張黎黎，田順亮

（1.廣西桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心胸外科，桂林 541001；2.廣西桂林醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室，桂林 541004）

在腦損傷實(shí)驗(yàn)中，常用大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物建立腦損傷模型。大鼠腦損傷后，爬板實(shí)驗(yàn)是檢測其神經(jīng)功能改變的一種常用方法［1，2］。在以往的試驗(yàn)中，爬板實(shí)驗(yàn)中多采用有機(jī)玻璃板外面蒙以絲網(wǎng)作為爬板［3］。由于這種爬板缺少其它的附屬裝置，常需要2個(gè)人一起才能完成實(shí)驗(yàn)檢測；而且由于爬板缺乏良好的固定支撐，常導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中爬板發(fā)生不必要的位置移動(dòng)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)誤差較大；由于爬板只能向一端傾斜，放置鼠的位置和方向受到了限制，當(dāng)測試過程中，大鼠出現(xiàn)了調(diào)頭爬行，就須重新檢測；當(dāng)大鼠從爬板上滑脫到地面上時(shí)，會(huì)發(fā)生大鼠的逃逸、躲藏，難以找尋和捕捉，給實(shí)驗(yàn)帶來很大的不便。

為了使科研工作者能輕松快捷地通過爬板實(shí)驗(yàn)檢測大鼠腦損傷后神經(jīng)功能的改變，并提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，防止實(shí)驗(yàn)中大鼠逃逸，特設(shè)計(jì)制作了一種經(jīng)濟(jì)實(shí)用的爬板裝置，以保證實(shí)驗(yàn)檢測的順利進(jìn)行。

1 材料和方法

1.1 爬板實(shí)驗(yàn)裝置的制作材料和方法（見圖1）

底槽的制作：選厚度為1.5 cm的木板，鋸切成左右長140 cm，上下高20 cm的底槽前板和底槽后板，以及左右長140 cm，前后寬20 cm的底槽底板。用螺絲釘將底槽前板和底槽后板分別固定在底槽底板的前、后側(cè)面上，制作成底槽。底槽兩側(cè)自然形成左、右兩個(gè)缺口。

活動(dòng)擋板的制作：選厚度為1.5 cm的泡沫塑料板，裁切成水平部：左右寬6 cm，前后長20 cm，垂直部：上下高17 cm，前后寬20 cm的左擋板和右擋板。

活動(dòng)擋板與底槽的連接：將左擋板和右擋板的水平部，沿著底槽底板分別經(jīng)左缺口和右缺口推向底槽內(nèi)，至兩擋板的垂直部正好將底槽的左缺口和右缺口封閉。

圖1 大鼠爬板實(shí)驗(yàn)裝置示意圖Fig.1 Sketch map of the experimentalapparatus for rat climbing board test

豎桿的制作：選厚度為1 cm的木板，鋸切成上下高58 cm，左右寬10 cm的前豎桿和后豎桿。在兩豎桿上部距頂端5 cm處的中央位置，鉆一直徑為0.42 cm的孔，以孔為圓心，在孔的水平線下方用碳素筆做55°、60°、65°、70°和90°傾斜角刻度標(biāo)示。

豎桿與底槽的連接：將前豎桿和后豎桿的下端分別與底槽前板和底槽后板側(cè)面的下端對齊，并用螺絲釘將其相互連接。

爬板的制作：選乳白色，厚度為1.5 cm的高密度板，鋸切成左右長100 cm，前后寬19 cm的主板，將孔徑為0.2 cm×0.2 cm的鋼絲網(wǎng)蒙于主板的上面，并拉緊鋼絲網(wǎng)繞經(jīng)主板的側(cè)面至主板的下面。取一左右長95 cm，前后寬10 cm，厚0.5 cm的木板，借助于小鐵釘將鋼絲網(wǎng)的斷端固定于木板和主板的下面之間，制作成爬板。在爬板前、后兩側(cè)面的中央部各鉆一直徑0.3 cm，深2.1 cm的小孔。

轉(zhuǎn)軸的制作：選兩個(gè)長5 cm的螺絲釘作為爬板裝置的轉(zhuǎn)軸。轉(zhuǎn)軸蓋直徑1 cm，上有一橫貫轉(zhuǎn)軸蓋的“一”形凹槽，凹槽寬0.12 cm，深0.15 cm。轉(zhuǎn)軸體部直徑為0.4 cm，長4.8 cm，其中螺紋部長2.3 cm，光滑部長2.5 cm。

