胡向陽， 舒曉春*， 馬 義

(1.中山大學附屬第五醫(yī)院，廣東珠海519000;2.暨南大學生命科學院，廣東廣州510632)

腦缺血/再灌注損傷(ischemia reperfusion injury，IRI)的發(fā)生依賴于血管病變、血液成分和血液流變?nèi)齻€因素，是一個系列的級聯(lián)反應(yīng)，包括能量障礙、炎性反應(yīng)、細胞內(nèi)鈣失穩(wěn)態(tài)、凋亡基因激活等，腦缺血/再灌注損傷多伴有血液流變學指標的改變［1-2］。紫檀芪(pterostilbene)是白藜蘆醇衍生物，在藍莓、黑莓等漿果中含量豐富，研究顯示紫檀芪具有預(yù)防氧化應(yīng)激反應(yīng)、抗真菌、抗細胞增值等作用［3-4］。紫檀芪對腦缺血/再灌注損傷血液流變學影響的研究較少，本實驗對其進行初步的探索。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雄性SD大鼠，體質(zhì)量220～260 g，由廣東省實驗動物中心提供，合格證號:粵檢證字2009A318。

1.2 試劑與儀器 紫檀芪(日本富士株式會社，98%，HPLC)，CBY-N6A自清洗旋轉(zhuǎn)式黏度計、LBY-NW1血漿黏度計(北京普利生科學儀器公司)，DVM-4200型二道血流速度流量儀(日本島津公司)，真空采血管(廣州楊普公司)，LDZ5-2型離心機(北京醫(yī)用離心機廠)。

1.3 動物分組、給藥途徑及藥量 健康雄性SD大鼠36只，數(shù)字隨機分組法分為4組，即假手術(shù)組、缺血/再灌注組、紫檀芪低劑量組、紫檀芪高劑量。紫檀芪低劑量組(15 mg/kg)、紫檀芪高劑量(30 mg/kg)均于術(shù)前、術(shù)后連續(xù)灌胃給藥6 d，1次/d，假手術(shù)組和缺血/再灌注組給予等量的生理鹽水灌胃。

1.4 動物模型制備 在Longa等［5］方法上改進制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，用10%水合氯醛溶液(350 mg/kg，ip)麻醉，采用頸外動脈插入線栓法，進行左側(cè)大腦中動脈栓塞，線栓采用石蠟線栓，線栓直徑約0.27 mm，插入深度約18 mm，此時線栓頭位于大腦中動脈起始部。缺血90 min時，抽提線栓實現(xiàn)再灌注。神經(jīng)功能缺陷評分:按照Longa等［5］評分標準，各組分別在再灌注24 h進行評分。0分:正常，無神經(jīng)學征象;1分:動物不能完全伸展右前肢;2分:動物右側(cè)肢體癱瘓，行走時向右側(cè)轉(zhuǎn)圈，出現(xiàn)追尾現(xiàn)象;3分:動物行走向右側(cè)跌倒，或動物不能站立或動物打滾;4分:無自發(fā)活動，有意識障礙。神經(jīng)功能缺陷評分在1～3分為模型成功。

1.5 血液流變學檢測 造模后治療6 d，禁食8 h后分離頸總動脈取血，全血快速流入事先用肝素包被的抗凝試管中，輕輕搖動，2 h內(nèi)測定全血黏度、血漿黏度和紅細胞壓積，計算紅細胞(RBC)聚集指數(shù)、變形指數(shù)和剛性指數(shù)。

1.6 統(tǒng)計學處理 使用SPSS14.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行質(zhì)復(fù)測量資料的方差分析，定量指標以(±s)表示，方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗，以P＜0.05為顯著性差異標準。

2 結(jié)果

2.1 各組全血黏度、血漿黏度、紅細胞壓積變化 與假手術(shù)組比較，缺血/再灌注組低、中、高切全血黏度、紅細胞壓積均不同程度升高，血漿黏度沒有明顯變化。紫檀芪低劑量組低、中、高切全血黏度、血漿黏度、紅細胞壓積均低于缺血/再灌注組，其血漿黏度低于假手術(shù)組。紫檀芪高劑量組中、高切全血黏度低于紫檀芪低劑量組，其低切全血黏度、紅細胞壓積低于缺血/再灌注組，血漿黏度低于假手術(shù)組;其低、中、高切全血黏度明顯低于假手術(shù)組。見表1。

