謝 魑

（四川省攀枝花市第二人民醫(yī)院藥劑科，四川 攀枝花 617001）

醋氯芬酸（aceclofenac）是一種新型口服強效非甾體抗炎藥，化學名為2-[（2，6-二氯苯基）氨基]苯乙酰氧基乙酸，用于治療骨關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎、強直性脊椎炎、風濕性關節(jié)炎、慢性多發(fā)性關節(jié)炎、并行性骨關節(jié)炎等引起的疼痛和炎癥[1]。醋氯芬酸為雙氯芬酸鈉的衍生物，通過抑制環(huán)氧酶和脂氧合酶而產生抗炎、鎮(zhèn)痛作用，1992年首次在西班牙上市，1997年在美國、英國上市。醋氯芬酸口服吸收完全，生物利用度達99%，1.25～3 h達血藥濃度峰值，生物半衰期為4～4.3 h，臨床上常規(guī)給藥劑量為每日200 mg，分2～3次服藥。但普通口服制劑血藥濃度波動大，患者依從性差，不利于臨床治療。一日一次的緩釋制劑則符合臨床發(fā)展的需要，可有效地避免體內血藥濃度的峰谷現象，減少因峰濃度導致的藥物副作用，從而提高患者的順應性。我院陸續(xù)引進了醋氯芬酸的普通片和緩釋片，筆者對其體外釋放和Beagle犬體內藥動學情況進行了對比研究，分析兩種制劑的體內-體外相關性，旨在為臨床用藥提供參考。

1 儀器、試藥及動物

ZRCD6-B型藥物溶出度測定儀（均為上海黃海藥檢儀器廠）；UV-9100型紫外可見分光光度計（北京瑞利分析儀器公司）；離心機（上海安亭科學儀器廠）；HPLC Pump L-7110，UV-VIS Detectorl L-7420（Hitachi）。醋氯芬酸（江西同和藥業(yè)有限責任公司，批號為20080321），醋氯芬酸片（商品名為美諾芬，西安海欣制藥有限公司）；醋氯芬酸緩釋片（浙江尖峰藥業(yè)有限公司）；其他試劑均為分析純。健康Beagle犬6只，由本院實驗動物中心提供，雌雄各半，體重 9.5～11 kg。

2 方法與結果

2.1 體外釋放度試驗

2.1.1 輔料干擾試驗

按照配方量稱取各輔料，溶于溶出介質中，在200～400 nm波長處進行紫外掃描。結果表明，在275 nm波長附近輔料無吸收，對測定無干擾。

2.1.2 標準曲線制備

精密稱取醋氯芬酸100 mg，用磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）溶解，定容至 100 mL，分別精密量取 0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 mL，置50 mL量瓶中，以磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）定容，搖勻，于275 nm波長處測定吸光度，用吸光度（A）與質量濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程 C=40.611A-0.179 4，r=0.999 9（n=7）。

2.1.3 釋放度測定

參照2005年版《中國藥典（二部）》釋放度測定法第一法。溶出介質選用磷酸鹽緩沖液（pH=6.8），轉速50 r/min，介質溫度37℃。分別于 2，4，6，8，10，12，14，24 h 時取樣 5 mL，過 0.8 μm 微孔濾膜，并及時補充同體積溶出介質。取續(xù)濾液稀釋后，于275 nm處測定，計算醋氯芬酸累積釋放百分率。醋氯芬酸普通片和緩釋片體外溶出釋放結果見圖1?？梢?，普通片在服用后幾乎立即溶解，而緩釋片可以持續(xù)緩慢釋藥達15 h。

圖1 醋氯芬酸普通片和緩釋片體外溶出釋放曲線（n=6）

2.2 Beagle犬體內藥動學研究

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（200 nm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（0.3%三乙胺）=60∶40，磷酸調pH為7.0；檢測波長：275nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃ ；進樣量：20 μL。

2.2.2 溶液配制

分別配制1.0 mg/mL的醋氯芬酸甲醇溶液和1.0 mg/mL的安定乙腈溶液（內標），作為貯備液，于4℃保存。臨用前將貯備液精密稀釋，作為工作液，用于制備標準曲線和質量控制樣品；將內標貯備液精密稀釋至75 μg/mL，作為內標液每份樣品加入200 μL。

