戴詩(shī)皎,李 睿

(武漢工業(yè)學(xué)院生物與制藥工程學(xué)院,湖北武漢 430023)

金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus,以下簡(jiǎn)稱金葡菌)是一種人畜共患病的重要致病菌,是國(guó)內(nèi)外最常見(jiàn)的細(xì)菌性食物中毒病原之一。據(jù)美國(guó)疾病預(yù)防控制中心報(bào)告,由金葡菌引起的食物中毒僅次于大腸埃希氏菌,居第二位,占細(xì)菌性食物中毒的33%[1]。在我國(guó),由金葡菌引起的食物中毒約占細(xì)菌性食物中毒事件的 25%,而在美國(guó)、加拿大等發(fā)達(dá)國(guó)家,更是高達(dá) 50%[2-3]。

金葡菌對(duì)外界的抵抗力在非芽胞菌中為最強(qiáng),干燥情況下能存活數(shù)月。該菌引起中毒的主要原因是產(chǎn)生耐熱腸毒素。腸毒素是一種耐熱性很強(qiáng)的毒素,煮沸 1.5—2 h仍能保留毒性[3]。因此普通的烹飪方法不易將其破壞。一旦食物被金葡菌污染則極易引起食源性疾病的暴發(fā)。

1 金葡菌的流行概況

世界上許多國(guó)家都曾相繼報(bào)道金葡菌的暴發(fā)流行。該菌引起的食物中毒臨床表現(xiàn)主要以惡心、嘔吐和腹痛為主,少數(shù)病人有腹瀉、頭痛、頭暈、發(fā)熱、脫水等癥狀。發(fā)病較多的國(guó)家主要有美國(guó)、加拿大和日本。根據(jù)日本衛(wèi)生部公布的數(shù)字,日本 1980-1999年由金葡菌引起的食物中毒共有 2525次,59964人感染,3人死亡[4]。而在 2000年發(fā)生的“雪印奶粉”事件中,日本最大的牛奶企業(yè)雪印乳制品生產(chǎn)公司因奶制品被金葡菌污染,造成 13420人食物中毒,直接經(jīng)濟(jì)損失為 139億日元,企業(yè)形象被破壞造成的間接經(jīng)濟(jì)損失約為 200-700億日元[4]。

我國(guó)每年發(fā)生的金葡菌食物中毒事件也非常多,全國(guó)各地均有報(bào)道。2003年 9月,三明市某中學(xué)西藏部食堂發(fā)生一起食用被金葡菌污染的熏鴨翅引起的 35名學(xué)生食物中毒事件[5]。同年 9月,某校幼兒園班的 26名學(xué)生因食用某一蛋糕店送來(lái)的蛋糕后,先后有 11名學(xué)生出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等癥狀,后證實(shí)為金葡菌污染蛋糕所致[6]。2006年 6月 23日,新疆特克斯縣城鎮(zhèn)阿克塔斯牧業(yè)村一戶牧民舉辦祭悼?jī)x式聚餐,引發(fā)了一起急性食物中毒。就餐者 120人,發(fā)病 88人,催患率為 73.33%。事后根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、患者臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)分析,證實(shí)為由金葡菌污染食品引起[7]。2008年8月 24日四川瀘市江陽(yáng)區(qū)某酒店發(fā)生一起食物中毒,經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查、臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室檢查,確認(rèn)為一起金黃色葡萄所致的食物中毒,進(jìn)餐的 350人中有 82人出現(xiàn)不同程度的惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等癥狀[8]。類似的金葡菌食物中毒事件在我國(guó)時(shí)有發(fā)生。

