王先友,孔 軍,樊豐春

(1.河南大學(xué)藥學(xué)院,河南 開封 475004;2.河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院,河南 開封 475004)

HPLC法測定三七血傷寧散中人參皂苷Rg1的含量

王先友1,孔 軍2,樊豐春1

(1.河南大學(xué)藥學(xué)院,河南 開封 475004;2.河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院,河南 開封 475004)

目的:建立用HPLC法測定三七血傷寧散中人參皂苷Rg1的含量的方法。方法:以 Hypersil-ODS柱(4.6 mm×200 mm,5 μ m)為色譜柱;甲醇-水(50∶50)為流動相,流速:1.0mL/min;檢測波長:203nm。結(jié)果:人參皂苷Rg1在10.0～100.0μ g/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,其線性方程為Y=5455.7 X-2484(n=6,r=0.9997),回收率為99.8%,RSD=0.48%(n=6)。結(jié)論:HPLC法測定三七血傷寧散中人參皂苷Rg1的含量線性關(guān)系良好、精密度較好、準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性好,可用于該散劑的質(zhì)量控制。

三七血傷寧散;人參皂苷Rg1;高效液相色譜法;含量測定

三七血傷寧散由三七、重樓、制草烏、大葉紫珠提取物、山藥、黑紫藜蘆、冰片及朱砂組成。具有止血鎮(zhèn)痛,祛瘀生新之功效。用于瘀血阻滯、血不歸經(jīng)之各種血證及瘀血腫痛等。三七為君藥,且為貴重藥材。查閱有關(guān)文獻(xiàn),該制劑中三七的質(zhì)量控制未見報導(dǎo)。人參皂苷Rg1為三七的有效成分之一,我們參考其他藥物中人參皂苷Rg1的含量測定方法[1-2],建立了測定其含量的HPLC法,并進(jìn)行了方法學(xué)考察,為有效控制該制劑的質(zhì)量提供了有效途徑。結(jié)果表明,使用該法測定時,其線性關(guān)系好、準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性好、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好。

1 儀器與試劑

LC-10AT型高效液相色譜儀(日本島津);Hypersil-ODS(4.6 mm ×200 mm,5 μ m)色譜柱;人參皂苷Rg1對照品(自制,并經(jīng)1HnmR和13CnmR圖譜驗證);三七血傷寧散(市售);甲醇(色譜純);其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Hypersil-ODS柱(4.6 mm×200 mm,5 μ m);流動相:甲醇 -水 (50∶50);流速:1.0mL/min;檢測波長 :203nm,柱溫 :室溫;進(jìn)樣量 :20 μ L。在此色譜條件下,得到人參皂苷Rg1的對照品溶液及供試品溶液的HPLC圖譜(見圖1)。以人參皂苷Rg1計算理論塔板數(shù)不低于4000。

圖1 人參皂苷Rg1的HPLC圖譜

2.2 實驗溶液的制備

對照品溶液的制備:精密稱取人參皂苷Rg1對照品5.00mg于50mL容量瓶中,加流動相適量使溶解,然后用流動相稀釋至刻度,搖勻即得100 μ g/mL的對照品儲備液。

供試品溶液的制備:精密稱取三七血傷寧散1.0053 g,置50mL容量瓶中,加流動相適量,超聲提取30min,冷卻至室溫,用流動相定容,靜置,用0.45 μ m微孔濾膜濾過,即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系 精密吸取人參皂苷Rg1對照品溶液(100 μ g/mL)1.00 、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL至10mL容量瓶中,加流動相至刻度,搖勻,制成10.0～100.0 μ g/mL的對照品溶液。各取20 μ L注入高效液相色譜儀,按2.1項下色譜條件進(jìn)行測定(n=3)。以峰面積Y對濃度X進(jìn)行線性回歸,得回歸方程為:Y=5455.7 X-2484(n=6,r=0.9997)。結(jié)果表明,人參皂苷Rg1在10.0～100.0 μ g/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度實驗 取線性關(guān)系項下的人參皂苷Rg1對照品溶液(50 μ g/mL)重復(fù)進(jìn)樣 6 次,測定其峰面積,得RSD為0.79%(n=6)。結(jié)果表明,該法精密度較好。

2.3.3 重復(fù)性實驗 取同一批樣品,按2.2項下方法配制樣品溶液 6份,取每份溶液20 μ l進(jìn)樣,記錄色譜圖,測得人參皂苷峰面積的RSD為0.83%。表明該法重復(fù)性較好。