2.2.3 血漿樣品預處理

取血漿樣品0.5 mL，置2.0 mL Ep管中，加入75 μg/mL的內標液 200 μL，渦旋 1 min，加乙腈 800 μL 作為蛋白沉淀劑，渦旋 3 min，離心（10 000 r/min）10 min，取上清液進樣。

2.2.4 方法學考察

專屬性試驗：在上述色譜條件下，將空白血漿、空白血漿加對照品和內標、Beagle犬服藥后6 h血漿的色譜圖進行比較。醋氯芬酸和內標的峰形良好，保留時間分別為14.2 min和20.7 min。空白血漿中的內源性物質、其他雜質和代謝產物不干擾測定（圖2）。

圖2 醋氯芬酸高效液相色譜圖

線性關系考察：取空白 Beagle犬血漿 500 μL，加入不同質量濃度的醋氯芬酸工作液50 μL，配制成質量濃度范圍為0.5～100 μg/mL的血漿樣品，渦旋1 min后加入內標，按2.2.3項下方法操作，進樣測定。以醋氯芬酸和內標的峰面積比值（Y）與藥物質量濃度（X，μg/mL）作線性回歸，得回歸方程 Y=0.119 2 X+0.007，r=0.991 0。結果表明，醋氯芬酸質量濃度線性范圍是0.5～100 μg/mL。將醋氯芬酸在血漿中的最低定量限定為0.5 μg/mL。

精密度試驗：取低、中、高3個質量濃度醋氯芬酸工作液制備的血漿樣品，各6份，按2.2.3項下方法操作，于日內測定3次和連續(xù)3 d測定，計算日內和日間精密度，結果見表1。

表1 日內和日間精密度測定結果

回收率試驗：取空白血漿500 μL，加入低、中、高3個質量濃度醋氯芬酸工作液，配制成質量濃度為1，5，50 μg/mL的血漿樣品，每一濃度平行操作6份，按2.2.3項下方法操作，依法進行測定。同時測定低、中、高3種質量濃度未經制備的質量控制樣品，并與相同質量濃度的標準樣品制備成血漿樣品后測定的結果進行比較，計算絕對回收率。結果回收率分別為88.7%，91.1%，97.3%，RSD 分別為 8.7%，3.0%，0.7%（n=6）。

穩(wěn)定性試驗：分別配制質量濃度為1，5，50 μg/mL的模擬血漿樣品各3份，按2.2.3項下方法操作，室溫放置12 h后分析。結果表明，處理后的醋氯芬酸血漿樣品室溫放置12 h穩(wěn)定（相對誤差為8.7%，7.4%，1.3%），經過3次冷凍解凍循環(huán)后亦穩(wěn)定（相對誤差為3.3%，-5.3%，-12.3%）。

2.2.5 試驗設計與結果

將6只Beagle犬隨機分成兩組，并隨機確定服藥順序，分別服用醋氯芬酸普通片（參比制劑）和醋氯芬酸緩釋片（受試制劑），給藥劑量均為200 mg。試驗前禁食12 h，分別于給藥前和給藥后0.5，1，2，3，4，6，8，10，12，14，24 h 時取靜脈血 3 mL，離心取血漿，于-20℃保存。間隔1周后進行交叉試驗。藥時曲線見圖3?？梢姡茁确宜峋忈屍倪_峰時間（tmax）延長，峰濃度（Cmax）降低，體內平均駐留時間顯著延長，體現了緩釋制劑藥物濃度變化平穩(wěn)、且維持時間長的特點。

圖3 Beagle犬口服受試制劑和參比制劑后平均血藥濃度-時間曲線（n=6）

2.3 藥動學參數

將血藥濃度數據用DAS 2.0統(tǒng)計軟件進行有關藥動學參數求算，結果見表2。

表2 Beagle犬口服醋氯芬酸普通片和緩釋片的平均藥動學參數（X ± s，n=6）

2.4 體外釋放和體內吸收相關性分析

經擬合，醋氯芬酸緩釋片Beagle犬體內藥動學為二室模型，體內吸收百分數（Fa）采用Loo-Riegelman方法（L-R法）計算：

式中（XA）t是 t時間吸收到人體內的藥物量，（XA）∞是體內吸收的藥物總量，Ct是 t時間的血藥濃度，k10為藥物從中央室消除的一級速率常數，Xp為周邊室內藥物量，Vc為中央室表觀分布容積。