2 傳染源及傳播途徑

金葡菌感染是一種食源性疾病。牛肉、牛奶、乳制品、豆制品、鹵味、熟食、剩飯、剩菜等均可成為傳染源。金葡菌在自然界廣泛存在于空氣、水、塵埃及人和動(dòng)物的排泄物中,所以食品受其污染的機(jī)會(huì)較多。被金葡菌感染的人 (包括食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌)加工食品時(shí)均可造成食品污染;生、熟食交叉,熟食制品包裝不嚴(yán),冷藏不足也可引起污染;食品運(yùn)輸過(guò)程受到污染;奶?；蓟撔匀橄傺谆蚯菪缶植炕摃r(shí),對(duì)肉體其他部位及牛奶也可造成污染;熱處理不足、加工后食物在室溫存放時(shí)間過(guò)久等,都可能造成金葡菌的污染。在大規(guī)模食品加工過(guò)程中如不注意衛(wèi)生生產(chǎn),將容易導(dǎo)致金葡菌的污染,從而導(dǎo)致食物中毒的集體式和家庭式暴發(fā)。

金葡菌感染具世界流行性、高發(fā)病率和集體式暴發(fā)等特點(diǎn),嚴(yán)重危害人類安全和健康,已成為一個(gè)全球性的公共衛(wèi)生問(wèn)題,受到世界各國(guó)廣泛關(guān)注。

3 腸毒素 (Staphylococcal enterotoxins,SE)

金葡菌引起疾病的原因主要是產(chǎn)生毒素、酶類等致病性物質(zhì)。該菌產(chǎn)生的主要酶類有：凝固酶、耐熱核酸酶、葡激酶等;產(chǎn)生的主要毒素有：腸毒素、葡萄球菌溶素、表皮剝脫毒素、殺白細(xì)胞素、毒性休克綜合征毒素-1等,其中腸毒素 (SE)在該菌的致病性中起著重要的作用[9]。據(jù)報(bào)道,每 100 g食物中含18μg SE時(shí)即能引起金葡菌食物中毒[10]。金葡菌中毒的實(shí)質(zhì)是耐熱腸毒素中毒,只有檢測(cè)出腸毒素,才能為金葡菌中毒下最后的結(jié)論。因此,研究 SE尤其是 SE的檢測(cè)和分型工作,對(duì)由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒臨床診斷和預(yù)防該菌引起的食物中毒均有重要的意義。

SE是金葡菌分泌的一組具有超抗原活性的細(xì)菌毒素,易溶于水和鹽溶液,對(duì)熱很穩(wěn)定,可耐受100℃煮沸 30min仍有致病性,能抵抗胃腸液中蛋白酶的水解作用[11]。依據(jù) SE抗原性和等電點(diǎn)的不同 ,至今為止發(fā)現(xiàn) SE有 A、B、C(C1、C2、C3)、D、E、F、G、H、I和 J等 10個(gè)毒素血清型,A和 D型最為常見(jiàn),其中以 A型的毒力最強(qiáng),攝入 1μg即能引起中毒。

4 腸毒素的檢測(cè)方法

金葡菌食物中毒是因進(jìn)食含有腸毒素的食物,并非活菌所引起,所以研究出快速、靈敏的檢測(cè)腸毒素的方法是有效控制食物中毒的重要手段。

檢測(cè)腸毒素的傳統(tǒng)方法需要經(jīng)過(guò)增菌、分離培養(yǎng)、生化鑒定等一系列繁瑣步驟來(lái)完成,費(fèi)時(shí)費(fèi)力。目前食品衛(wèi)生的快速檢驗(yàn)中主要采用血清學(xué)反應(yīng)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌腸毒素,通常采用的方法有免疫熒光法和酶聯(lián)免疫吸咐法。隨著研究的深入,一些快速的采用現(xiàn)代技術(shù)的檢測(cè)方法不斷出現(xiàn),這些新的檢測(cè)方法,一般都縮短了傳統(tǒng)檢測(cè)方法的時(shí)間,能夠快速地得到檢測(cè)結(jié)果,并且操作相對(duì)簡(jiǎn)單。本文介紹幾種快速檢測(cè) SE的方法。

4.1 動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)

