李靖華 柳克曄 王曉春 楊季紅

乳腺癌是一種激素依賴性腫瘤，多數(shù)研究認(rèn)為其發(fā)病率的增加與雌激素有關(guān)［1］，而關(guān)于雌激素受體(ER)和孕激素受體(PR)的研究也顯示，ER、PR是乳腺癌的獨(dú)立預(yù)后因子［2］，針對(duì)它們的治療也已經(jīng)成為乳腺癌的一線內(nèi)分泌治療方案［3］。然而女性乳腺癌的發(fā)病率顯示絕經(jīng)后女性亦是高發(fā)年齡段，而此時(shí)女性體內(nèi)雌激素大量減少，因此除了雌激素，還可能有其他因素導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生。雄激素在一些研究中顯示是絕經(jīng)后女性乳腺癌發(fā)病的高發(fā)因素，且雄激素大多通過(guò)雄激素受體(AR)發(fā)揮作用［4］，但目前研究結(jié)果不盡一致［5，6］。因此我們應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)對(duì)乳腺癌組織進(jìn)行AR檢測(cè)，了解AR與乳腺癌臨床特點(diǎn)、病理指標(biāo)的關(guān)系，為乳腺癌的預(yù)后判斷及內(nèi)分泌治療積累資料、提供依據(jù)。

1 資料與方法

1．1 一般資料 收集河北大學(xué)附屬醫(yī)院普外科、腫瘤外科2009年6月至2010年3月乳腺癌確診但，術(shù)前未行任何治療的病例60例，年齡33～75歲，平均年齡(51±9)歲。乳腺癌手術(shù)切除標(biāo)本，70%乙醇固定。其中組織學(xué)分級(jí)Ⅰ級(jí)8例，Ⅱ級(jí)36例，Ⅲ級(jí)16例。26例乳腺癌伴腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

1．2 方法 將固定于70%乙醇中的腫瘤組織標(biāo)本經(jīng)0．9氯化鈉溶液沖洗后，放在150目的銅網(wǎng)上，下置一平皿，用眼科剪刀將組織剪碎，用眼科鑷子輕搓組織，邊搓邊用0．9氯化鈉溶液沖洗，經(jīng)300目尼龍網(wǎng)濾除細(xì)胞團(tuán)塊，收集濾下的細(xì)胞懸液。1 000 r/min，離心5 min，棄上清;加入1 ml PBS將細(xì)胞懸浮計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107/ml時(shí)，此懸浮液為單分散細(xì)胞懸液。將單細(xì)胞懸液分裝3管(陰性、陽(yáng)性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組)，實(shí)驗(yàn)組加入雄激素受體抗體100μl，充分振搖，36℃避光反應(yīng)30 min;實(shí)驗(yàn)組及陽(yáng)性對(duì)照組各加入二抗100μl，避光反應(yīng)，然后進(jìn)行FCM檢測(cè)。兔抗多克隆雄激素受體抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1．3 結(jié)果判定 AR經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)后所得結(jié)果為具體數(shù)值，無(wú)需判定。對(duì)標(biāo)本組織同時(shí)行免疫組化檢測(cè)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為:ER、PR陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞胞核呈棕黃色顆粒，Her-2陽(yáng)性染色位于胞膜，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為胞膜染色或胞膜、胞漿同時(shí)染色。每張切片中陽(yáng)性細(xì)胞＜25%或無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞＞25%為陽(yáng)性。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 11．5統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以ˉx±s表示多組間比較用方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用直線相關(guān)和等級(jí)相關(guān)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 AR在乳腺癌中的表達(dá) AR值最小值為291．79，最大值為512．49，平均為(361 ±58)。

2．2 乳腺癌組織中的AR表達(dá)與臨床特點(diǎn)、病理參數(shù)的相關(guān)性60例乳腺癌組織中AR的不同表達(dá)與腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、月經(jīng)情況、ER、PR、HER-2比較情況見(jiàn)表1。我們得到以下結(jié)果:AR的表達(dá)與腫瘤大小有關(guān)聯(lián)，腫瘤≤2 cm者，雄激素受體表達(dá)較高(427±42)，與2～5 cm腫瘤及＞5 cm腫瘤(343±32，314±29)相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0．000);其表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)聯(lián)，組織學(xué)分級(jí)

Ⅰ級(jí)者雄激素受體表達(dá)值較高(447±50)，與Ⅱ、Ⅲ級(jí)者(357±31，322±38)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0．000)。與ER蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0．347，P=0．000)。與 TNM分期、絕經(jīng)與否，PR、Her-2及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況不相關(guān)(P＞0．05)。

表1 AR表達(dá)與乳腺癌臨床特點(diǎn)、病理指標(biāo)的關(guān)系±s

表1 AR表達(dá)與乳腺癌臨床特點(diǎn)、病理指標(biāo)的關(guān)系±s

項(xiàng)目 AR t或F值 P值314±29絕經(jīng)是(n=36) 370 ±52 0．650 0．521否(n=24) 356±48組織學(xué)分級(jí)Ⅰ(n=8) 447±50Ⅱ(n=36) 357 ±31 15．075 0．000Ⅲ(n=16) 322±38 ER陽(yáng)性(n=36) 389 ±46 3．975 0．000陰性(n=24) 320±27 PR陽(yáng)性(n=40) 352 ±54 －1．252 0．221陰性(n=20) 380±64 Her-2陽(yáng)性(n=30) 373 ±63 1．093 0．284陰性(n=30) 350±51淋巴轉(zhuǎn)移有(n=26) 349 ±52 －1．403 0．171無(wú)(n=34) 378±62Ⅰ期(n=6) 357±27 TNMⅡ期(n=46) 367 ±53 0．554 0．581Ⅲ期(n=8) 334±39≤2(n=18) 427±42腫瘤大小(cm)＞2且≤5(n=28) 343 ±32 21．849 0．000＞5(n=14)