爬板借轉(zhuǎn)軸與豎桿的連接：將爬板置于前豎桿和后豎桿上部之間，使爬板上的小孔與前豎桿和后豎桿上的孔相對齊。將兩個(gè)轉(zhuǎn)軸的轉(zhuǎn)軸體分別穿過前豎桿和后豎桿上的孔到達(dá)爬板側(cè)面上的小孔，經(jīng)小孔，將轉(zhuǎn)軸體的螺紋部旋入爬板內(nèi)，從而將爬板與前豎桿和后豎桿連為一體，而轉(zhuǎn)軸體部的光滑部則留置于前豎桿和后豎桿上的孔內(nèi)。當(dāng)爬板向左、右傾斜運(yùn)動(dòng)時(shí)，其轉(zhuǎn)軸的光滑部作為軸心在孔內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)。

指針的制作：取一直徑0.08 cm，長15 cm的不銹鋼絲，將兩端用砂輪打磨圓滑即制作成指針。

指針與轉(zhuǎn)軸的連接：將轉(zhuǎn)軸的螺紋部經(jīng)爬板側(cè)面上的小孔旋入爬板后的最終狀態(tài)是：爬板和轉(zhuǎn)軸蓋上的“一”形凹槽23均處于水平位。此時(shí)，將指針?biāo)街萌氚疾?內(nèi)，并將兩者焊接牢固。

1.2 爬板實(shí)驗(yàn)裝置的使用方法

實(shí)驗(yàn)檢測時(shí)，將左擋板和右擋板的水平部，沿著底槽底板分別經(jīng)左缺口和右缺口向底槽內(nèi)推進(jìn)，至兩擋板的垂直部正好將底槽的左缺口和右缺口封閉，使底槽形成只有上口開放的空間，可防止實(shí)驗(yàn)中滑入底槽內(nèi)大鼠的逃逸；實(shí)驗(yàn)者一只手把持爬板的一端，使爬板處于水平位；另一只手將大鼠置放于爬板的另一端，使鼠頭朝向爬板被手所持的一端；將爬板鼠尾所指向的一端緩緩向下傾斜，此時(shí)，指針隨同轉(zhuǎn)軸伴隨著爬板的傾斜而轉(zhuǎn)動(dòng)，并在傾斜角刻度標(biāo)示上，指示出相應(yīng)的傾斜角；當(dāng)大鼠從爬板上向下滑脫時(shí)，記錄下此時(shí)指針?biāo)甘緝A斜角。根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)，按照傾斜角大小，得出神經(jīng)功能缺失分值。將大鼠從底槽中取出，放回飼養(yǎng)籠；檢測結(jié)束時(shí)，將左擋板和右擋板分別從底槽的左缺口和右缺口處拉出，清理底槽中的鼠便。

1.3 爬板實(shí)驗(yàn)裝置的在大鼠腦缺血實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用

1.3.1 動(dòng)物分組

將24只體重250～300 g的成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組。大鼠均由中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，SCXK-［軍］2007-004）。SYXK（津） 2008-0005。

Tβ4組：首先采用線栓法制作大腦中動(dòng)脈栓塞（m idd le cerebral artery occlusion，MCAO）模型，隨后腹腔注射用0.01 mol/L的 PBS溶解的胸腺素 β4 （thymosineβ4，Tβ4）（北京諾思蘭德生物技術(shù)有限公司），注射劑量為5 mg/kg·w；

PBS組：在 MCAO的基礎(chǔ)上，腹腔注射與 Tβ4同等量的PBS；

sham組：進(jìn)行假手術(shù)。

1.3.2 MCAO的制備方法

按350 mg/kg體重的劑量，對大鼠行10％水合氯醛腹腔注射麻醉；將大鼠仰臥固定于溫控動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上，術(shù)中溫度保持在37℃ ±0.5℃；剔去大鼠頸部體毛，用碘伏消毒頸部皮膚；于正中偏右側(cè)0.5 cm縱切頸部皮膚，切口長1.5～2 cm；將右側(cè)的下頜下腺向右側(cè)分離牽拉，向深層分離淺、深筋膜，清晰顯現(xiàn)右側(cè)的二腹肌后腹、肩胛舌骨肌和胸乳突??；在三塊肌所圍成的三角內(nèi)，解剖分離出右側(cè)的頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈，用4-0號黑色絲線分別牽拉固定三個(gè)動(dòng)脈，注意保護(hù)與動(dòng)脈相鄰的迷走神經(jīng)、頸神經(jīng)以及頸部的交感神經(jīng)等；依次在近心端結(jié)扎頸外動(dòng)脈和頸總動(dòng)脈；距頸總動(dòng)脈分叉處約0.3 cm處，在頸總動(dòng)脈壁上做尖端朝向近心端的“V”形切口；用4-0尼龍線制成線栓（用賴氨酸包被，長2.5 cm，直徑0.17 mm，頭端被燒灼成直徑約0.28 mm的圓滑小球），經(jīng)“V”形切口插入右頸總動(dòng)脈，并經(jīng)右頸內(nèi)動(dòng)脈向顱內(nèi)推進(jìn)，推進(jìn)深度為線栓頭端距頸總動(dòng)脈分叉處約1.8 cm±0.2 cm，此時(shí)可阻斷右側(cè)大腦中動(dòng)脈的血流；在右頸內(nèi)動(dòng)脈近頸總動(dòng)脈分叉處結(jié)扎頸內(nèi)動(dòng)脈，固定線栓以防脫落；剪去線栓留在血管外的部分；將頸部各結(jié)構(gòu)復(fù)位，縫合頸部皮膚。