一般是對(duì)幼貓或猴腹腔注射或喂食肉湯培養(yǎng)物或嘔吐物,然后觀察其可能出現(xiàn)的各種異常生理和形態(tài)變化,一般 4h內(nèi)受試動(dòng)物發(fā)生嘔吐、腹瀉和體溫升高或死亡等現(xiàn)象的,提示 SE存在。此法是測(cè)定食物中腸毒素較早采用的一種方法。但由于猴的來(lái)源困難,成本較高,而用幼貓做為研究對(duì)象時(shí),葡萄球菌產(chǎn)生的其他非腸毒素類產(chǎn)物也可致幼貓嘔吐,容易出現(xiàn)假陽(yáng)性,故此類方法受到了極大的限制。

4.2 血清學(xué)實(shí)驗(yàn)

血清學(xué)試驗(yàn)是通過(guò)將腸毒素作為抗原和特異性抗體發(fā)生結(jié)合性反應(yīng),來(lái)檢驗(yàn)食品中金葡菌腸毒素。主要有免疫雙擴(kuò)法 (DD)、反向間接血凝法(RPHA)、反向乳膠凝集試驗(yàn) (RPLA)、放射免疫測(cè)定法 (R IL)、免疫印跡技術(shù) ( Immunobloting)以及酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)等。目前在食品衛(wèi)生檢驗(yàn)中主要采用的方法有兩種：放射免疫測(cè)定法和酶聯(lián)免疫吸附法。

4.2.1 放射免疫測(cè)定法 (Radioimmunoassay,R IA)

自從 1968年Momrae、Johnson等用 R IA檢測(cè) SE獲得成功后,很多實(shí)驗(yàn)室就利用 R IA檢測(cè)培養(yǎng)液和食品中提取的腸毒素[9]。放射免疫測(cè)定法是建立在標(biāo)記抗原和非標(biāo)記抗原對(duì)特異性抗體的競(jìng)爭(zhēng)性抑制反應(yīng)的基礎(chǔ)上,將放射性同位素 I125等標(biāo)記到特異性抗體上,用于檢測(cè)未知樣品中的 SE;或者將同位素標(biāo)記到腸毒素抗原上,標(biāo)記 SE與未標(biāo)記 SE和特異性抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,被檢材料中未標(biāo)記的 SE可抑制標(biāo)記 SE與相應(yīng)抗體的結(jié)合,抑制程度與標(biāo)本中腸毒素的濃度成正比。通過(guò)測(cè)定復(fù)合物中標(biāo)記腸毒素的減少程度,可對(duì)檢樣中同型腸毒素進(jìn)行定量。R IA法檢測(cè)腸毒素雖快速但要求較高,工作人員必須進(jìn)行專門訓(xùn)練,且該法使用了放射性物質(zhì),廢物處理比較煩瑣,因此限制了 R IA法的使用和普及。

4.2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)

ELISA是將抗原或抗體先結(jié)合到某固相載體的表面,利用酶標(biāo)記的抗原或抗體與之結(jié)合形成復(fù)合物,加入底物顯色后,根據(jù)顏色的深淺確定被檢物的含量。該法自 1971年建立后被廣泛應(yīng)用于多種疾病的免疫血清學(xué)檢測(cè)。目前常用雙抗體夾心法檢測(cè)SE[12],其靈敏度為 1ng/mL,檢測(cè)速度快,4h就可出結(jié)果。王小紅等[13]建立了快速檢測(cè)金黃色葡萄球菌B型腸毒素的間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA方法,最低檢測(cè)量為 1ng/ml。段鴻斌[14]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示對(duì)不同污染程度的牛奶樣品,利用間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA法檢測(cè)其SEB殘留的靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于生化法。使用 ELISA法檢測(cè) SE的報(bào)道最多,它具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。但 ELISA試劑易受環(huán)境、溫度、時(shí)間、保存方法等因素的影響,使其具有可變性和易變性,且在腸毒素型與型之間有一定程度的交叉反應(yīng),易干擾對(duì)結(jié)果的判定[15]。該法需要制備或購(gòu)買特異性好、效價(jià)高的抗金黃色葡萄球菌的抗體,并且整個(gè)過(guò)程均為人工操作,可能會(huì)由于個(gè)人操作不同結(jié)果有所差異。

