黃舒麗

（廣東仙樂制藥有限公司，廣東 汕頭 515041）

小麥胚芽油軟膠囊其采用的原材料為小麥胚芽油加工制作而成。小麥胚芽油富含維生素E、維生素B、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)，新鮮椰子油，還有亞麻酸、亞油酸等多種不飽和脂肪酸，被稱為皮膚的維他命寶庫，素有“維生素E之王”之稱。小麥胚芽油不皂化物含量較高，2%～6%，其中大部分為甾醇，占60%～80%，并以谷甾醇為主，占甾醇總量的60%～70%。其次為菜油甾醇，占20%～30%。小麥胚芽油所含甾醇幾乎無膽固醇。而植物甾醇的生理功能特性有：外源性的干擾食物中膽固醇被腸道的吸收和內(nèi)源性的干擾膽汁所分泌的膽固醇的重吸收，促進(jìn)膽固醇排泄，具有降低人體血清膽固醇，預(yù)防心、腦血管疾病的功能；在人體內(nèi)可轉(zhuǎn)變成膽汁酸和性激素，參與人體的新陳代謝[1]。因此，具有極高的保健和治療價(jià)值。本文將對(duì)小麥胚芽油軟膠囊中植物甾醇組成和含量利用毛細(xì)管氣相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，并將檢測(cè)結(jié)果匯報(bào)如下。

1 試驗(yàn)方法

1.1 實(shí)驗(yàn)器材和試劑

Agilent-7890氣相色譜儀、HP ChemStation色譜工作站（美國(guó)安捷倫公司）， BP210S電子天平（德國(guó)Sartorius公司），AB135-S十萬分之一天平（瑞士METTLER TOLEDO儀器有限公司）[2,3]。小麥胚芽油軟膠囊，購于廣州市佰健生物工程有限公司。菜子甾醇標(biāo)準(zhǔn)品、豆甾醇標(biāo)準(zhǔn)品、β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品均為Sigma公司產(chǎn)品。

1.2 色譜條件

1.2.1 毛細(xì)管氣相色譜檢測(cè)條件設(shè)定。色譜柱：DB-5毛細(xì)管柱；柱溫：250℃；進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度均為300℃；載氣：N2；柱流速：1.5mL/min（恒流）；尾吹氣流速（N2）：25mL/min；燃?xì)饬魉伲℉2）：30mL/min；空氣流速：350mL/min；分流比20∶1；進(jìn)樣量：1μL[4,5]。

1.2.2 氣相色譜-質(zhì)譜定性分離檢測(cè)條件設(shè)定：采用Agilent-7890/5973N氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，EI源，DB-5毛細(xì)管柱，NIST質(zhì)譜譜庫，進(jìn)樣口溫度：300℃，接口溫度：280℃，柱溫：275℃，載氣：He，柱流量為：1.5mL/min（恒流），分流比：20∶1，離子源溫度：230℃，四極桿溫度：150℃，電子能量：70eV，電子倍增器電壓：1.2KV，掃描質(zhì)量范圍：50～500m/z，溶劑延遲：2.5min，進(jìn)樣量：1μL[6,7]。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)試劑的配制

①菜子甾醇30mg、豆甾醇30mg分別盛在2個(gè)100mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，充分混勻定容，配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液，用毛細(xì)管氣相色譜法定性分析，將其作為菜子甾醇、豆甾醇的標(biāo)準(zhǔn)溶液使用。②稱量β-谷甾醇60mg盛于100mL容量瓶中，用正己烷同上稀釋至刻度，充分混勻定容后，用毛細(xì)管氣相色譜法定性與質(zhì)譜聯(lián)合分析，將其作為菜油甾醇、β-谷甾醇的標(biāo)準(zhǔn)溶液使用。③稱量5α-膽甾烷50mg盛于100mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，充分混勻定容后，將其作為甾醇的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)液使用。

1.3.2 樣品加工處理

將1.0g充分混勻小麥胚芽油放入100mL燒瓶中，往燒杯中加入1.0mL 5α-膽甾烷內(nèi)標(biāo)溶液。然后加入2.0mol/L氫氧化鉀乙醇溶液40mL，裝上冷凝管，置于85℃溫水中，水浴皂化45min，在此過程中樣品進(jìn)行不停地旋轉(zhuǎn)攪拌。水浴皂化結(jié)束后，待冷卻至室溫，加25mL飽和氯化鈉水溶液，移至分液漏斗中，再用石油醚分三次進(jìn)行提取。提取液用蒸餾水多次洗滌，直至中性，將石油醚層進(jìn)行脫水濾過后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮干燥處理，樣品待用[8]。

