關(guān)鍵詞芍藥苷；潰瘍性結(jié)腸炎；氧化應(yīng)激；AMPK/Nrf2通路

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerativecolitis，UC）是一種反復(fù)發(fā)作的慢性炎癥性腸病，可從遠(yuǎn)端開始向近端延伸直至累及整個結(jié)腸，以腹瀉、腹痛、里急后重、黏液膿血便和體重減輕等為主要臨床表現(xiàn)。近年來，UC的患病率和復(fù)發(fā)率逐年上升，盡管其病因尚不清楚，但有研究證實，UC的發(fā)生與遺傳因素、環(huán)境因素、個體因素（機體炎癥、氧化應(yīng)激、免疫失衡）密切相關(guān)[1]。在UC炎癥反應(yīng)期，炎癥細(xì)胞可募集到損傷部位，使得耗氧量增加、氧自由基生成增多；同時，炎癥細(xì)胞還可分泌促炎因子，進(jìn)一步刺激活性氧的產(chǎn)生，從而導(dǎo)致機體發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，致使腸道黏膜屏障受損[1]。腺苷一磷酸活化的蛋白激酶（adenosinemonophosphate-activatedproteinkinase，AMPK）/核轉(zhuǎn)錄因子紅系2相關(guān)因子2（nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2，Nrf2）是重要的抗炎和抗氧化信號通路，激活此通路可減少促炎因子釋放、減輕機體氧化應(yīng)激損傷，從而緩解UC癥狀[2]。

目前，臨床治療UC的常規(guī)藥物效果有限且毒副作用大，患者復(fù)發(fā)率極高，而天然植物及其單體具有療效好、副作用少的優(yōu)點，備受學(xué)界關(guān)注[3]。芍藥苷作為中藥白芍的主要活性成分，在多種治療UC的方劑中廣泛存在，具有抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫等藥理活性[4]。本課題組前期研究表明，芍藥苷可降低UC小鼠血清中腫瘤壞死因子α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）和白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）等促炎因子水平，上調(diào)AMPK、自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（microtubule-associatedprotein1lightchain3，LC3）mRNA的表達(dá)，下調(diào)哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammaliantargetofrapamycin，mTOR）、p62mRNA的表達(dá)，增強細(xì)胞自噬，減輕UC小鼠的腸黏膜損傷，緩解UC癥狀[5]。考慮到芍藥苷具有較強的抗氧化作用，而氧化應(yīng)激是UC發(fā)生發(fā)展的重要因素之一[1]，故本研究擬從氧化應(yīng)激角度探討芍藥苷對UC小鼠的影響及潛在機制，以期為芍藥苷用于UC治療及相關(guān)藥物研發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括2720ThermalCycler型聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）儀、7300型實時熒光定量PCR儀（美國AppliedBiosystems公司），SPECTROstarNano型多功能酶標(biāo)儀（德國BMGLabtech公司），HT7700型透射電子顯微鏡（日本Hitachi公司），RM2016型病理切片機（上海徠卡儀器有限公司），PowerPac型電泳儀、小型電泳槽和轉(zhuǎn)印槽（美國Bio-Rad公司），OI600MF型全自動化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)（廣州光儀生物科技有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

芍藥苷對照品（批號S31585，純度＞98%）、AMPK抑制劑CompoundC的對照品（批號S24HS195965，純度＞98%）均購自上海源葉生物科技有限公司；葡聚糖硫酸鈉（dextransulfatesodium，DSS；批號S8634）購自美國MP公司；丙二醛（malondialdehyde，MDA）酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（批號YX-130401M）購自上海優(yōu)選生物科技有限公司；超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）試劑盒（批號S0101M）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathioneperoxidase，GSH-Px）試劑盒（批號S0059S）均購自上海碧云天生物技術(shù)股份有限公司；蘇木精-伊紅（HE）染液（批號G1005）購自北京索萊寶科技有限公司；BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒（批號AR1110）、鼠源β-肌動蛋白（β-actin）抗體（批號BM0627）均購自德國BosterBiological公司；兔源AMPK、Nrf2、血紅素加氧酶1（hemeoxygenase-1，HO-1）、閉合蛋白（occludin）、密封蛋白1（claudin-1）抗體和辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗兔、羊抗鼠IgG二抗（批號分別為10929-2-AP、16396-1-AP、10701-1-AP、27260-1-AP、10305-1-AP、SA00001-2、SA00001-1）均購自美國Proteintech公司；兔源磷酸化AMPK（phosphorylatedAMPK，p-AMPK）抗體（批號CY5608）購自美國Abways公司；高靈敏度ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒（批號20230406）購自南京建成生物工程研究所；電鏡固定液（批號G1102）購自武漢谷歌生物科技有限公司。