4.3 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

較早采用核酸分子雜交檢測(cè)法,如：菌落原位雜交法、DNA斑點(diǎn)雜交和印跡雜交技術(shù)等檢測(cè) SE。隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展,PCR法成為檢測(cè)金黃色葡萄球菌最常用的方法之一。

聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù) (Polymerase Chain Reaction,PCR)是一種在體外模擬天然 DNA復(fù)制過(guò)程,對(duì)特定的DNA或DNA片段進(jìn)行快速擴(kuò)增的方法。通過(guò)設(shè)計(jì)引物檢測(cè)產(chǎn) A—E型葡萄球菌腸毒素的菌株。隨著 PCR的發(fā)展,多重 PCR和熒光定量 PCR等在SE的檢測(cè)中得到了廣泛的應(yīng)用。

4.3.1 多重 PCR

由 PCR引申出的多重 PCR法,可用于同時(shí)檢測(cè)腸毒素 A—E(entA、entB、entC、entE)基因 ,表皮剝脫毒素 (eta、etb)基因和中毒性休克綜合癥毒素(tst)基因等毒力相關(guān)因子[16-17]。2000年 Naresh K.Sharma等人用多重 PCR方法檢測(cè)金葡菌腸毒素A—E,利用了幾種毒素基因的通用保守序列及特異序列,即一個(gè)相同的上游引物及特異性下游引物,可在 3—4h內(nèi)檢測(cè)出毒素基因A～E,且與標(biāo)準(zhǔn)的免疫檢測(cè)有近 99%的對(duì)應(yīng)性[18]。在此基礎(chǔ)上,Mehrotra等人通過(guò)兩個(gè) PCR反應(yīng)體系、兩對(duì)引物同時(shí)檢測(cè)了包括腸毒素 SE、TSST-1、Ets、mecA在內(nèi)的十種毒素基因,且效果很好[19]。此方法有很好的應(yīng)用前景。

4.3.2 熒光定量 PCR(Real-time PCR)

常規(guī) PCR是通過(guò)檢測(cè)最終擴(kuò)增結(jié)果而判斷是否有足夠量靶基因存在,常規(guī) PCR使用的染色劑溴化乙啶有強(qiáng)烈的致癌作用,嚴(yán)重危害操作人員的健康。因此熒光定量 PCR逐步取代常規(guī) PCR成為備受重視的 PCR技術(shù)。熒光定量 PCR在 PCR過(guò)程中利用熒光染料在光刺激下釋放的熒光能量的變化,直接反映出 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化,熒光信號(hào)變量與擴(kuò)增產(chǎn)物變量成正比,并通過(guò)足夠靈敏的自動(dòng)化儀器實(shí)現(xiàn)對(duì)熒光的采集和分析以達(dá)到對(duì)原始模板量定量的目的。主要有以下幾類：熒光染料直接結(jié)合擴(kuò)增產(chǎn)物,如 SYBB Green I,類似于 EB,能特異性地區(qū)分單雙鏈 DNA,只與雙鏈 DNA結(jié)合;熒光標(biāo)記探針,探針可與 DNA模板一對(duì)一結(jié)合,如 Taqman標(biāo)記探針、分子信標(biāo)探針 (Molecular beacon)、Light Cycler T M雜交雙探針等。熒光定量 PCR通過(guò)標(biāo)記特異性熒光探針,實(shí)行完全閉管式操作,無(wú)復(fù)雜的產(chǎn)物后處理過(guò)程,不僅能大大減少擴(kuò)增產(chǎn)物的污染機(jī)會(huì),提高檢測(cè)的特異性,且可通過(guò)計(jì)算機(jī)自動(dòng)分析對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行精確定量,完全克服了常規(guī) PCR的缺點(diǎn)。熒光定量 PCR操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏,尤其適用于無(wú)活菌或含菌量低的患者標(biāo)本及已加熱殺菌的可疑中毒食品的檢測(cè)[20-21]。