1.3.3 回收率實(shí)驗(yàn)

稱取小麥胚芽油樣10份（5份×2），其中的6份每份分別精確加入菜子甾醇標(biāo)準(zhǔn)液6.0mL、豆甾醇標(biāo)準(zhǔn)液1.0mL，β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)液5.0mL，然后上述樣品處理方法測(cè)定，計(jì)算各組分的回收率。

1. 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，以標(biāo)準(zhǔn)物與內(nèi)標(biāo)物的濃度比為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)峰面積比為縱坐標(biāo)采用多元線性回歸分析，計(jì)算得出線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[9]。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 定性分析與色譜分離

采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法，確定菜油甾醇、β-谷甾醇的出峰順序，然后采用擬定的色譜條件下得到植物甾醇和膽固醇等5種甾醇的色譜分離圖，檢測(cè)結(jié)果是：溶劑峰值0.570；5α-膽甾烷峰值5.816；菜子甾醇峰值11.600；菜油甾醇峰值13.612；豆甾醇峰值14.414；β-谷甾醇峰值16.456。如圖1。

圖1 色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別吸取標(biāo)準(zhǔn)液0.1、0.5、1.0、1.5和2.0mL于5個(gè)10mL容量瓶，再加入內(nèi)標(biāo)液1.0mL，正己烷稀釋定容，并進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果以標(biāo)準(zhǔn)物與內(nèi)標(biāo)物的濃度比為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)峰面積比為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸分析，得線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)。計(jì)算結(jié)果為：菜子甾醇回歸方程是：y=1.2652x+0.0004，線性范圍：3.0～68.0mg/L，相關(guān)系數(shù)：0.9980；菜油甾醇回歸方程是：y=1.1485x-0.0256，線性范圍：2.6～54.0mg/L，相關(guān)系數(shù)：0.9890；豆甾醇回歸方程是：y=1.2109x+0.0019，線性范圍：3.0～58.0mg/L，相關(guān)系數(shù)0.9898；β-谷甾醇回歸方程是：y=1.1738x-0.019，線性范圍：3.2～60.0mg/L相關(guān)系數(shù)：0.9887；檢測(cè)出來的最低值為：菜子甾醇：0.075mg/L；菜油甾醇：0.35mg/L；豆甾醇：0.085mg/L；β-谷甾醇：0.30mg/L。

2.3 回收率及精密度試驗(yàn)

回收率及精密度試驗(yàn)結(jié)果：計(jì)算的峰越多，回收率越高，相對(duì)偏差越小，結(jié)果更準(zhǔn)確；采用不同濃度的小麥胚芽油標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，相互之間無顯著性差異?；厥章试?9.70%～99.89%。

3 結(jié) 論

氣相色譜-質(zhì)譜定性分離檢測(cè)，小麥胚芽油軟膠囊中植物甾醇主要是由菜子甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇組成，其中β-谷甾醇和菜油甾醇的含量最高。但是在這個(gè)檢測(cè)過程中，甾醇能否全部被萃取是關(guān)鍵，這一步與油樣皂化完全與否有直接的關(guān)系。而皂化速度與加堿濃度、皂化溫度和皂化時(shí)間有關(guān)，所以本文預(yù)先選用小麥胚芽油樣品，進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。在不同的堿濃度，不同皂化溫度和皂化時(shí)間下，測(cè)定油中甾醇的含量。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：在堿濃度2.0mol/L，皂化溫度85℃，皂化時(shí)間45min時(shí)為實(shí)驗(yàn)最佳，開展了隨后的正式實(shí)驗(yàn)，并得到了滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。該檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確及分離效果好等優(yōu)點(diǎn)，這為甾醇的生產(chǎn)和研究提供了一種高效可行的分析檢測(cè)方法。充分說明小麥胚芽油有著其他油類無法相比特點(diǎn)[10]。有研究也證實(shí)其作為藥品的使用安全性是可靠的[11]。在國(guó)外已經(jīng)將小麥胚芽油作為保健食品。我們利用我國(guó)豐富的小麥胚芽油資源成功地研制了像小麥胚芽油軟膠囊這樣的一系列產(chǎn)品，工藝成熟穩(wěn)定，食用安全，應(yīng)得到大力的推廣。

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