1.3 實驗動物

本研究選用SPF級雄性BALB/c小鼠56只，體重為（20±2）g，購自遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司，動物生產(chǎn)許可證號為SCXK（遼）2020-0001。所有動物均在溫度（20±5）℃、相對濕度30%～50%、每12h自然光照/黑暗循環(huán)條件下飼養(yǎng)。本實驗方案已通過長春中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物倫理委員會審批（批準(zhǔn)編號2023477）。

2 方法

2.1 造模、分組與給藥

所有小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機分為對照組，模型組，抑制劑組（CompoundC20mg/kg，劑量參考相關(guān)文獻(xiàn)[6]設(shè)置），芍藥苷低、中、高劑量組（芍藥苷12.5、25、50mg/kg，劑量根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果設(shè)置）和芍藥苷高+抑制劑組（芍藥苷50mg/kg+CompoundC20mg/kg），每組8只。除對照組外，其余各組小鼠均自由飲用4%DSS溶液5d以構(gòu)建UC模型[7]。隨后，芍藥苷各劑量組小鼠灌胃相應(yīng)劑量的芍藥苷（以水為溶劑，灌胃體積為0.2mL），并腹腔注射生理鹽水0.2mL；抑制劑組小鼠腹腔注射CompoundC藥液（以生理鹽水為溶劑，注射體積為0.2mL），并灌胃水0.2mL；對照組和模型組小鼠灌胃水0.2mL，并腹腔注射生理鹽水0.2mL；每天1次，連續(xù)7d。

2.2 小鼠體重記錄、結(jié)腸長度測量及標(biāo)本收集

實驗期間，每天稱定并記錄各組小鼠的體重。末次給藥24h后，以吸入CO2麻醉后將小鼠處死，分離其結(jié)腸，拍照并測量長度；以生理鹽水漂洗結(jié)腸后，隨機選取各組6只小鼠相同部位的結(jié)腸組織，裁剪到合適大小，于2min內(nèi)放入2.5%戊二醛溶液中固定，用于透射電鏡觀察。另取上述小鼠相同部位、相同長短的結(jié)腸組織，置于4%多聚甲醛溶液中固定，用于組織病理學(xué)分析；取剩余結(jié)腸組織，剪開清洗內(nèi)容物后，于－80℃下凍存，用于相關(guān)指標(biāo)檢測。

2.3 小鼠結(jié)腸組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測

隨機選取“2.2”項下各組小鼠凍存的結(jié)腸組織適量，加生理鹽水，勻漿，再于4℃下以3000r/min離心10min，取上清液。按照試劑盒說明書方法，使用酶標(biāo)儀檢測其中MDA含量及SOD、GSH-Px活性。

2.4 小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)形態(tài)觀察

隨機選取“2.2”項下各組小鼠固定于4%多聚甲醛溶液中的結(jié)腸組織適量，經(jīng)乙醇梯度脫水、常規(guī)石蠟包埋后切片（厚約4μm）。取切片，進(jìn)行HE染色，使用顯微鏡觀察其病理改變并進(jìn)行組織病理學(xué)評分（組織病理學(xué)評分＝黏膜水腫評分+炎癥細(xì)胞浸潤評分+上皮完整性評分+上皮增生比例評分），具體標(biāo)準(zhǔn)[7]見表1。