根據(jù)腸毒素的基因設(shè)計(jì)引物,運(yùn)用常規(guī) PCR或由常規(guī) PCR引申出的多重 PCR、Real-time PCR、APPCR、Rep-PCR等方法擴(kuò)增不同血清型的腸毒素,獲得不同大小的產(chǎn)物片段可對(duì)腸毒素進(jìn)行分型[22-23]。

PCR方法除了具有核酸分子雜交的優(yōu)點(diǎn)如特異性強(qiáng),可從基因水平進(jìn)行診斷和同時(shí)檢測(cè)大量樣品等優(yōu)點(diǎn)外,比核酸分子雜交更加敏感,更加快速和更加簡(jiǎn)便,且易自動(dòng)化操作[24]。但是由于 PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)要求高,費(fèi)用高等特點(diǎn)限制了該方法在食品在線檢測(cè)中的廣泛應(yīng)用。

綜上所述,目前檢測(cè) SE的方法各有利弊。隨著各種技術(shù)的不斷改進(jìn)和發(fā)展,其檢測(cè)的靈敏度和特異性均有所提高。但是目前還沒(méi)有既快速、靈敏又廉價(jià)的方法用于食品安全中金葡菌的檢測(cè)。因此,進(jìn)一步提高檢測(cè)手段的靈敏度、特異性及實(shí)用性仍是科學(xué)工作者研究的重要課題和主要任務(wù)。

5 結(jié)束語(yǔ)

金葡菌在自然界分布廣泛,致病力強(qiáng),是食物中毒最為常見(jiàn)的病原菌。要防止金葡菌引起的食物中毒的暴發(fā),應(yīng)嚴(yán)格把好食品安全關(guān),防止食品受到金葡菌的污染;大力加強(qiáng)食品衛(wèi)生宣傳教育、改善環(huán)境衛(wèi)生,加強(qiáng)對(duì)個(gè)體食品生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)者的監(jiān)督管理,防止金葡菌的生長(zhǎng)和產(chǎn)毒;做好食品的消毒和殺菌處理工作。

近幾年金葡菌耐藥菌株和變異菌株不斷出現(xiàn)[25-27],給臨床治療和疾病預(yù)防控制帶來(lái)了巨大的挑戰(zhàn),使得基于免疫學(xué)和分子生物學(xué)基礎(chǔ)的檢測(cè)方法也隨著其耐藥性的變化而必須作出相應(yīng)的改進(jìn)。因此,深入研究金葡菌腸毒素的致病機(jī)理,和快速、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用的檢測(cè) SE方法仍是現(xiàn)在和今后的研究熱點(diǎn)。

[1] 高濤.食品中金黃色葡萄球菌腸毒素及檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J].福建分析測(cè)試,2003,12(2)：1775-1778.

[2] Shriver-lake L C,Shubin Y S,Ligler F S.Detection of staphylococcal enterotoxin Bin spiked food samples[J].Journal of Food Protection,2003,66(10)：1851-1856.

[3] 姜延龍,張宇,田波,等.PCR技術(shù)檢測(cè)金黃色葡萄球菌進(jìn)展[J].食品科學(xué),2006,27(5)：265-269.

[4] Hiramatsu K,Okuma K,Ma XX,et al.New trends in staphylococcus aureus infections：glycopeptide resistance in hospital and methicillin resistance in the community[J].Current Opinion in Infectious Diseases,2002,15(4)：407-413.

[5] 張紅,羅金滬,樂(lè)嘉良.一起學(xué)校食堂金黃色葡萄球菌食物中毒的調(diào)查[J].海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志 ,2005,11(1)：57-58.

[6] 周少峰,文志軍,徐春生,等.邵東縣一起金黃色葡萄球菌食物中毒的調(diào)查報(bào)告[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2003,10(6)：1002.

[7] 江阿泰·塔力甫,范德生,庫(kù)來(lái)西.2006年一起金黃色葡萄球菌引起食物中毒的調(diào)查報(bào)告[J].地方病通報(bào),2007,22(6)：34.