3 討論

AR屬于核受體超家族成員，主要存在于靶細(xì)胞的核內(nèi)。人AR基因定位于X染色體長(zhǎng)臂(Xq11～12)，含有8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子，全長(zhǎng)約90 kb，編碼918個(gè)氨基酸。AR有4個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，分別是低保守的氨基端結(jié)構(gòu)域、高保守的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)與高保守的羧基端配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，不同的結(jié)構(gòu)域有不同的功能［7］。AR調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄活化主要是通過(guò)氨基端和羧基端兩個(gè)結(jié)構(gòu)域來(lái)完成的。

本研究發(fā)現(xiàn)，AR表達(dá)與腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)呈負(fù)相關(guān)。即腫瘤越小、組織學(xué)分級(jí)越低，AR的表達(dá)越高，我們的研究結(jié)果與 Ogawa 等［8，9］的研究一致。Ogawa 等［8］應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)227例原發(fā)性乳腺癌中AR的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)越小的腫瘤AR陽(yáng)性率越高(P=0．045)，Monifar等［9］應(yīng)用抗 AR 單克隆抗體對(duì)乳腺癌標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)AR在Ⅰ級(jí)的腫瘤表達(dá)為88%，在Ⅱ級(jí)和Ⅲ級(jí)的腫瘤中分別為71%和47%。表明AR的高表達(dá)可能預(yù)示腫瘤惡性程度較低。

我們的研究還發(fā)現(xiàn)，AR的表達(dá)與ER的陽(yáng)性表達(dá)率呈正相關(guān)，即ER陽(yáng)性者AR的表達(dá)高，與文獻(xiàn)報(bào)道相似［8，9］。Ogawa等［8］研究發(fā)現(xiàn) AR 與 ER 表達(dá)相關(guān)(P=0．027)。Monifar等［9］的研究表明:90%分化Ⅰ級(jí)的侵襲性癌與55%分化Ⅱ級(jí)的侵襲性癌表現(xiàn)為ER+/AR+，而絕大多數(shù)分化Ⅲ級(jí)的侵襲性癌表現(xiàn)為ER-/AR-。因?yàn)槟壳耙话阏J(rèn)為ER的表達(dá)是預(yù)后良好與否的指標(biāo)，即ER陽(yáng)性者預(yù)后較好，而AR的表達(dá)又與ER呈正相關(guān)，所以AR的高表達(dá)也可能預(yù)示著預(yù)后良好。國(guó)外文獻(xiàn)已有相關(guān)報(bào)道［4，10］。Agrawal等［10］研究表明 AR 陽(yáng)性者 5 年內(nèi)的局部復(fù)發(fā)率為22．6%(48/212)，陰性者的局部復(fù)發(fā)率為52．2%(144/276)。在所有局部復(fù)發(fā)患者中，AR陽(yáng)性者所占比率為25%，明顯低于AR陰性者(占75%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0．023)。Shippinger等［4］的研究也有相似發(fā)現(xiàn)，即 AR 陽(yáng)性患者復(fù)發(fā)后的平均生存時(shí)間(21．89個(gè)月)高于AR陰性患者(11．99月)。我們的研究還需進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪，才能得出預(yù)后結(jié)論。我們的研究沒(méi)有發(fā)現(xiàn)AR與Her-2、PR、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和絕經(jīng)與否有關(guān)。

1 Chlebowski RT，Kuller LH，Prentice RL，et al．Breast cancer after use of estrogen plus progestin in postmenopausal women．N Engl JMed，2009，360:573-587．

2 Chevallier B，Heintzmann F，Mosseri V，et al．Prognostic value of estrogen and progesterone receptors in operable breast cancer．Results of a univariate and multivariate analysis．Cancer，1988，62:2517-2524．

3 Gnant M，Mlineritsch B，Schippinger W，et al．Endocrine therapy plus zoledronic acid in premenopausal breast cancer．N Engl JMed，2009，360:679-691．

4 ShippingerW，Regitnig P，Dandachi N，et al．Evaluation of the prognostic significance of androgen receptor expression in metastatic breast cancer．Virchows Arch，2006，449:24-30．

5 Carreno G，Del Casar JM，Corte MD，et al．Local recurrence after mastectomy for breast cancer:analysis of clinicopathological，biological and prognostic charactersitics．Breast Cancer Res Treat，2006，6:43-48．

6 Allegra JC，Woodcock T，Woolf S，et al．A randomized trial comparing mitoxantrone with doxorubicin in patients with stage Ⅳ breast cancer．Invest New Drugs，1985，3:153-161．

7 Kumar R，Johnson BH，Thampson EB．Overview of the structural basis for transcription regulation by nuclear hormone receptors．Essays Biochem，2004，40:27-39．

8 Ogawa Y，Hai E，Matsumoto K，et al．Androgen receptor expression in breast cancer:relationship with clinicopathological factors and biomarkers．Int JClin Oncol，2008，13:431-435．

9 Moinfar F，Okcu M，Tsybrovskyy O，et al．Androgen receptors frequently are expressed in breast carcinomas potential relevance to new therapeutic strategies．Cancer，2003，98:703-711．

10 Agrawal A K，Jilen M，Grzebieniak Z，et al．Androgen receptors as a prognostic and predictive factor in breast cancer．Folia Histochem Cytobiol，2008，46:269-276．