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司，批號(hào)分別為20221130、20221103），羥脯氨酸（hydroxyproline，HYP）測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所有限公司，批號(hào)20230218），TNF-α、白細(xì)胞介素17（interleukin-17，IL-17）、IL-1β、IL-6酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒（江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司，批號(hào)均為202407），兔源α-SMA多抗（武漢塞維爾生物科技有限公司，批號(hào)AC240103198），Poly-HRP標(biāo)記的羊抗鼠/兔二抗（廈門通靈生物醫(yī)藥科技股份有限公司，批號(hào)20709024D）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本研究所用動(dòng)物為SPF級(jí)健康SD大鼠，共38只，雄性，6～8周齡，體重（200±20）g，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物研究所提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（黔）2021-0003。所有動(dòng)物飼養(yǎng)于貴州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物研究所，實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由進(jìn)食與飲水。本研究嚴(yán)格遵循“3R”原則，動(dòng)物處理嚴(yán)格按照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》進(jìn)行。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按隨機(jī)數(shù)字表法將38只大鼠分為對(duì)照組（n＝7），模型組（n＝7），地錦草低、中、高劑量組（n＝6）和水飛薊賓組（陽性對(duì)照，n＝6）。除對(duì)照組外，其余各組大鼠均腹腔注射3mL/kg的四氯化碳（CCl4）和橄欖油（2∶3，V/V）溶液以制備HF模型，每周注射2次（每周一、四上午分別注射1次），連續(xù)8周[10]；對(duì)照組大鼠腹腔注射等體積生理鹽水和橄欖油（2∶3，V/V）溶液。造模結(jié)束后，隨機(jī)處死對(duì)照組和模型組大鼠各1只，通過蘇木精-伊紅（HE）和Masson染色觀察大鼠的肝組織病理變化。根據(jù)Metavir分期評(píng)分系統(tǒng)——HF分期評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，以HF分期≥2期表示HF模型制備成功[11]。

根據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》（一版）中地錦草推薦劑量與國(guó)醫(yī)大師周仲瑛教授在治療HF及肝硬化中地錦草的使用劑量[6]，確定該藥的成人劑量為0.214g/kg，再通過體表面積法換算得到大鼠的臨床等效劑量為1.35g/kg，故地錦草低、中、高劑量組大鼠分別給予0.5、1、2倍臨床等效劑量地錦草，即0.675、1.35、2.70g/kg。水飛薊賓的成人劑量為3mg/kg，根據(jù)體表面積法換算后得到大鼠的臨床等效劑量為18.9mg/kg。造模成功后，各給藥組大鼠灌胃相應(yīng)藥物，對(duì)照組和模型組大鼠灌胃等體積生理鹽水，灌胃體積均為10mL/kg，每天1次，連續(xù)30d。

2.2 動(dòng)物取材與處理

末次給藥后，各組大鼠禁食不禁水12h，稱重，然后腹腔注射鹽酸替來他明鹽酸唑拉西泮（50mg/kg）麻醉大鼠，再于腹主動(dòng)脈取血，室溫靜置2h后，離心得血清，置于－80℃暫存。取血結(jié)束后，用頸椎脫臼法處死大鼠，取完整肝臟，稱重；另取大鼠新鮮的肝右葉組織，一部分用4%多聚甲醛溶液固定，另一部分置于－80℃冰箱中保存，備用。

2.3 大鼠肝指數(shù)計(jì)算

根據(jù)大鼠取材前體重和取材后肝臟濕重計(jì)算肝指數(shù)：肝指數(shù)（%）＝取材后肝臟濕重（g）/大鼠取材前體重（g）×100%。

2.4 大鼠血清中炎癥因子指標(biāo)水平測(cè)定

取“2.2”項(xiàng)下各組大鼠血清適量，常規(guī)解凍后，按照ELISA試劑盒說明書操作，使用酶標(biāo)儀檢測(cè)大鼠血清中TNF-α、IL-17、IL-1β、IL-6水平。

2.5 大鼠血清中肝功能指標(biāo)及HYP水平測(cè)定

取“2.2”項(xiàng)下各組大鼠血清適量，常規(guī)解凍后，按照試劑盒說明書操作，使用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)大鼠血清中ALT、AST、HYP水平。