[8] 鄒家鳳,朱惠聰,李維,等.一起金黃色葡萄球菌腸毒素引發(fā)的食物中毒調(diào)查報(bào)告[J].醫(yī)學(xué)信息 ,2010,2：190-191.

[9] 李毅.金黃色葡萄球菌及其腸毒素研究進(jìn)展[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2004,14(4)：392-395.

[10] Martin M,Dinges,Paul M,et al.Exotoxina of staphylococcus aureus[J].Clinical Microbiology Reviews,2000,13(1)：16-34.

[11] 周正任.醫(yī)學(xué)微生物學(xué) (第 6版)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2004：135-142.

[12] 王晶,王林,黃曉蓉.食品安全快速檢測(cè)技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2002：115-119,150-153.

[13] 王小紅,徐康,王瑩,等.金黃色葡萄球菌 B型腸毒素間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA檢測(cè)方法的建立[J].食品科學(xué),2006,27(8)：227-230.

[14] 段鴻斌.金黃色葡萄球菌 B型腸毒素的酶聯(lián)免疫檢測(cè) [J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(7)：2617-2619.

[15] 邊潔.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)質(zhì)量控制的探討[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2008(9)：1079-1080.

[16] Park H K,Woo S Y,Jung Y J,et al.Detection of virulence genes of staphyloccus aureus and staphylococcus epider midis isolated from supra-pubic urine from infants with fever[J].Journal of Bacteriology and Virology,2008,38(4)：189-196.

[17] NovickR P,Schlievert P,Ruzin A.Pathogenicity and resistance islands of staphylococci[J].Microbes Infection,2001,3(7)：585-594.

[18] Sharma N K,Rees C E D,Dodd C E R.Development of a single-reaction multiplex PCR toxin typing assay for staphylococcus aureus strains[J].Applied and Environmental Microbiology,2000,66(4)：1347-1353.

[19] Mehrotra M,Wang G,Johnson W M.Multiplex PCR for detection of genes for Staphylococcus aureus enterotoxins, exfoliat-ive toxins,toxic shock syndrome toxin1,and methicillin resistance[J].Journal of Clinical Microbiology,2000,38(3)：1032-1035.

[20] LivakK J,Flood S J A,Mar maro J,et al.Oligonucleotides with fluorescent dyes at opposite ends provide a quenched probe system useful for detecting PCR product and nucleic acid hybridization[J].PCR Methods and Applications,1995,4：357-362.

[21] Rossney A S,Herra C M,Brennan G I,et al.Evaluation of the xpert methicillin-resistant staphylococcus aureus(MRSA)assay using the genexpert real-time PCR platform for rapid detection of MRSA from screening specimens[J].Journal of Clinical Microbiology, 2008, 46(10)：3285-3290.

[22] 歐新華,宋克云,龍碧霞,等.金黃色葡萄球菌食物中毒病原檢測(cè)及方法比較[J].實(shí)用醫(yī)技雜志 ,2006,13(20)：2652-3653.

[23] 管俊昌,夏佩瑩.金黃色葡萄球菌 L型產(chǎn) B型腸毒素及其基因的研究 [J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) ,2004,29(4)：283-285.

[24] 張鳳笑,石磊.PCR技術(shù)在金黃色葡萄球菌中的研究進(jìn)展 [J].現(xiàn)代食品科技,2008,24(10)：1042-1047.

[25] 李紅玉,龍軍,徐霞.金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測(cè)和耐藥性分析 [J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2006,6(7)：785-787.

[26] Hashimoto M,Sugawara Y,Tamura S,et al.Acquisition of methicillin-resistant staphylococcus aureus after living donor liver transplantation：a retrospective cohort study[J].BMC Infectious Diseases,2008,155(8)：1471-2334.

[27] Malhotra-Kumar S,Haccuria K,Michiels M,et al.Current trends in rapid diagnostics for methicillin-resistant staphylococcus aureus and glycopeptide-resistant enterococcus species[J].Journal of Clinical Microbiology,2008,46(5)：1577-1587.