2.5 小鼠結(jié)腸組織中腸上皮細(xì)胞間緊密連接情況觀察

取“2.2”項下各組小鼠固定于2.5%戊二醛溶液中的結(jié)腸組織適量，以0.1mmol/L磷酸鹽緩沖液漂洗3次，用1%鋨酸固定液固定2h，再經(jīng)梯度乙醇和丙酮脫水、滲透、包埋后切片（厚60～80nm）。取切片，進(jìn)行醋酸-枸櫞酸鉛雙重染色，使用透射電子顯微鏡觀察其結(jié)腸組織中腸上皮細(xì)胞間緊密連接情況并采集圖像。

2.6 小鼠結(jié)腸組織中AMPK、Nrf2mRNA表達(dá)的檢測

采用實時熒光定量PCR法檢測。隨機選取“2.2”項下各組小鼠凍存的結(jié)腸組織適量，以TRIzol法提取總RNA，經(jīng)濃度、純度檢測后，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以上述cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴增。反應(yīng)體系共20μL，包括cDNA模板2μL、正/反向引物各1μL、2×TalentqPCRPreMix10μL、10mmol/LdNTPMixture1μL、Oligo-dT0.5μL、核糖核酸酶抑制劑0.5μL、AMV逆轉(zhuǎn)錄酶0.5μL、無核糖核酸酶水3.5μL。反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性15min；95℃變性15s，60℃退火31s，72℃延伸31s，共40個循環(huán)。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）為內(nèi)參，按照2－ΔΔCt法計算AMPK、Nrf2mRNA的相對表達(dá)量，結(jié)果以對照組為參照進(jìn)行歸一化處理。本研究所用正/反向引物由生工生物工程（上海）股份有限公司設(shè)計、合成，具體信息見表2。

2.7 小鼠結(jié)腸組織中AMPK、Nrf2、HO-1、occludin、claudin-1蛋白表達(dá)的檢測

隨機選取“2.2”項下各組小鼠凍存的結(jié)腸組織適量，剪碎后置于1.5mL離心管中，加入組織裂解液，充分勻漿，以12000r/min離心10min，取上清液，采用BCA法進(jìn)行蛋白定量，并于95℃加熱10min使變性。取變性蛋白，進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離并轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，以封閉液封閉15min；以PBST緩沖液洗膜后，加入β-actin、AMPK、p-AMPK、Nrf2、HO-1、occludin、claudin-1一抗（稀釋比例分別為1∶2000、1∶2000、1∶2000、1∶8000、1∶2000、1∶2000、1∶2000），于4℃孵育過夜；以PBST緩沖液洗膜后，加入相應(yīng)二抗（稀釋比例均為1∶1000），于室溫孵育1h；用高靈敏度ECL化學(xué)發(fā)光試劑顯影，于化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)上成像。使用ImageJ軟件分析條帶灰度值，以目的蛋白與內(nèi)參蛋白β-actin的條帶灰度值比值表示目的蛋白的相對表達(dá)量，以p-AMPK與AMPK蛋白的灰度值比值作為AMPK蛋白的磷酸化水平。

2.8 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗。檢驗水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 芍藥苷對小鼠體重的影響

對照組小鼠飲食正常，體重呈逐漸上升趨勢；模型組和抑制劑組小鼠的體重總體呈下降趨勢；經(jīng)芍藥苷干預(yù)后，小鼠體重呈逐漸上升趨勢。第12天，模型組小鼠的體重較對照組顯著降低（P＜0.01）；芍藥苷各劑量組小鼠的體重均較模型組顯著升高（P＜0.05），而抑制劑組與模型組相當(dāng)（P＞0.05）；芍藥苷高+抑制劑組小鼠的體重較芍藥苷高劑量組顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見圖1。

