劉麗利,南云澤,林貞花,金仁順

(1揚(yáng)州市婦幼保健院,江蘇揚(yáng)州 225002;2延邊大學(xué)附屬醫(yī)院;3延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

宮頸癌是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一,浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是宮頸癌患者晚期主要死亡原因之一。近年研究表明,腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用,在腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中至關(guān)重要。腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移發(fā)生在基底膜降解的基礎(chǔ)上,在降解過(guò)程中基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2、MMP-9起著非常重要的作用[1,2],然而它們與宮頸癌的關(guān)系報(bào)道并不一致。2001年 7月 ～2009年 7月,我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)了MMP-2、MMP-9在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況,并探討其與宮頸癌生物學(xué)行為的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 標(biāo)本來(lái)自于延邊大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科住院手術(shù)切除的組織,其中宮頸鱗癌 46例(A組),患者年齡22～59歲,中位年齡42.5歲;FIGO (2000年)[3]分期Ⅰ期 35例,Ⅱ期 11例;病理類型為角化型 16例,非角化型 30例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 19例,無(wú)轉(zhuǎn)移27例。宮頸原位癌34例(B組),患者年齡 25～64歲,中位年齡 39.5歲。另選取 20例同期因子宮肌瘤行子宮切除的正常宮頸標(biāo)本作為對(duì)照(C組),患者年齡 25～64歲,中位年齡 41歲。全部病例在術(shù)前均未接受放療、化療。

1.2 MMP-2、MMP-9檢測(cè)方法 所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋,作 4μm厚連續(xù)切片。采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè),嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,封片后用光學(xué)顯微鏡觀察。同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照(用PBS代替一抗),陽(yáng)性對(duì)照用已知陽(yáng)性切片。結(jié)果判定：MMP-2、MMP-9蛋白陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈棕黃色顆粒樣物質(zhì)。用低倍和高倍鏡觀察全片,按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比及著色程度進(jìn)行結(jié)果判定[4]。按陽(yáng)性細(xì)胞比例判定：陽(yáng)性細(xì)胞≤10%1分,10%～50%2分,＞50%3分;按染色程度判定：陰性為 0分,淡黃色1分,中度黃色 2分,棕黃色 3分。兩項(xiàng)相乘 ＜3為陰性,≥3為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。組間比較采用χ2檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組MMP-2、MMP-9表達(dá)比較 A、B、C組MMP-2陽(yáng)性率分別為78.3%(36/46)、50.0%(17/ 34)、25.0%(5/20),A組與B、C組比較,P均 ＜0.01;B、C組間比較,P＞0.05。A、B、C組MMP-9陽(yáng)性率分別為71.7%(33/46)、70.6%(24/34)、25.0%(5/20),A、B組與C組比較,P均＜0.01; A、B組間比較,P＞0.05。

2.2 MMP-2、MMP-9表達(dá)與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見(jiàn)表1。MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)與宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均＜0.05)。

2.3 宮頸鱗癌組織中MMP-2、MMP-9表達(dá)的關(guān)系Spearman等級(jí)相關(guān)分析結(jié)果顯示,MMP-2和MMP-9在宮頸鱗癌中的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.372,P＜0.05)

表1 MMP-2、M MP-9表達(dá)與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

MMP-2和MMP-9可降解Ⅳ型膠原和其他細(xì)胞外基質(zhì)成分,促進(jìn)惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。研究表明,多種惡性腫瘤MMP-2和(或)MMP-9表達(dá)增加,活性增強(qiáng),并且其表達(dá)量及活性強(qiáng)弱與惡性腫瘤的侵襲能力密切相關(guān)。有關(guān)宮頸癌組織MMP-2和MMP-9表達(dá)狀態(tài)的報(bào)道并不完全一致。Arguello-Ramirez等[5]將慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ和宮頸鱗癌組織在體外培養(yǎng) 48 h后,前三者總計(jì)分泌到培養(yǎng)介質(zhì)中的MMP-2前體和活化的MMP-2分別為190.5 DU和13.5 DU,其中,活化的MMP-2與宮頸癌組織分泌量(6.0 DU)無(wú)明顯區(qū)別,而MMP-2前體分泌量明顯高于宮頸癌組織分泌量(18 DU)。宮頸癌組織分泌的MMP-9,無(wú)論是活化的,還是非活化的均明顯高于慢性宮頸炎和CIN,故認(rèn)為在宮頸癌演進(jìn)過(guò)程中MMP-2作用可能并不重要。Giraudo等[6]用RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),CINⅢ和鱗癌組織中MMP-9的表達(dá)較CINⅠ/Ⅱ組織中顯著升高,且發(fā)現(xiàn)MMP-9與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)活性相關(guān),提示MMP-9與腫瘤血管生成有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn),在正常宮頸上皮、原位癌和宮頸鱗癌的組織中MMP-2、MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)率依次增高,且差異有顯著性,提示MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)可能與宮頸癌的發(fā)展過(guò)程有關(guān)。MMP-9多呈彌散性分布,而MMP-2則多為局灶性分布,尤其在癌巢邊緣表達(dá)較強(qiáng),提示其對(duì)周圍基質(zhì)成分的降解能力增加;同時(shí)檢測(cè)MMP-9在原位癌及宮頸鱗癌表達(dá)均上升,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?？赏茰y(cè)MMP-9在原位癌中的表達(dá)上調(diào)在宮頸鱗癌的形成過(guò)程中是關(guān)鍵事件,原位癌在細(xì)胞形態(tài)和表現(xiàn)非正常蛋白上與浸潤(rùn)性腫瘤相似,MMP-2和MMP-9的表達(dá)與宮頸癌的侵襲性行為密不可分。

宮頸鱗癌的轉(zhuǎn)移方式主要是淋巴轉(zhuǎn)移,臨床上也是以有無(wú)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移來(lái)判斷預(yù)后和指導(dǎo)臨床治療。何金英等[7～12]研究認(rèn)為,宮頸鱗癌中 MMP-9的表達(dá)與病理分級(jí)、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),而與臨床分期、病理類型無(wú)關(guān)。本研究結(jié)果表明,MMP-2、MMP-9在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組較陰性組的陽(yáng)性表達(dá)率高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可推測(cè)MMP-2、MMP-9在宮頸鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起促進(jìn)作用。本研究發(fā)現(xiàn)MMP-2和MMP-9呈正相關(guān),提示二者協(xié)同作用加強(qiáng)了宮頸癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力。

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