王 榮

（湖南省郴州市臨武縣人民醫(yī)院藥劑科，湖南 郴州 424300）

延胡索為罌粟科（Papaveraceae）紫堇屬植物的干燥塊莖，最早見于唐朝《本草拾遺》，有兩千多年的使用歷史，延胡索味辛性溫，有行氣、行血功效，是臨床治療血瘀氣滯、心腹及肢體疼痛的要藥[1]，為《止痛中藥》重點(diǎn)研究課題之一。

中藥指紋圖譜作為中藥現(xiàn)代化的重要手段，已經(jīng)在中藥注射劑中正式實施，該方法通過對某種中藥或中藥制劑進(jìn)行系統(tǒng)性的化學(xué)成分研究，并進(jìn)行對應(yīng)的藥效學(xué)研究，篩選出中藥的有效部位，再采用適當(dāng)?shù)姆治鍪侄螌υ撝兴幪卣餍缘某煞趾陀行猿煞置枥L在一張圖譜上，通過這張圖片可以較為全面的反映出該中藥或中藥制劑所含化學(xué)成分的種類和數(shù)量，達(dá)到識別中藥及中藥制劑真?zhèn)?，辨認(rèn)質(zhì)量優(yōu)劣，從而對其質(zhì)量及療效進(jìn)行判定。這種圖譜和人的指紋較為相似，故被形象的稱為指紋圖譜[2,3]。根據(jù)所研究的中藥有效成分的特性不同，指紋圖譜的研究方法及技術(shù)也有所不同，當(dāng)前，中藥指紋圖譜絕大多數(shù)還是以色譜指紋圖譜的方式出現(xiàn)[3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

烘箱、恒溫水浴鍋、日本島津HPLC系統(tǒng)。

1.2 試劑

甲醇、乙腈、冰醋酸、純化水、食用醋、黃酒。

1.3 對照品與藥材

延胡索乙素對照品；去氫紫堇堿對照品；原阿片堿對照品；鹽酸小檗堿對照品；巴馬汀對照品。四川、陜西、浙江產(chǎn)三種延胡索藥材。

2 方法及結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Micsphere-C18。流動相A為乙晴，B為0.01%冰醋酸溶液（三乙胺調(diào)pH至6.0），梯度洗脫。檢測波長：280nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；分析時間85min，進(jìn)樣量：10μL。

2.2 炮制

將所購三種藥材進(jìn)行炮制，分別得水煮品、醋制品和酒制品，共12個樣品。

2.3 對照液制備

精密稱取延胡索乙素對照品、去氫紫堇堿對照品、原阿片堿對照品、鹽酸小檗堿對照品、巴馬汀對照品制備五種對照品的混合對照液。

2.4 供試品溶液制備

分別精密稱取12個待測樣品延胡索細(xì)粉于250mL磨口圓底燒瓶中，按照如下步驟制樣：向磨口燒瓶中加入濃氨-甲醇溶液50.0mL，稱定重量，浸漬1h，加熱回流lh，放冷至室溫，再稱定重量，并用濃氨試液-甲醇溶液補(bǔ)足減失重量，震搖均勻，用快速濾紙過濾。吸取續(xù)濾液25.0mL，水浴揮干，用甲醇少量多次溶解浸膏并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，震搖，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按照選定的色譜條件進(jìn)樣檢測。

2.5 采用國家藥典委員會制定的中藥色譜指紋圖譜相似度系統(tǒng)軟件，對測定的供試品HPLC色譜圖進(jìn)行處理，得到供試品間色譜峰的相似度（0.912～0.992）及延胡索藥材HPLC指紋圖譜。

2.6 鮮延胡索和不同制品延胡索的指紋圖譜中，峰的數(shù)量和出峰時間相似度較高，但是鮮品和制品延胡索的峰面積有明顯的差異。結(jié)果見表1。

表1 不同延胡索五種主要有效成分含量均值

從表1可以看出，酒制延胡索五種有效成分的含量較其他制品延胡索和鮮品延胡索均較高。

3 討 論

延胡索在臨床用量較大，研究其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，有助于規(guī)范延胡索的質(zhì)量管理。指紋圖譜是今后中藥材及中藥制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展方向[4-6]。我們采用高效液相色譜法對延胡索的有效成分組進(jìn)行檢測，通過對12各樣品的分析檢測，確定了色譜條件（檢測波長、流動相、流動相流速）及對照物質(zhì)。本組資料采用二級管陣列檢測器，在檢測樣品時，我們對樣品進(jìn)行了200～600nm波長之間的紫外連續(xù)掃描，得到了三維光譜圖[7,8]。分析光譜圖，以280nm掃描的色譜峰峰形為佳、各色譜峰間分離度較好、出峰數(shù)量和延胡索的主要有效成分一致，因此，我們將280nm確定為延胡索樣品的檢測波長。延胡索中含有的有效成分主要為多種生物堿，因此在流動相中適當(dāng)加一些堿性物質(zhì)可以防止延胡索生物堿的解離而影響有效成分含量的正確檢出。我們采用過多種堿性物質(zhì)，如磷酸鹽緩沖溶液、醋酸鹽緩沖溶液，采用他們做流動相，均獲得了良好的分離效果，然磷酸鹽類屬難揮發(fā)物質(zhì)類，醋酸鹽則為有機(jī)物，具有一定的揮發(fā)性，對色譜的損傷小于磷酸鹽類物質(zhì)，因此我們選擇了醋酸加三乙胺調(diào)節(jié)pH 6.0，形成醋酸銨-醋酸緩沖液。我們還對流動相的洗脫方式進(jìn)行了比較，分別采用等度洗脫和梯度洗脫，結(jié)果表明，梯度洗脫程序條件更易控制，且溶劑對指紋圖譜無干擾，樣品的保留時間亦具有良好的重現(xiàn)性好，獲得了良好的分離度及柱效。延胡索的主要有效活性成分有5種[9]，出于指紋圖譜是綜合反映藥材質(zhì)量的考慮[10]，我們選擇了這五種成分延胡索乙素、去氫紫堇堿、原阿片堿、鹽酸小蘗堿、巴馬汀作為為延胡索的含量控制項目。通過本組研究資料，我們建立了延胡索藥材的HPLC指紋圖譜的測定方法，得到延胡索藥材HPLC指紋譜及相關(guān)數(shù)據(jù)，為延胡索藥材及其他含延胡索的中藥復(fù)方制劑制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

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[3]鄭虎占,董澤宏.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用(第二卷)[M].北京:學(xué)苑出版社,1997.

[4]許翔鴻.野生延胡索種質(zhì)資源現(xiàn)狀及其質(zhì)量評價[J].中國中藥雜志,2004,29(5):399.

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