表1 各組鼠全血黏度、血漿黏度、紅細胞壓積比較(±s)

表1 各組鼠全血黏度、血漿黏度、紅細胞壓積比較(±s)

注:與假手術(shù)組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與缺血/再灌注組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01;與紫檀芪低劑量治療組比較，▲P ＜0.05。下同。

組別 n 全血黏度/(mPa·s)低切 中切 高切全血黏度/(mPa·s)紅細胞壓積/%假手術(shù)組 9 9.34 ±1.65 6.45 ±1.14 3.23 ±0.16 1.27 ±0.11 36.3 ±1.28缺血/再灌注組 9 11.61 ±0.73* 7.67 ±0.83* 4.48 ±0.51* 1.38 ±0.13 38.1 ±0.78*紫檀芪低劑量組 9 10.15±0.64△ 6.13±1.36△ 3.05±0.26△ 1.08±0.10＊△ 35.4±1.36△紫檀芪高劑量組 9 7.31±1.22＊＊△ 4.16±1.37＊△ 1.48±0.20＊△△▲ 1.04±0.16* 32.3±1.27＊△

2.2 各組RBC聚集指數(shù)、變形指數(shù)和剛性指數(shù)變化 缺血/再灌注組RBC聚集指數(shù)、RBC剛性指數(shù)均不同程度高于假手術(shù)組，表明造模成功。紫檀芪低劑量組RBC聚集指數(shù)、RBC剛性指數(shù)均不同程度低于與缺血/再灌注組，其RBC變形指數(shù)低于假手術(shù)組。紫檀芪高劑量組RBC變形指數(shù)低于紫檀芪低劑量組，其RBC變形指數(shù)高于缺血/再灌注組，RBC剛性指數(shù)低于缺血/再灌注組，RBC聚集指數(shù)明顯低于缺血/再灌注組;并低于假手術(shù)組。提示紫檀芪可明顯改善缺血/再灌注損傷后紅細胞應(yīng)激能力，并存在正效應(yīng)的量效依賴關(guān)系。見表2。

表2 各組鼠RBC聚集指數(shù)、RBC變形指數(shù)、RBC剛性指數(shù)比較(±s)

表2 各組鼠RBC聚集指數(shù)、RBC變形指數(shù)、RBC剛性指數(shù)比較(±s)

剛性指數(shù)假手術(shù)組組別 n RBC聚集指數(shù) RBC變形指數(shù) RBC 2.17 ±0.03 1.04 ±0.13 6.05 ±0.33缺血/再灌注組 9 3.08 ±0.06* 0.92 ±0.27 6.38 ±0.26*紫檀芪低劑量組 9 2.26±0.02△ 0.98±0.21* 5.80±0.14△紫檀芪高劑量組 9 1.93±0.04＊△△ 1.27±0.20△▲ 5.32±0.299＊＊△

3 討論

血液流變學檢測在疾病的預(yù)防、診斷、預(yù)后判斷中有重要的應(yīng)用價值，特別是人類死亡率及致殘率最高的心腦血管病。血液在外力(血壓)的作用下，在血管內(nèi)流動，并隨著血管性狀(血管壁情況和血管形狀等)及血液成分(黏度)的變化而變化，維持正常的血液循環(huán);當血液黏度變大時，血液流動性就變差，也就最容易發(fā)生腦血栓性疾?。?］。大腦中動脈(MCA)是臨床上腦缺血及腦梗死的易患部位，在腦梗死患者中，MCA主干分布區(qū)梗死占82.2%，其中70%有明顯的栓子來源，所以對MCA主干閉塞的研究占有較重要的地位，線栓大鼠大腦中動脈法制作腦缺血后再灌注模型是較成熟的造模方法［7］。