3.2 芍藥苷對小鼠結(jié)腸長度的影響

與對照組比較，模型組小鼠的結(jié)腸長度顯著縮短（P＜0.01）；與模型組比較，芍藥苷各劑量組小鼠的結(jié)腸長度均顯著延長（P＜0.05），而抑制劑組則與模型組相當(dāng)（P＞0.05）；與芍藥苷高劑量組比較，芍藥苷高+抑制劑組小鼠的結(jié)腸長度顯著縮短（P＜0.01）。結(jié)果見圖2。

3.3 芍藥苷對小鼠結(jié)腸組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響

與對照組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織中MDA含量顯著升高，SOD、GSH-Px活性均顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，芍藥苷各劑量組小鼠結(jié)腸組織中MDA含量均顯著降低，SOD、GSH-Px活性均顯著升高（P＜0.05）；抑制劑組小鼠除SOD活性顯著降低（P＜0.05）外，其余指標(biāo)均與模型組相當(dāng)（P＞0.05）。與芍藥苷高劑量組比較，芍藥苷高+抑制劑組小鼠結(jié)腸組織中SOD、GSH-Px活性均顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見表3。

3.4 芍藥苷對小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)形態(tài)的影響

對照組小鼠結(jié)腸組織上皮完整，杯狀細(xì)胞排列整齊，隱窩結(jié)構(gòu)完整；模型組、抑制劑組小鼠結(jié)腸組織有不同程度的損傷，可見黏膜水腫、上皮增生、大量炎癥細(xì)胞浸潤、結(jié)腸上皮潰瘍明顯且隱窩受損嚴(yán)重；經(jīng)藥物干預(yù)后，芍藥苷各劑量組小鼠結(jié)腸各層次結(jié)構(gòu)均有明顯改善，杯狀細(xì)胞未見明顯減少，隱窩結(jié)構(gòu)基本正常，僅有少量炎癥細(xì)胞浸潤；而芍藥苷高+抑制劑組小鼠結(jié)腸組織病理改變較芍藥苷高劑量組嚴(yán)重。結(jié)果見圖3A～3G。

與對照組比較，模型組小鼠的組織病理學(xué)評分顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，芍藥苷各劑量組小鼠的組織病理學(xué)評分顯著降低（P＜0.05），而抑制劑組的組織病理學(xué)評分顯著升高（P＜0.05）；與芍藥苷高劑量組比較，芍藥苷高+抑制劑組小鼠的組織病理學(xué)評分顯著升高（P＜0.01）。結(jié)果見圖3I。

3.5 芍藥苷對小鼠結(jié)腸組織中腸上皮細(xì)胞間緊密連接的影響

對照組小鼠結(jié)腸組織中腸上皮細(xì)胞間緊密連接結(jié)構(gòu)完整，腸上皮細(xì)胞表面的微絨毛排列整齊，細(xì)胞間隙狹窄。模型組、抑制劑組小鼠結(jié)腸組織中腸上皮細(xì)胞間緊密連接結(jié)構(gòu)松散且不完整，微絨毛稀疏、排列雜亂無章、長度縮短，細(xì)胞間隙增寬，細(xì)胞通透性增加。芍藥苷各劑量組小鼠結(jié)腸組織中腸上皮細(xì)胞間緊密連接的受損情況均有不同程度改善，連接緊密度有所增加，細(xì)胞間隙有所縮窄，微絨毛排列整齊。芍藥苷高+抑制劑組小鼠結(jié)腸組織中腸上皮細(xì)胞間緊密連接的受損情況較芍藥苷高劑量組嚴(yán)重。結(jié)果見圖4。

3.6 芍藥苷對小鼠結(jié)腸組織中AMPK、Nrf2mRNA表達(dá)的影響

與對照組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織中AMPK、Nrf2mRNA的表達(dá)均顯著下調(diào)（P＜0.01）；與模型組比較，芍藥苷各劑量組小鼠結(jié)腸組織中AMPK、Nrf2mRNA的表達(dá)均顯著上調(diào)（P＜0.05），而抑制劑組上述mRNA的表達(dá)均顯著下調(diào)（P＜0.05）；與芍藥苷高劑量組比較，芍藥苷高+抑制劑組小鼠結(jié)腸組織中AMPK、Nrf2mRNA的表達(dá)均顯著下調(diào)（P＜0.01）。結(jié)果見圖5。