1.3.3 假手術(shù)方式

與實(shí)驗(yàn)組和對照組手術(shù)方法基本相同，所不同的是：假手術(shù)組線栓推進(jìn)的深度為線栓頭端距頸總動(dòng)脈分叉處約1 cm，右側(cè)大腦中動(dòng)脈仍可借助于大腦動(dòng)脈環(huán)獲得血供。

1.3.4 爬板實(shí)驗(yàn)檢測

應(yīng)用爬板實(shí)驗(yàn)裝置，在術(shù)后1～7 d分別采用新裝置和原裝置檢測各組大鼠的神經(jīng)功能缺失評分。爬板實(shí)驗(yàn)的評分方法是以大鼠從爬板上開始滑落時(shí)，爬板的傾斜角為依據(jù)進(jìn)行打分，標(biāo)準(zhǔn)為：0分：≥70°；1分：≥65°；2分：≥60°；3分：≥55°；4分：≥ 50°；5分：＜50°。每只鼠重復(fù)3次，取平均分作為最終評分。

1.3.5 統(tǒng)計(jì)分析

在不同的時(shí)間點(diǎn)上，對3組大鼠的神經(jīng)功能缺失評分進(jìn)行方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

3組大鼠分別采用新裝置和原裝置進(jìn)行爬板實(shí)驗(yàn)，所檢測的神經(jīng)功能缺失評分見表1。

3 討論

3.1 新裝置檢測結(jié)果的分析

用新爬板實(shí)驗(yàn)裝置所檢測的結(jié)果顯示，術(shù)后1 d，sham組也有一定的神經(jīng)功能缺失，這可能是因?yàn)槭中g(shù)的影響，以及右側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎所引起右腦短暫少量缺血而引起的神經(jīng)功能改變；但由于分布到右側(cè)大腦的大腦前、中、后動(dòng)脈并未受線栓的阻塞，仍可通過大腦動(dòng)脈環(huán)從椎動(dòng)脈及對側(cè)的頸總動(dòng)脈獲得足夠的血供，所以癥狀輕微，且在術(shù)后2 d，神經(jīng)功能缺失評分即為0分。在術(shù)后1 d、2 d，Tβ4組和PBS組神經(jīng)功能缺失都比較嚴(yán)重，兩者評分都明顯高于sham組（P＜0.05），但兩者之間卻無明顯差異（P＞0.05），這可能是：兩組都經(jīng)受了手術(shù)的打擊和因大腦中動(dòng)脈缺血所造成的腦損傷；隨著時(shí)間的推移，兩組神經(jīng)功能缺失評分都在逐步降低，這與大鼠逐步從手術(shù)的打擊和因大腦中動(dòng)脈缺血所造成的腦損傷中逐步恢復(fù)相關(guān)。從術(shù)后3 d開始至術(shù)后7 d的各時(shí)間點(diǎn)，Tβ4組大鼠神經(jīng)功能缺失評分都低于PBS組（P＜0.05），且與sham組相比，評分雖比sham組高但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而PBS組則明顯高于sham組（P＜0.05），這說明Tβ4組的神經(jīng)功能恢復(fù)要好于PBS組，原因可能是Tβ4具有抗炎、抗凋亡作用［4］，MCAO后Tβ4對腦組織的保護(hù)作用而使神經(jīng)功能得以較快的恢復(fù)。這樣的結(jié)果同時(shí)說明，所設(shè)計(jì)的爬板實(shí)驗(yàn)裝置可以良好地檢測出大鼠腦損傷后神經(jīng)功能缺失狀況。但從術(shù)后3 d開始至術(shù)后7 d的各時(shí)間點(diǎn)，Tβ4組大鼠神經(jīng)功能缺失評分與sham組相比，評分雖比sham組高但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）這一結(jié)果看，爬板實(shí)驗(yàn)有一定的局限性，應(yīng)結(jié)合其他的實(shí)驗(yàn)才能做出更精確的評定。但這只是爬板實(shí)驗(yàn)自身的局限性，而非新爬板裝置的原因。

3.2 新裝置和原裝置檢測結(jié)果的比較

Tβ4組和PBS組的檢測結(jié)果顯示，用新裝置的檢測評分在逐步平緩下降，5 d后，仍可檢測到神經(jīng)功能缺失，這比較切合大鼠術(shù)后功能逐步恢復(fù)的病理過程；用原裝置的檢測評分雖然也在逐步下降，但呈跳躍式下降，5 d后均未能檢出神經(jīng)功能缺失。

