于海云 宋俊梅 陳志叢

焦谷氨酸是一種具有多種天然生理活性的特殊氨基酸，在醫(yī)藥合成研究方面，它可以作為不對(duì)稱合成的手性源及合成中間體，在生物學(xué)、精細(xì)化工等相關(guān)領(lǐng)域研究中亦有重要地位關(guān)的報(bào)道[1]。但因其存在D、L-焦谷氨酸兩種手性對(duì)映異構(gòu)體，而這兩種手性對(duì)映體又存在不同的活性和功能差異，因此對(duì)其進(jìn)行拆分研究對(duì)于焦谷氨酸的合成研究和生物提取應(yīng)用研究有著重要意義。

1 儀器與試藥

Waters型高效液相色譜儀(美國(guó))，PDA檢測(cè)器;正己烷為色譜純，異丙醇為色譜純，冰乙酸為分析純，三乙胺為分析純。D-焦谷氨酸(New Jersey，USA);L-焦谷氨酸(四川峨眉山榮高生化制品有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備 精密稱取D-焦谷氨酸、L-焦谷氨酸，分別加異丙醇溶解并稀釋制成每1 ml中含3 mg的溶液;再精密稱取D-焦谷氨酸、L-焦谷氨酸適量，加異丙醇溶解并稀釋制成每1 ml中各含3 mg的混合溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱:CHIRALPAK AD-H(0.46 cm I.D.×25 cm L)，正己烷-異丙醇-冰乙酸-三乙胺(90∶10∶0.1∶0.1)為流動(dòng)相，進(jìn)樣量:20ul。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇精密量取供試品溶液20ul，注入液相色譜儀，記錄光譜圖，結(jié)果顯示D/L-焦谷氨酸最大吸收在205nm，我們選擇205nm作為本品的測(cè)定波長(zhǎng)。

2.4 分離度試驗(yàn) 精密量取取D-焦谷氨酸、L-焦谷氨酸、D、L-焦谷氨酸混合溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，色譜圖見圖1、圖2、圖3。

圖1 D-焦谷氨酸色譜圖 圖2 L-焦谷氨酸色譜圖 圖3 D、L-焦谷氨酸色譜圖

在該色譜條件下，D、L-焦谷氨酸分離度良好。

2.5 最小檢出限試驗(yàn) 用顯示基線噪音的分析方法，把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，以信噪比3∶1時(shí)確定檢測(cè)限為0.06 μg。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密量取D、L-焦谷氨酸混合溶液20 μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，D-焦谷氨酸RSD為0.61%，L-焦谷氨酸 RSD為0.78%。精密度試驗(yàn)良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取D、L-焦谷氨酸混合溶液，置暗處放置，分別于 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h 精密量取供試品溶液20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。D-焦谷氨酸 RSD為0.73%，L-焦谷氨酸RSD為0.70%。供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

3 結(jié)論

利用高效液相色譜法在手型固定相上直接分離焦谷氨酸對(duì)映異構(gòu)體，操作方法快捷簡(jiǎn)便，精密度高、穩(wěn)定性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能有效分離焦谷氨酸對(duì)映異構(gòu)體，可用于實(shí)際樣品的定量分析，此方法具有較高的實(shí)用價(jià)值。

[1]范毅，馮鈺锜，彭劍民.焦谷氨酸對(duì)映體的手性高效液相色譜分離.藥物分析雜志，2005，25(4).