宋海浪

【摘要】 目的 建立口炎清片綠原酸含量測(cè)定的方法。方法 用C18柱，乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)327 nm。結(jié)果 在0.018~0.090 mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.998 6）。平均回收率為99.61%，RSD為1.16%（n=6）。結(jié)論 方法重復(fù)性好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

【關(guān)鍵詞】 口炎清片；綠原酸；高效液相色譜法

Assay of chlorogenic acid in kouyanqing tablets by HPLC

SONG Hai-lang.Guangzhou Yongfutan pharmaceutical Co.Ltd.，Guangzhou 510978，China

【Abstract】 Objective A method was established for the assay of Chlorogenic acid in Kouyanqing tablets.Methods The C18 column was used and acetonitrile-0.4%phosphoric acid solution (13:87) as mobile phase，detected at 327 nm.Results The linear range was 0.018~0.090 mg/ml (r=0.9986).The average recovery rate was 99.61%,RSD1.16%(n=6).Conclusion The method is accurate,reliable and with good repeatability.

【Key words】 Kouyanqing tablets；Chlorogenic acid；HPLC

1 儀器與試藥

1.1 儀器 ESJ182-4電子天平（沈陽(yáng)龍騰電子有限公司），LC-10AT液相色譜儀（島津儀器有限公司），超聲波發(fā)生器（天津奧特賽斯儀器有限公司），DimensionsC18色譜柱 。

1.2 試劑與試藥 綠原酸對(duì)照品（批號(hào)為：110753-200212由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用，乙腈為色譜純，水為重蒸水（自制），其他試劑為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱 C₁₈硅烷鍵合硅膠（5 μm，4.6×250 mm）；流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）；流速1.0 ml/min；進(jìn)樣量10 μl；檢測(cè)波長(zhǎng)327 nm。

在此條件下，出峰時(shí)間適當(dāng)，色譜峰峰形理想，分離度好，既可以保證樣品的測(cè)定，也可以排除其他組分的干擾。理論

板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1 ml含綠原酸43.2 mg 的溶液（10℃以下保存），即得。色譜圖如圖1。

2.3 供試品溶液的制備 取本品裝量差異項(xiàng)下樣品10片，研細(xì)，取0.5 g，精密稱定，精密加入50%甲醇40 ml，放置15 min后，振搖，超聲處理5 min，使完全溶解，用50%甲醇定容至50 ml量瓶中，作為供試品溶液。色譜圖如圖2。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 取按處方比例及制備工藝制備的不含金銀花（綠原酸）的陰性對(duì)照樣品，照2.3項(xiàng)下操作，同法制成陰性對(duì)照溶液。

2.5 空白干擾試驗(yàn) 吸取陰性樣品10 μl進(jìn)樣，觀察在樣品峰的保留時(shí)間處是否有雜質(zhì)峰。測(cè)得結(jié)果表明：在樣品保留時(shí)間處無(wú)明顯雜質(zhì)峰干擾。色譜圖見(jiàn)圖3。

2.6 線性關(guān)系考察 分別配制對(duì)照品溶液 0.018、0.036、0.054、0.072、0.090 mg/ml進(jìn)樣10 μl，測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到回歸方程。見(jiàn)表1。

結(jié)果表明綠原酸在0.018~0.090 mg/ml之間有良好的線性關(guān)系。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別取同一份供試品溶液10 μl，按上述色譜條件每隔一定時(shí)間測(cè)定其含量，考察樣品溶液的穩(wěn)定性，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，見(jiàn)表2。

2.8 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，進(jìn)樣10 μl,重復(fù)進(jìn)樣6次測(cè)定峰面積計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。見(jiàn)表3。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取樣品6份，制成供試品溶液，按已擬定的色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。見(jiàn)表4。

1.10 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取已知含量的口炎清片(050301) 10片，研細(xì)，取六份該粉末，每份0.26 g，精密稱定，分別加入綠原酸對(duì)照品（0.36 mg/ml）4 ml。加入50%甲醇40 ml，放置15 min后，振搖，超聲處理5 min，使完全溶解，用50%甲醇定容至50 ml量瓶中，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。按上述色譜條件測(cè)定，以下式計(jì)算回收率，結(jié)果列于表5。

回收率%=（實(shí)測(cè)綠原酸量-樣品中含量）/加入量×100%

2.11 樣品中含量測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μl依上述色譜條件測(cè)定,計(jì)算含量。樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表6。

經(jīng)對(duì)5批同一生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的樣品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果表明，不同批次樣品中綠原酸含量為2.41~2.55 mg/片，平均含量為2.48 mg/片，含量波動(dòng)不大。

3 討論

具文獻(xiàn)資料報(bào)道，口炎清片中綠原酸的含量測(cè)定方法較為成熟，大都采用HPLC法。流動(dòng)相多為乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87），檢測(cè)波長(zhǎng)327 nm。根據(jù)口炎清片處方組成的特點(diǎn)，有目的篩選了乙腈-0.4%磷酸溶液（15∶85）和乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87），經(jīng)實(shí)驗(yàn)確證采用乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）為流動(dòng)相，綠原酸的分離效果好，且出峰時(shí)間較適當(dāng)。選擇綠原酸的最大吸收波長(zhǎng)317 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，檢測(cè)靈敏度高。

本論文的研究結(jié)果證明，綠原酸的含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，回收率高，是檢測(cè)含金銀花或山銀花的制劑中綠原酸含量較為理想的方法。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典一部.化學(xué)工業(yè)出版社，2005：152.

［2］ 王寶琴.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究.中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1994：69.