2.3.4 穩(wěn)定性實驗 取供試品溶液,分別于0、2、4、8、12、24 h 各進(jìn)樣 20 μ l,測得各峰面積的 RSD=0.87%。結(jié)果表明,供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 回收率實驗 精密稱取已知含量(4.033mg/g)的三七血傷寧散供試品約 0.25 g(批號:080722)6份,準(zhǔn)確加入人參皂苷Rg1對照品適量,按供試品溶液的制備方法,制備加樣回收供試品溶液。測得平均回收率為99.8%,RSD=0.48%。結(jié)果顯示,準(zhǔn)確度較好。

表1 回收率實驗結(jié)果

2.3.6 樣品的含量測定 取3個批號的樣品溶液20 μ l進(jìn)樣(n=3),測得結(jié)果見表 2。

表2 三七血傷寧散中人參皂苷Rg1的含量

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

人參皂苷Rg1中沒有共軛雙鍵,只有末端紫外吸收;結(jié)合文獻(xiàn)[3-5]因此選擇203nm波長作為測定波長。

3.2 流動相的選擇

比較了不同比例的甲醇-水系統(tǒng)為流動相,通過調(diào)節(jié)兩者的比例,當(dāng)兩者比為50∶50時出峰時間比較合適,得到的色譜峰形較好,分離效果較好,故用此為流動相。

3.3 供試品超聲時間的選擇

取同一包供試品,配制供試品溶液(1.0053 g/50mL)4 份,分別超聲 20、30、40、50min。然后進(jìn)樣,由峰面積得出供試品超聲30min以后,人參皂苷Rg1提取很充分。因此確定超聲時間為30min。

4 結(jié)論結(jié)果

本實驗測定方法的線性關(guān)系好、準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性好、專屬性強(qiáng),可作為該產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法。

[1]洪愛華,陸大祥,戚仁斌,等.HPLC/MS/MS法同時測定小鼠血漿中人參皂苷 Rg1、Re、Rb1[J].暨南大學(xué)學(xué)報,2007,28(10):491-493.

[2]李霞,楊建婷,柳小秦,等.膠束毛細(xì)管電泳色譜法測定三七中人參皂苷 Rg1、Re及三七皂苷R1的含量[J].中成藥,2007,29(12):1810-1812.

[3]朱照靜,鄧開英.紅參中人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的含量測定[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2003,9(5):10-11.

[4]劉波,聶陽,沈嘉茵,等.高效液相色譜法測定復(fù)方三七緩釋片中有效成分的含量[J].時珍國醫(yī)國藥,2008,19(5):1048-1049.

[5]Su Na Kim,Young Wan Ha,Heungsop Shin,et al.Simultaneous quantification of 14 ginsenosides in Panax ginseng C.A.Meyer(Korean red ginseng)by HPLC-ELSD and its application to quality control[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2007,45(1):164-170.

[責(zé)任編輯 李武營]

Determination of Ginsengnoside Rg1in Sanqi Xueshangning Powders by HPLC

WANG Xian-you1,KONG Jun2,FAN Feng-chun1(1.Pharmaceutical College of Henan University,Kaifeng,Henan 475004;2.Medical College of Henan University,Kaifeng,Henan 475004)

Objective:To establish a method for determination of ginsengnoside Rg1in Sanqi Xueshangning Powders by HPLC.Methods:Hypersil-ODS column(4.6 mm ×200 mm,5 μ m)was used with mobile phase of methanol water(50∶50).Flow rate was 1.0mL/min and detection wave-length was 203nm.Results:The concentration of Ginsengnoside Rg1was in good linearity related to its peak area in range of 10.0～ 100.0 μ g.mL.Linear regression equation wasY=5455.7X-2484(n=6,r=0.9997).Recovery was 99.8%,with RSD of 0.48%(n=6).Conclusion:This method is of good linearity,accurate,precise and stabile.It is suitable for the quantity control of Sanqi Xueshangning Powders.

Sanqi Xueshangning Powders;Ginsengnoside Rg1;HPLC;Content determination

R363.2

A

1672-7606(2010)03-0173-02

2010-05-08

河南大學(xué)校內(nèi)基金(B2007050)

王先友(1971-),男,河南商丘人,博士,副教授,從事分析化學(xué)的教學(xué)與科研工作。