2.6 大鼠肝組織病理觀察

取“2.2”項(xiàng)下于4%多聚甲醛溶液中固定24h的大鼠肝組織，制備石蠟切片（厚度3μm），行HE和Masson染色后，封片，采用熒光顯微鏡于白光下觀察大鼠的肝組織病理變化。應(yīng)用ImageProPlus6.0軟件對(duì)Masson染色照片進(jìn)行陽性染色（呈藍(lán)色）面積測(cè)算，并計(jì)算陽性染色百分比[陽性染色百分比（%）＝陽性染色面積/總面積×100%]，以此為指標(biāo)評(píng)價(jià)HF程度。

2.7 大鼠肝組織中TGF-β1、α-SMA表達(dá)測(cè)定

采用免疫組化法測(cè)定。取“2.2”項(xiàng)下凍存的大鼠肝組織（每組選4只大鼠的肝組織），經(jīng)組織脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與烤片、脫蠟、抗原修復(fù)、阻斷內(nèi)源性過氧化物酶、血清封閉等常規(guī)操作后，加入TGF-β1、α-SMA一抗（稀釋比例分別為1∶100、1∶200），于4℃濕盒孵育15h。沖洗后，加相應(yīng)二抗，于37℃孵育30min，再次沖洗后，加入DBA顯色液，常規(guī)進(jìn)行復(fù)染、脫水、封片，最后采用生物顯微鏡拍照。采用ImageProPlus6.0軟件對(duì)免疫組化照片進(jìn)行陽性光密度分析（陽性染色呈棕黃色），以陽性光密度值大小來反映蛋白的表達(dá)水平。

2.8 大鼠肝組織中TNF-α、NF-κBp65mRNA表達(dá)檢測(cè)

采用qRT-PCR法檢測(cè)。取“2.2”項(xiàng)下凍存的大鼠肝組織（每只大鼠約100mg），采用Trizol法提取肝組織中總RNA，測(cè)定總RNA濃度后，將其逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，并以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)程序如下：95℃預(yù)變性10min；95℃變性15s，60℃退火60s，95℃延伸15s，循環(huán)40次。擴(kuò)增體系如下（20μL）：cDNA模板4μL，SYBRGreenMasterMix10μL，上、下游引物各0.4μL，50×ROXReferenceDye20.4μL，H2O4.8μL。以GAPDH為內(nèi)參，采用2－ΔΔCt法計(jì)算肝組織中TNF-α、NF-κBp65mRNA的相對(duì)表達(dá)量。引物由北京擎科生物科技股份有限公司設(shè)計(jì)并合成，引物序列及產(chǎn)物長(zhǎng)度見表1。

2.9 大鼠肝組織中α-SMA及TNF-α/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)測(cè)定

采用Westernblot法測(cè)定。取“2.2”項(xiàng)下凍存的大鼠肝組織（每組選3只大鼠的肝組織），提取組織中總蛋白，采用BCA法測(cè)定總蛋白濃度。將蛋白變性后，取蛋白40μg上樣進(jìn)行電泳（恒壓180V，電泳時(shí)間40min），轉(zhuǎn)膜13min至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。電轉(zhuǎn)移后，用含5%脫脂奶粉的TBST（磷酸化蛋白用1%BSA）浸泡PVDF膜，室溫?fù)u床封閉2h；加入α-SMA、TNF-α、NF-κBp65、p-NF-κBp65、IκBα、GAPDH一抗（稀釋比例分別為1∶30000、1∶1000、1∶5000、1∶1000、1∶10000、1∶10000），于4℃孵育過夜；洗膜后，加入相應(yīng)二抗（稀釋比例為1∶10000），室溫孵育2h。洗膜后進(jìn)行曝光顯色，利用ImageProPlus6.0軟件分析條帶灰度值。以目標(biāo)蛋白與內(nèi)參蛋白（GAPDH）條帶灰度值的比值表示目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平，以p-NF-κBp65與NF-κBp65灰度值比值表示NF-κBp65蛋白的磷酸化水平。

2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS29.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，方差齊性時(shí)組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，方差不齊性時(shí)組間兩兩比較采用Tamhane’sT2檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的定量資料以M（P25，P75）表示，組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 地錦草對(duì)HF大鼠肝指數(shù)的影響