將 t時間體內吸收百分數與相應時間體外累積釋放百分率進行線性回歸，根據回歸系數來判斷體內外相關性是否顯著。結果見表 3。以 2～8 h體外累積釋放百分率為自變量，體內吸收百分數為因變量，線性回歸方程Y=0.601 4X+0.293 5，r=0.967 0（ n=6）。結果表明，醋氯芬酸緩釋片體內外相關性較好。

3 討論

在預試驗中使用了蒸餾水、pH=1.2的鹽酸溶液、4‰聚氧乙烯烷基硫酸鈉（SLS）以及pH=4.5的醋酸-醋酸銨緩沖液作為溶出介質。由于醋氯芬酸溶解度太小，不能滿足漏槽條件，因此釋放速率極其緩慢，24 h不能完全釋放。在pH=4.5醋酸-醋酸銨緩沖液中，因不能形成良好的凝膠1層，藥物只能通過被動擴散方式釋放到溶出介質中，在24 h內同樣不能將藥物完全釋放出來。在pH=6.8的磷酸鹽緩沖液中，藥物骨架能較快形成凝膠層，藥物通過擴散及凝膠溶蝕而釋放到介質中，24 h的殘留量很少；醋氯芬酸的溶解度（13.53 g/L）遠大于0.22 g/L，符合漏槽條件；且pH=6.8的磷酸鹽緩沖液又較其他介質更接近生理條件。因此，采用pH=6.8磷酸鹽緩沖液作為溶出介質。

表3 體外累積釋放百分率和體內吸收百分數（%）

對圖2中醋氯芬酸緩釋片釋放度曲線分別進行零級、一級、Hixon Crowell方程以及Higuchi方程模型擬合，結果零級為 Q=4.16t+5.29（r=0.984 7），一 級 為 ln（100-Q）=-0.124t+4.814（r=0.977 0），Higuchi方程為 Q=20.61 t1/2-9.62（r=0.977 6），Hixon Crowell方程為（100-Q）1/3=-0.125t+4.741（r=0.997 7），其中 Q為藥物釋放百分率（% ），t為藥物釋放時間（h）?？梢?，用Hixon Crowell方程較好，可以用其描述藥物在體外的釋放過程。而藥物的具體釋放機制則用方程 Q=Ktn（K為常數）來評價，通過擬合得到 n值為0.788（r=0.996 2），符合非Fickian擴散機制，藥物釋放是親水凝膠溶蝕與藥物擴散共同作用的結果。由于 n值在0.45與0.89間但更接近0.89，可以推測，這兩種機制中凝膠溶蝕作用為主[2]。動物試驗顯示，醋氯芬酸緩釋片具有緩釋特征，與普通片吸收程度生物等效[3]。本院引進的醋氯芬酸緩釋片為親水凝膠緩釋骨架片，制劑遇水后骨架材料吸水形成凝膠，可通過凝膠層的黏度和厚度控制藥物的釋放速度。本試驗結果顯示，醋氯芬酸緩釋片的血藥濃度平穩(wěn)，與普通片相比可較長時間保持有效血藥濃度，由于每天僅需服藥1次，增加了患者的順應性，值得向臨床推薦。

[1]El-Saharty YS，Refaat M，El-Khateeb SZ.Stability-indicating spectrophotometric and densitometric methods fordetermination ofaceclofenac[J].Drug Development and Industrial Pharmacy，2002，28（5）:571-582.

[2]Xu G，Sunada H.Influence of formulation change on drug release kineticsfrom hydroxypropylmethylcellulosematrixtablets[J].Chem Pharm Bull，1995，43（3）:483-487.

[3]劉承統(tǒng)，黃開合，謝 林，等.醋氯芬酸緩釋片在犬體內藥代動力學及其相對生物利用度研究[J].中國藥科大學學報，2004，35（5）:443-445.