腦組織缺血后再灌注是腦缺血性疾病最主要的損傷原因，目前對腦缺血/再灌注損傷發(fā)病機制仍有爭議，已有的防治方法遠不令人滿意。早期對缺血性腦損傷的研究多關(guān)注于腦組織壞死所造成的損傷，近年來，腦缺血再灌注損傷引起的血液流變學改變研究日益受到重視。血液流變學研究血液及其有形成分的流動性、血流變學的變化規(guī)律等，血液流變學異常是腦缺血/再灌注損傷的病理基礎(chǔ)，并與其嚴重程度密切相關(guān)［8］。血液黏度是衡量血液流動性的指標，血液黏度的高低主要取決于血細胞比容、血流的切率、血細胞的變形性、聚集性和黏附性等因素，而且這些因素又具有切變依賴性，故使血液具有非牛頓流動特性［9］。

研究發(fā)現(xiàn)在缺血性中風發(fā)生之前，血液黏度已經(jīng)出現(xiàn)升高趨勢，這與紅細胞的聚集能力和變形能力有關(guān)，腦缺血后紅細胞變形能力降低，聚集性提高，可促進腦缺血后微栓子的形成和微循環(huán)血流停止的發(fā)生［10］。微循環(huán)是組織血流灌注的基本單位，又是腦缺血/再灌注損傷時關(guān)鍵作用條件，腦缺血/再灌注損傷與再灌注后微循環(huán)障礙密切相關(guān)，因此，改善腦微循環(huán)是維持大腦血液灌注量、減輕再灌注損傷的重要手段［11］。本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，缺血/再灌注組RBC聚集指數(shù)、RBC剛性指數(shù)均不同程度高于假手術(shù)組，結(jié)合造模后神經(jīng)功能缺陷評分情況分析，表明腦缺血/再灌注損傷造模成功。紫檀芪能降低腦缺血/再灌注損傷大鼠全血黏度、血漿黏度、紅細胞壓積，提高紅細胞的應(yīng)激能力，提示紫檀芪通過對腦缺血/再灌注損傷后血液流變學指標的影響，并有一定正效應(yīng)的量效依賴關(guān)系，具有改善再灌注后微循環(huán)障礙的潛在效應(yīng)，但其具體作用機制尚需進一步研究。

［1］Taoufik E，Probert L.Ischemic neuronal damage［J］.Curr Pharm Des，2008，14(33):3565-3573.

［2］金鮮花，張小紅，高 丹，等.缺血性腦卒中患者血液流變學指標分析［J］.中國實驗診斷學，2010，14(8):1034-1036.

［3］王曉琴，王振華，劉 梅，等.氧化還原調(diào)控在紫檀芪誘導He-La細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑中的作用［J］，中國藥理學通報，2010，26(9):1184-1186.

［4］Virgili F，Marino M.Regulation of celluar signals from nutritional molecules:a specific role for phytochemicals，beyond antioxidant activity［J］.Free Radic Biol Med，2008，45(9):1205-1206.

［5］孔衛(wèi)國，吳曉牧，張昆南，等.大鼠局灶性腦缺血/再灌注模型的制作及經(jīng)驗體會［J］.實用臨床醫(yī)學，2010，11(3):1-3.

［6］李桂鳳.腦血管病病人血液流變學指標的變化［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2005，3(12):1114-1116.

［7］昊 浩，吉訓明，趙吉慶，等.改良大鼠 MACO模型的建立［J］.中華實驗外科雜志，23(12):1553-1554.

［8］程 潔，朱 毅，李忠仁.鈣調(diào)蛋白信號轉(zhuǎn)導與腦缺血再灌注腦損傷關(guān)系的研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2010，8(7):836-837.

［9］朱麗鳳，張學軍，包廣宇.冠心病、缺血性腦血管疾病患者的血液流變學改變［J］.中國血液流變學雜志，2007，17(3):487.

［10］楊 濤，余萬桂.蓮心堿對腦缺血再灌注大鼠血液黏度的影響［J］.檢驗醫(yī)學與臨床，2010，7(12):1206-1208.

［11］侯立軍，李 燕，朱榆紅.腦缺血后適應(yīng)機制和展望［J］.中華腦血管病雜志，2010，4(1):32-35.