3.7 芍藥苷對小鼠結(jié)腸組織中p-AMPK、AMPK、Nrf2、HO-1、occludin、claudin-1蛋白表達(dá)的影響

與對照組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織中AMPK蛋白的磷酸化水平和Nrf2、HO-1、occludin、claudin-1蛋白的表達(dá)均顯著降低或下調(diào)（P＜0.01）；與模型組比較，芍藥苷各劑量組小鼠結(jié)腸組織中AMPK蛋白的磷酸化水平和Nrf2、HO-1、occludin、claudin-1蛋白的表達(dá)均顯著升高或上調(diào)（P＜0.01），而抑制劑組上述蛋白的磷酸化水平和表達(dá)均顯著降低或下調(diào)（P＜0.01）；與芍藥苷高劑量組比較，芍藥苷高+抑制劑組小鼠結(jié)腸組織中AMPK蛋白的磷酸化水平和Nrf2、occludin、claudin-1蛋白的表達(dá)均顯著降低或下調(diào)（P＜0.01）。結(jié)果見圖6、表4。

4 討論

UC是一種常見的消化系統(tǒng)疾病，近年來隨著人們飲食結(jié)構(gòu)的變化，其患病率逐年增加。由于UC具有病因復(fù)雜和病情反復(fù)發(fā)作的特征，現(xiàn)有藥物難以將其有效治愈，因此迫切需要開發(fā)安全有效的新藥物。本研究基于AMPK/Nrf2信號通路初步探討了芍藥苷對UC小鼠氧化應(yīng)激的影響及潛在機制，旨在為芍藥苷的應(yīng)用和UC治療藥物的研發(fā)提供參考。

DSS自由飲用法具有操作簡便、重復(fù)性好、成功率高、病變與人類UC相似的優(yōu)點，已被廣泛應(yīng)用于UC相關(guān)研究領(lǐng)域[8]。研究指出，DSS可通過損傷腸上皮細(xì)胞間的緊密連接和基底膜，從而增加腸道滲透性，使病原體進(jìn)入腸道壁內(nèi)，激活免疫炎癥反應(yīng)，最終誘導(dǎo)UC[2]。研究證實，腸道上皮功能障礙是UC發(fā)生和復(fù)發(fā)的重要因素，而緊密連接則是決定腸道上皮屏障功能能否正常發(fā)揮的關(guān)鍵[9]。緊密連接涉及occuludin、claudin-1、閉鎖小帶蛋白及連接黏附分子等結(jié)構(gòu)蛋白。其中，occludin是一種跨膜蛋白，不僅參與腸上皮滲透性屏障的形成、小分子物質(zhì)運輸?shù)恼{(diào)節(jié)、細(xì)胞極性的維持，而且參與細(xì)胞黏附的調(diào)節(jié)和細(xì)胞信號的接收、傳遞；claudin-1與occludin結(jié)構(gòu)類似，也是一種跨膜蛋白，參與構(gòu)成腸道滲透性屏障，兩者均是腸道上皮屏障完整性的標(biāo)志物[10]。本研究結(jié)果顯示，與對照組比較，模型組小鼠結(jié)腸長度顯著縮短，體重有所減輕，結(jié)腸組織病理學(xué)評分顯著升高，結(jié)腸組織中occludin、claudin-1蛋白的表達(dá)均顯著下調(diào)；經(jīng)芍藥苷干預(yù)后，小鼠結(jié)腸長度有所恢復(fù)，體重有所增加，結(jié)腸病理學(xué)損傷得以減輕且組織病理學(xué)評分顯著降低，occludin、claudin-1蛋白的表達(dá)均顯著上調(diào)。透射電子顯微鏡觀察結(jié)果也顯示，經(jīng)芍藥苷干預(yù)后，小鼠腸上皮細(xì)胞間緊密連接的受損情況得以明顯改善，連接緊密度增加，細(xì)胞間隙縮窄，微絨毛排列整齊，提示芍藥苷能修復(fù)結(jié)腸組織中腸上皮細(xì)胞的緊密連接。

