叢 悅,吳宏欣,馮 玲,王 艷,張 芳

(1.河南大學(xué) 藥物研究所,河南 開封 475004;2.河南大學(xué)醫(yī)院,河南 開封 475004;3.開封市第二人民醫(yī)院 藥劑科,河南 開封 475004)

紫花苜蓿3個(gè)品種的中藥鑒定研究及總黃酮的含量比較

叢 悅1,吳宏欣2,馮 玲3,王 艷1,張 芳1

(1.河南大學(xué) 藥物研究所,河南 開封 475004;2.河南大學(xué)醫(yī)院,河南 開封 475004;3.開封市第二人民醫(yī)院 藥劑科,河南 開封 475004)

目的:對(duì)紫花苜蓿(Medicago sativa L.)3個(gè)品種隴東、北極星和阿爾岡金進(jìn)行中藥鑒別。方法:采用性狀鑒別、顯微鑒別及紫外分光光度法的方法。結(jié)果:紫花苜蓿3個(gè)品種根、莖特征沒有區(qū)分,粉末特征有一定差別。隴東中總黃酮含量為0.0419%,阿爾岡金為0.0436%,北極星為0.0422%。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以為制定藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),研究和開發(fā)利用該藥資源提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

紫花苜蓿;性狀鑒別;顯微鑒別;紫外分光光度法

紫花苜蓿(Medicago sativa L.)為豆科植物紫花苜蓿的地上部分,全國各地多有栽培,是迄今發(fā)現(xiàn)營養(yǎng)最全面的草本植物之一,也是世界公認(rèn)的健康食品。紫花苜蓿味苦、微澀、性平,有清熱利尿和涼血通淋的功效,主治熱病煩滿、目黃赤、小便黃、沙石淋病等癥,主要含皂苷、多糖、黃酮等成分[1]。至今未見對(duì)紫花苜蓿3個(gè)品種隴東、北極星、阿爾岡金的生藥學(xué)研究報(bào)道,本文采用性狀鑒別、顯微鑒別及總黃酮含量測定的方法,對(duì)其進(jìn)行生藥學(xué)研究。

1 材料與儀器

重慶光電XSZ-H光學(xué)顯微鏡;721紫外分光光度計(jì);實(shí)驗(yàn)藥材于2009年3月采自河南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室,經(jīng)河南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院李文嬈副教授鑒定為豆科植物紫花苜蓿的3個(gè)品種分別為隴東、北極星和阿爾岡金;蘆丁對(duì)照品(編號(hào)080-200306)購于鄭州藥檢所。

2 方法和結(jié)果

2.1 性狀鑒別

紫花苜蓿的3個(gè)品種分別為隴東、北極星和阿爾岡金,植株高 30～100 cm。葉為羽狀復(fù)葉;小葉3枚,倒卵形、橢圓形或披針形,長1～2.5 cm,寬約0.5 cm,先端圓鈍或截形,中脈鞘突出,基部楔形,僅上部葉緣有鋸齒,中下部全緣,上面無毛或近無毛,下面有白色伏毛;小葉柄長約1 mm,有毛托葉,披針形,先端尖,有柔毛,長約7 mm?？偁罨ㄐ蛞干?花較密集,近頭狀;花萼有柔毛,茂盛齒窄披針形,急尖;花冠藍(lán)紫色或紫色,長于花萼。

2.2 粉末特征

取紫花苜蓿的3個(gè)品種隴東、北極星和阿爾岡金進(jìn)行石蠟切片及粉末制片[2-3],繪制該藥材的顯微特征墨線圖進(jìn)行描述。

2.2.1 隴東品種 粉末黃綠色,表皮細(xì)胞多角形或不規(guī)則,細(xì)胞壁波狀彎曲,下表皮細(xì)胞不規(guī)則,氣孔為不等式,副衛(wèi)細(xì)胞3個(gè)。非腺毛較多,由1個(gè)細(xì)胞構(gòu)成,長560～690 μ m,表面有許多疣狀突起。導(dǎo)管多為螺紋,多聚集,有分叉。每個(gè)薄壁細(xì)胞內(nèi)有2個(gè)草酸鈣方晶。見圖1。

2.2.2 阿爾岡金品種 粉末黃綠色,表皮細(xì)胞多角形或不規(guī)則,細(xì)胞壁波狀彎曲,下表皮細(xì)胞不規(guī)則,氣孔為不定式,副衛(wèi)細(xì)胞5個(gè)。非腺毛較多,由1個(gè)細(xì)胞構(gòu)成,長520～660 μ m,非腺毛表面有許多疣狀突起,疣點(diǎn)突出。導(dǎo)管多為螺紋,多聚集,有分叉。每個(gè)薄壁細(xì)胞內(nèi)有1個(gè)草酸鈣方晶,細(xì)胞外少有散在。見圖2。

2.2.3 北極星品種 粉末黃綠色,表皮細(xì)胞多邊形,細(xì)胞壁平直,下表皮細(xì)胞不規(guī)則,氣孔為不定式氣孔,副衛(wèi)細(xì)胞3個(gè)。非腺毛較多,非腺毛表面有許多疣狀突起,疣點(diǎn)不如阿爾岡金品種和隴東品種突出。導(dǎo)管多為螺紋,少有網(wǎng)紋,多聚集,有分叉。晶鞘纖維多簇生。見圖3。

