譚志藝 劉永路 容淑盈

高效液相色譜法測定腹可安片中槲皮素含量

譚志藝 劉永路 容淑盈

目的建立高效液相色譜法測定腹可安片中槲皮素的含量。方法色譜柱為Diamonsil(鉆石)C18(150×4.6mm，5 μ)，流動相為甲醇-0.4%磷酸溶液(52∶48)，檢測波長為360nm，流速為1.0 ml/min，柱溫為35℃。結(jié)果槲皮素進(jìn)樣量的線性范圍是0.2～2.0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9999);平均加樣回收率為99.88%，RSD=0.93%(n=6)。結(jié)論該方法簡便、靈敏、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于腹可安片的質(zhì)量控制。

腹可安片;槲皮素;高效液相色譜法;含量

腹可安片是由扭肚藤、火炭母、車前草、石榴皮、救必應(yīng)等五味中藥提取加工制成，具有清熱利濕，收斂止痛，用于急性胃腸炎、消化不良引起的腹痛、腹瀉、嘔吐等［1］。原標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項(xiàng)目。為了有效控制其內(nèi)在質(zhì)量，筆者采用高效液相法測定火炭母中槲皮素的含量，結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

島津SHIMADZU LC-20AT高效液相色譜儀，SPD-M20A二極管陣列檢測器。槲皮素對照品(中國藥品生物制品檢定所，含量測定用，批號為100081-200406);樣品1(廣東一力藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號為2090403)，樣品2(揚(yáng)州華天寶藥業(yè)有限公司，批號為090702)，樣品3(廣東怡康制藥有限公司，批號為090701)，甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［2］色譜柱為Diamonsil(鉆石)C18(150×4.6mm，5μ);流動相為甲醇-0.4%磷酸溶液(52:48);檢測波長為360 nm;流速為1.0 ml/min;柱溫為35℃;理論塔板數(shù)按槲皮素峰計算達(dá)2500以上。

2.2 溶液制備 精密稱取槲皮素對照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇溶解并制成每1 ml含45μg的溶液，即得對照品溶液。取腹可安片20片，除去糖衣，稱定總重量，研細(xì)，混勻，精密稱取0.6g，加50%甲醇30 ml，鹽酸1 ml，加熱回流1 h，趁熱濾過，濾液放泠，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 ml，合并乙酸乙酯提取液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙獠⑥D(zhuǎn)移置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方比例及工藝制備不含火炭母的樣品適量，按供試品溶液制備方法制成空白樣品溶液。

2.3 方法學(xué)考察 陰性干擾試驗(yàn):精密吸取對照品，供試品及空白樣品溶液各20 μl，分別注入高效液相色譜儀，測定。結(jié)果色譜圖中在槲皮素峰相應(yīng)的保留時間附近無干擾峰檢出(見圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密吸取濃度為0.1 mg/mL的對照品溶液 2，4，8，10，15，20 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積Y為縱坐標(biāo)、槲皮素對照品進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:Y=177406X-73615，r=0.9999。結(jié)果表明，槲皮素進(jìn)樣量在0.2～2.0 μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取對照品溶液20 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，按峰面積計算。結(jié)果的RSD=0.39%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一批號供試品溶液20 μl，按上述色譜條件，分別在 0，1，2，4，8，12 h 時測定。以峰面積計算，RSD為0.8%。結(jié)果表明，待測溶液至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批號的樣品6份，依法測定。其結(jié)果的RSD為0.36%，說明方法的重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入槲皮素對照品適量，依法測定其含量，求出加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 槲皮素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定 精密吸取對照品及供試品各20 μl，分別注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法計算，結(jié)果3批樣品(樣品1～樣品3)中槲皮素的含量分別為75.18，102.1，92.9 ug/片。

3 討論

3.1 取槲皮素對照品溶液，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果顯示在360 nm波長處有最大吸收峰且不易受溶劑峰干擾，故選擇360 nm為測定吸收波長。本試驗(yàn)表明，樣品用50%甲醇和鹽酸加熱回流1 h，濾液用乙酸乙酯振搖提取2次，槲皮素已基本提取完全;以甲醇-0.4%磷酸溶液(52∶48)作為流動相，槲皮素色譜峰能與其他組分的色譜峰很好地分離，線性關(guān)系良好，重現(xiàn)性及回收率結(jié)果均符合要求。

3.2 HPLC法前處理簡便，測量準(zhǔn)確，精度高，重現(xiàn)性好，可作為腹可安片的一種質(zhì)量控制方法。

［1］WS3-B-2255-96，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十一冊).北京:中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會，1996:200.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:152.

Determination of Quercetin Contents in Fukean Tablet by HPLC

TAN Zhi-yi，LIU Yong-lu，RONG Shuying.Yunfu Institute for Drug Control of Guangdong，Yunfu，Guangdong，527300，China

Objective To establish a HPLC method for determination of Quercetin Contents in Fukean Tablet.MethodsThe column was Diamonsil C18(150 × 4.6mm，5 μ).The mobile phase was a mixture of methanol and 0.4%phosphoric acid solution(52∶48)at a flow rate of 1.0 ml/min，and the detecting wavelength was at 360 nm，the temperature was 35℃.ResultsThe linear range of Baicalin was 0.2～2.0μg(r=0.9999)and the average recovery rate was 99.88%(RSD=0.93%).ConclusionThe method is simple，high sensitivity and accurate with good repeatability and can be used for quality control in Fukean Tablet.

Fukean Tablet;Quercetin;HPLC;Content

527300廣東省云浮市藥品檢驗(yàn)所