AMPK/Nrf2是調(diào)控機體氧化還原穩(wěn)態(tài)的重要信號通路。當(dāng)機體發(fā)生氧化應(yīng)激時，作為氧化還原感應(yīng)器的Nrf2與Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1迅速解離，然后轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核并與抗氧化相應(yīng)元件結(jié)合，促進(jìn)抗氧化分子（HO-1、SOD和GSH-Px等）的合成和釋放[11]。其中，HO-1作為抗氧化酶類的重要一員，主要參與催化血紅素的分解代謝，由此產(chǎn)生的膽綠素、膽紅素具有清除活性氧的作用；MDA是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，其水平的高低可反映細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的嚴(yán)重程度；SOD作為一種重要的內(nèi)源性抗氧化劑，可保護(hù)組織免受活性氧的損傷；GSH-Px作為一種體內(nèi)廣泛存在的過氧化物分解酶，其能催化有毒的谷胱甘肽轉(zhuǎn)變?yōu)闊o毒的氧化型谷胱甘肽，從而使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能免受過氧化物的損傷[12―13]。本研究結(jié)果顯示，與對照組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織中MDA含量顯著升高，SOD、GSH-Px活性均顯著降低，Nrf2、HO-1蛋白及Nrf2mRNA的表達(dá)均顯著下調(diào)；經(jīng)芍藥苷干預(yù)后，小鼠結(jié)腸組織中MDA含量顯著降低，SOD、GSH-Px活性均顯著升高，Nrf2、HO-1蛋白和Nrf2mRNA的表達(dá)均顯著上調(diào)，提示芍藥苷可增加UC小鼠的抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激。相關(guān)研究表明，激活Nrf2、HO-1等抗氧化應(yīng)激蛋白可有效緩解UC的病情進(jìn)展[2]，本研究上述結(jié)果也支持這一觀點。

AMPK是細(xì)胞能量穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)器，參與代謝、氧化應(yīng)激、炎癥、凋亡和自噬等生理病理過程的調(diào)節(jié)。已有研究表明，芹菜素、芍藥苷等多種活性成分可通過激活A(yù)MPK（即使其磷酸化）來促進(jìn)Nrf2核易位，增加核內(nèi)Nrf2的積累，促進(jìn)抗氧化酶的表達(dá)，減輕氧化應(yīng)激，從而治療哮喘和膿毒癥等多種疾病[14]?；诖?，本研究采用AMPK抑制劑CompoundC進(jìn)行干預(yù)，考察芍藥苷緩解UC小鼠氧化應(yīng)激的作用是否與調(diào)節(jié)AMPK/Nrf2通路有關(guān)。結(jié)果顯示，當(dāng)腹腔注射抑制劑后，小鼠結(jié)腸組織病理改變、腸上皮細(xì)胞間緊密連接程度及各定量指標(biāo)與模型組相當(dāng)或更差；在灌胃高劑量芍藥苷的基礎(chǔ)上聯(lián)用抑制劑后，芍藥苷對UC小鼠氧化應(yīng)激的改善作用則被抑制劑顯著逆轉(zhuǎn)，提示芍藥苷可通過激活A(yù)MPK/Nrf2通路來抑制氧化應(yīng)激，從而改善小鼠UC。

綜上所述，芍藥苷可修復(fù)小鼠的腸上皮細(xì)胞損傷，改善腸上皮細(xì)胞間緊密連接，并上調(diào)相關(guān)蛋白、促抗氧化分子的表達(dá)和釋放，從而改善UC；其作用機制可能與激活A(yù)MPK/Nrf2抗氧化通路有關(guān)。但芍藥苷對UC的干預(yù)作用可能涉及其他通路，尚需進(jìn)一步完善。