對(duì)照組、模型組、水飛薊賓組和地錦草低、中、高劑量組大鼠的肝指數(shù)分別為（3.18±0.20）%、（4.07±0.17）%、（3.47±0.14）%、（3.59±0.21）%、（3.36±0.06）%、（3.30±0.14）%。與對(duì)照組比較，模型組大鼠的肝指數(shù)顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠的肝指數(shù)均顯著降低（P＜0.01）。

3.2 地錦草對(duì)HF大鼠血清中炎癥因子水平的影響

與對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-17、IL-1β、IL-6水平均顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠血清中上述指標(biāo)水平均顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見表2。

3.3 地錦草對(duì)HF大鼠血清中肝功能指標(biāo)及HYP水平的影響

與對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中ALT、AST、HYP水平均顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠血清中上述指標(biāo)水平均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果見表3。

3.4 地錦草對(duì)HF大鼠肝組織病理的影響

3.4.1 HE染色情況

對(duì)照組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞排列不規(guī)則，未見明顯結(jié)締組織增生，間質(zhì)內(nèi)可見零散炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。與對(duì)照組比較，模型組大鼠肝細(xì)胞排列更不規(guī)則，肝細(xì)胞水腫伴明顯胞漿疏松化，肝細(xì)胞實(shí)質(zhì)內(nèi)有少量空泡樣變性，匯管區(qū)可見大量結(jié)締組織增生，間質(zhì)內(nèi)可見少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型組比較，各給藥組大鼠肝組織在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肝細(xì)胞水腫等方面均有不同程度改善。結(jié)果見圖1。

3.4.2 Masson染色情況

對(duì)照組大鼠肝組織未見結(jié)締組織增生，可見少量藍(lán)色膠原纖維。模型組大鼠肝組織藍(lán)色膠原纖維明顯增多，纖維間隔變粗。與模型組比較，各給藥組大鼠肝組織藍(lán)色膠原纖維明顯變細(xì)，纖維間隔變窄。與對(duì)照組[（0.06±0.01）%]比較，模型組大鼠陽性染色百分比[（2.44±0.68）%]顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，水飛薊賓組和地錦草高劑量組大鼠陽性染色百分比[分別為（0.65±0.17）%、（0.34±0.14）%]均顯著降低（P＜0.05），但地錦草低、中劑量組大鼠陽性染色百分比[分別為（2.37±1.97）%、（1.69±0.25）%]差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見圖2。

3.5 地錦草對(duì)HF大鼠肝組織中α-SMA、TGF-β1表達(dá)的影響

對(duì)照組大鼠肝組織中α-SMA檢測(cè)可見少量著色，主要分布在小動(dòng)、靜脈血管壁，其余未見明顯廣泛表達(dá)；TGF-β1檢測(cè)可見少量表達(dá)，主要分布在肝細(xì)胞中。模型組大鼠肝組織中α-SMA檢測(cè)可見大片區(qū)高表達(dá)，主要分布在膠原纖維增生處及匯管區(qū)；TGF-β1檢測(cè)可見大片區(qū)高表達(dá)，顏色為深棕褐色，并出現(xiàn)顆粒狀改變。各給藥組大鼠肝組織中α-SMA、TGF-β1表達(dá)有不同程度減輕。與對(duì)照組比較，模型組大鼠肝組織中α-SMA、TGF-β1陽性光密度值均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）；與模型組比較，水飛薊賓組和地錦草中、高劑量組大鼠肝組織中α-SMA、TGF-β1陽性光密度值均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果見圖3、圖4和表4。

3.6 地錦草對(duì)HF大鼠肝組織中TNF-α、NF-κBp65mRNA表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，模型組大鼠肝組織中TNF-α、NF-κBp65mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，地錦草高劑量組大鼠肝組織中TNF-αmRNA相對(duì)表達(dá)量以及各給藥組大鼠肝組織中NF-κBp65mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見表5。

3.7 地錦草對(duì)HF大鼠肝組織中α-SMA及TNF-α/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，模型組大鼠肝組織中α-SMA、TNF-α蛋白表達(dá)水平及NF-κBp65蛋白的磷酸化水平均顯著升高（P＜0.01），IκBα蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠上述指標(biāo)均顯著改善（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果見圖5、表6。