2.3 組織特征

2.3.1 紫花苜蓿的根橫切面特征 根橫切面維管束多數(shù),呈近散生狀,中心無髓。木栓層薄,由3～5層木栓細(xì)胞組成,中柱鞘纖維多,排列成彎月形,韌皮部窄,木質(zhì)部寬廣,導(dǎo)管多呈徑向放射狀排列,維管束為無限外韌性,維管束之間的射線明顯?？梢姴菟徕}方晶及晶鞘纖維。見圖4。

圖1 隴東粉末顯微圖

圖2 阿爾岡金粉末顯微圖

圖3 北極星粉末顯微圖

圖4 根的橫切面顯微詳圖

2.3.2 紫花苜蓿的莖橫切面特征 莖橫切片,維管束多數(shù),呈近散生狀,中心髓部寬廣,皮層較寬,可見中柱鞘纖維,木質(zhì)部不發(fā)達(dá),維管束為無限外韌性。見圖5。

圖5 莖的橫切面顯微詳圖

3 總黃酮含量測定[4]

3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精密稱取 10mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品,用體積分?jǐn)?shù)為50%乙醇溶液稀釋到50mL,即得標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液 0、1.0、2.0、3.0、4.0 和5.0mL,分別置于10mL容量瓶,各加體積分?jǐn)?shù)為50%乙醇溶液至5mL,精密加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%亞硝酸鈉溶液0.3mL,搖勻放置6min。加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%硝酸鋁溶液0.3mL,搖勻放置6min,加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%氫氧化鈉溶液4mL,分別用體積分?jǐn)?shù)為50%乙醇稀釋至刻度,搖勻,放置15min,置比色杯中在510nm處測定吸光度,測3次求平均值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果表明蘆丁在0～0.1 g/L濃度范圍符合Beer定律,吸收度與濃度呈良好的線性關(guān)系,其回歸方程為:y=12.227x,r=0.9998。

3.3 供試品溶液配制

精密稱取紫花苜蓿3個(gè)品種的樣品粉末各0.5 g(60目),加10倍量無水乙醇超聲提取20min,將提取液移至250mL容量瓶內(nèi)定容至刻度線,量取200mL濃縮,定容到10mL。

3.4 精密度實(shí)驗(yàn)

精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照“3.2”方法加入顯色劑,連續(xù)測定6次,測得吸光度的RSD為0.15%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,儀器精密度良好。

3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液,于室溫分別放置0、2、4、6、12和24 h后,按照“3.2”方法加入顯色劑,測得吸收度的RSD為0.23%。結(jié)果表明標(biāo)準(zhǔn)溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取同一品種藥材粉末6份,按供試品溶液制備方法配制6份供試品溶液,按照“3.2”方法加入顯色劑,測得吸光度RSD為2.86%,表明具有良好的重復(fù)性。

3.7 樣品測定

精密量取3個(gè)樣品的供試品各 1.0mL,按照“3.2”方法加入顯色劑測定吸光度,測3次求平均值,結(jié)果見表1。

表1 樣品測定結(jié)果(n=3)

4 小結(jié)

紫花苜蓿3個(gè)品種粉末特征為導(dǎo)管聚集,非腺毛多見,氣孔有不定式和不等式2種。紫花苜蓿莖和根的橫切面具有正常維管柱特征。紫花苜蓿3個(gè)品種的總黃酮含量有差別,其中北極星品種的總黃酮含量較高?？傊?紫花苜蓿性狀、顯微和總黃酮含量測定都可以為藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考依據(jù)。

[1]王勝超,張國剛,米文珍.紫花苜蓿化學(xué)成分及藥理活性的研究進(jìn)展[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2009,26(3):243-248.

[2]楊春澍.藥用植物學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2005:336.

[3]李景原,谷艷芳.生物制片原理與技術(shù)[M].開封:河南大學(xué)出版社,1998:1-50.

[4]楊中林.中藥炮制學(xué)實(shí)驗(yàn)與指導(dǎo)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2003:19.

[責(zé)任編輯 姬 荷]

Traditional Chinese medical appraisal research for 3 species of Medicago sativa L.and the comparison of the total flavanone content

CONG Yue1,WU Hong-xin2,FENG Ling3,WANG Yan1,ZHANG Fang1(1.Institute of pharmacology,Henan University,Kaifeng,Henan 475004;2.Hospital of Henan University,Kaifeng,Henan 475004;3.Department of Medicanent,Kaifeng Second People＇s Hospital,Kaifeng,Henan 475004)

Objective:To identify 3 species of Medicago sativa L.,namely Longdong,Beijixing and Aergangjin.Methods:3 species of Medicago sativa L.were identified by property distinction,microscopic distinction and ultraviolet spectrophotometric method.Results:There was no distinction between the roots and stems of 3 species of Medicago sativa L.while there exited the certain difference in the flower powder of the three.The total flavanone content in Longdong was 0.0419%,the Aergongjin 0.0436%and Beijixing 0.0422%.L.Conclusion:The experimental results can be used as the quality control standards to prepare the medicinal materials and provide the experimental evidence for developing and using this herbal resource.

Medicago sativa L.;Property distinction;Microscopic distinction;Ultraviolet spectrophotometric method

R284.1

A

1672-7606(2010)03-0170-03

2010-04-20

河南大學(xué)博士啟動(dòng)基金

叢悅(1978-),女,遼寧遼陽人,博士,副教授,從事中藥學(xué)及中藥炮制學(xué)研究及教學(xué)工作。