將Tβ4組和PBS組的檢測結(jié)果進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)：采用新裝置，3 d后，均可檢出兩者之間的差異（P＜0.05）；采用原裝置，3 d時(shí)未檢出差異（P＞0.05），4d時(shí)檢出了差異（P＜0.05），但隨后均未能再檢出兩者之間的差異（P＞0.05）。

將Tβ4組的檢測結(jié)果與sham組進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)：采用新裝置，前3 d，均可檢出兩組之間的差異（P＜0.05）；采用原裝置，只檢出前 2 d的差異（P＜0.05），隨后未能檢出差異（P＞0.05）。

表1 神經(jīng)功能缺失評分（±s）Tab.1 Nerve function loss score（±s）

表1 神經(jīng)功能缺失評分（±s）Tab.1 Nerve function loss score（±s）

注：a為在各時(shí)間點(diǎn)，Tβ4組、PBS組分別與Sham組相比，P＜0.05；b為在各時(shí)間點(diǎn)，Tβ4組與PBS組相比，P＜0.05Note：a：At each time point，when the nerve function loss score of the Tβ4 group and the PBSgroup was compared with that of the Sham group separately，P＜0.05；b：At each time point，when the nerve function loss score of the Tβ4 group was compared with that of the PBS group，P＜0.05

1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d新裝置New apparatus原裝置Primary apparatus新裝置New apparatus原裝置Primary apparatus新裝置New apparatus原裝置Primary apparatus新裝置New apparatus原裝置Primary apparatus新裝置New apparatus原裝置Primary apparatus新裝置New apparatus原裝置Primary apparatus新裝置New apparatus原裝置Primary apparatus Tβ4組Tβ4 group 3.00± 0.53a 2.00± 1.04a 2.00± 0.93 a 1.50± 1.20 a 0.88± 0.99 ab 0.38± 0.74 0.63± 0.92b 0.13± 0.35b 0.25± 0.46b 0±0 0.25± 0.46b 0±0 0.13± 0.35b 0±0 PBS組PBS group 3.00± 0.76 a 2.88± 1.13 a 2.00± 0.76 a 1.63± 1.19 a 1.75± 0.46 a 1.13± 0.99a 1.75± 0.46 a 0.75± 0.71 a 1.38± 0.52 a 0±0 1.00± 0.53 a 0±0 0.88± 0.35 a 0±0 Sham組Sham group 1.13± 0.83 0.75± 0.46 0±0 0±0 0±0 0±0 0±0 0±0 0±0 0±0 0±0 0±0 0±0 0±0

將PBS組的檢測結(jié)果與 sham組進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)：采用新裝置，可檢出兩組間在術(shù)后一直存在著差異（P＜0.05）；采用原裝置，只檢出前4 d的差異（P＜0.05），隨后未能檢出差異（P＞0.05）。

對比發(fā)現(xiàn)，新裝置的檢測評分更符合術(shù)后大鼠的病理過程，評分更為準(zhǔn)確，也能更有效地檢測出因?qū)嶒?yàn)因素所造成的大鼠運(yùn)動(dòng)功能的差異。

3.3 新裝置的有益之處

在實(shí)際應(yīng)用中，發(fā)現(xiàn)新裝置的有益之處在于：爬板借助于豎桿、底槽得到了穩(wěn)固的支撐，實(shí)驗(yàn)操作得以簡便，一個(gè)人即可完成實(shí)驗(yàn)檢測。爬板可在穩(wěn)固的框架上靈活轉(zhuǎn)動(dòng)，指針和傾斜角刻度也比較穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性得以提高。裝置的前、后兩側(cè)都設(shè)置有指針和傾斜角刻度標(biāo)示，實(shí)驗(yàn)人員在裝置的前、后都可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作和觀察記錄。爬板以中心部位為轉(zhuǎn)軸，既能向左側(cè)，也能向右側(cè)行90°的傾斜，可確保不論大鼠處于爬板的哪一端，實(shí)驗(yàn)檢測都可進(jìn)行；即使鼠在檢測過程中出現(xiàn)了調(diào)頭現(xiàn)象，也可通過改變爬板的傾斜方向繼續(xù)進(jìn)行測試，實(shí)驗(yàn)操作非常便利。爬板裝置配有底槽和活動(dòng)擋板，實(shí)驗(yàn)時(shí)，將擋板插入底槽兩端，可防止滑落入底槽內(nèi)大鼠的逃逸；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，拔出擋板，便于對底槽進(jìn)行衛(wèi)生清潔。爬板裝置制作所需材料為常見的木板、泡沫塑料板、高密度板、鋼絲網(wǎng)等，制作簡單，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。

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