4 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，肝臟從正常到HF乃至肝硬化是漸進(jìn)發(fā)展的，不同階段對(duì)應(yīng)的中醫(yī)病證不盡相同。中醫(yī)古籍雖無HF記載，但考究文獻(xiàn)，HF符合“肝積”“脅痛”“積聚”等病證的特征[12]?！鹅`樞·百病始生篇》記載“腸外有寒，汁沫與血相搏，則并合凝聚不得散，而積成矣”，因寒氣、水飲、痰飲、瘀血共同凝聚，積最基本的病理因素為“濕”和“瘀”。肝藏血，主疏泄，若因濕熱或外邪阻滯氣機(jī)，濕困氣阻熱擾而釀毒，則肝絡(luò)瘀阻，積聚已成，血行不暢[13]。若濕、熱、瘀、毒相互作用，互相影響，滯留蘊(yùn)結(jié)在肝，肝脈瘀滯則肝運(yùn)轉(zhuǎn)失司，則可形成肝積?！皾?熱-毒-郁-瘀-虛”是慢性肝病到HF的病機(jī)演化過程，有研究認(rèn)為，“濕、熱、瘀、毒”四者相互聯(lián)系，相互轉(zhuǎn)化與兼雜，并且提出“濕熱瘀毒是HF形成和加重的始動(dòng)因素和關(guān)鍵環(huán)節(jié)”假說[13]，而地錦草的功效十分契合“濕熱瘀毒”理論的治療方向。

腹腔注射CCl4是構(gòu)建HF大鼠模型的經(jīng)典方法。CCl4可以激活庫(kù)普弗細(xì)胞，導(dǎo)致TNF-α、IL-1、IL-6等多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子高表達(dá)，進(jìn)而誘導(dǎo)肝損傷和HF[14]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)地錦草干預(yù)后，HF大鼠血清中TNF-α、IL-17、IL-1β、IL-6水平顯著降低，表明地錦草具有抑制炎癥水平的作用。本研究病理結(jié)果顯示，經(jīng)地錦草干預(yù)后，HF大鼠肝組織的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肝細(xì)胞水腫情況均明顯好轉(zhuǎn)，且藍(lán)色膠原纖維明顯變少、變細(xì)，纖維間隔縮小，因此筆者推測(cè)地錦草具有恢復(fù)受損肝細(xì)胞、緩解HF進(jìn)程的作用。HYP是膠原組織的主要成分之一，是反映膠原組織代謝和纖維化程度的重要指標(biāo)[15]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)地錦草干預(yù)后，HF大鼠血清中HPY水平降低，表明地錦草有減少膠原沉積的作用；此外，HF大鼠血清中ATL、AST水平降低，說明地錦草可恢復(fù)肝功能，緩解肝損傷。NF-κB是一種異二聚體，該家族有p50、p52、p65（RelA）、RelB和c-rel5種蛋白。NF-κB激活經(jīng)典途徑是由TNF-α、IL-1等誘導(dǎo)的，該途徑依賴于NF-κB抑制因子激酶介導(dǎo)的IκBα磷酸化，導(dǎo)致其降解，從而使p50/p65NF-κB二聚體進(jìn)入細(xì)胞核并激活基因轉(zhuǎn)錄[16]。炎癥常被認(rèn)為是纖維化的重要環(huán)節(jié)，而NF-κB是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，可參與控制炎癥過程中許多基因的表達(dá)[16]。NF-κB通路可誘導(dǎo)多種促炎介質(zhì)的轉(zhuǎn)錄、HSC的激活和增殖，阻斷細(xì)胞因子誘導(dǎo)的HSC凋亡效應(yīng)[9]，激活多條信號(hào)通路來調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)組織纖維化[17]。通過抑制NF-κB信號(hào)通路的激活可以達(dá)到減輕HF和炎癥的目的[18―19]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)地錦草干預(yù)后，模型大鼠肝組織中TNF-α、α-SMA、TGF-β1蛋白表達(dá)以及TNF-α、NF-κBp65mRNA表達(dá)和NF-κBp65蛋白磷酸化水平均不同程度下調(diào)/下降，而IκBα蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)。這表明地錦草可通過降低炎癥水平，抑制NF-κBp65磷酸化，來抑制NF-κB信號(hào)通路的激活。

綜上所述，地錦草可能通過抑制TNF-α/NF-κB信號(hào)通路激活來緩解大鼠HF，但其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。