唐亨力　區(qū)奕猛　余炯標(biāo)

[摘要] 目的 探討細(xì)胞角蛋白CK19 mRNA表達(dá)水平在乳腺癌微轉(zhuǎn)移檢測(cè)及治療監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用。方法 選擇我院2004年2月～2011年8月健康體檢者30例作為對(duì)照組，同時(shí)選擇良性乳腺腫瘤30例，乳腺癌30例，對(duì)健康體檢者、30例良性乳腺腫瘤和30例乳腺癌患者進(jìn)行外周血中CK19 mRNA水平檢查，統(tǒng)計(jì)比較組間的差異。結(jié)果 CK19 mRNA在乳腺癌組表達(dá)明顯高于良性乳腺疾病組，乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。結(jié)論 FQ-PCR檢測(cè)CK19 mRNA對(duì)乳腺癌診斷特異性較高，具有確切的預(yù)測(cè)價(jià)值，可有效監(jiān)測(cè)乳腺癌微轉(zhuǎn)移和療效，臨床值得推廣。

[關(guān)鍵詞] 乳腺癌微轉(zhuǎn)移；CK19 mRNA；預(yù)測(cè)

[中圖分類號(hào)] R737.9[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號(hào)] 1673-9701（2012）21-0022-02

CK19作為上皮組織來(lái)源的組織特異性指標(biāo)，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)CK19的異常表達(dá)與乳腺癌的微轉(zhuǎn)移及其療效具有密切關(guān)系[1-3]。FQ-PCR可以進(jìn)行核酸定量分析，靈敏性高、特異性高，具有同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)的雙重優(yōu)勢(shì)，診斷乳腺癌微轉(zhuǎn)移具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值，引起人們的廣泛關(guān)注。選擇我院2004年2月～2011年8月健康體檢者30例作為對(duì)照組，同時(shí)選擇良性乳腺腫瘤患者30例，乳腺癌患者30例，對(duì)健康體檢者、30例良性乳腺腫瘤患者和30例乳腺癌患者進(jìn)行外周血中CK19 mRNA水平檢查，統(tǒng)計(jì)比較組之間的差異，現(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2004年2月～2011年8月健康體檢者30例作為對(duì)照組，同時(shí)選擇良性乳腺腫瘤患者30例，乳腺癌患者30例，對(duì)健康體檢者、30例良性乳腺腫瘤患者和30例乳腺癌患者進(jìn)行外周血中CK19 mRNA水平檢查，統(tǒng)計(jì)比較組間的差別。入選者均心、肺、肝、腎等功能健全；30例乳腺癌患者均經(jīng)病理確診。兩組間患者年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2方法

術(shù)前1周內(nèi)取晨血5 mL，為抗凝加少量的EDTA(1 mg/mL)，生理鹽水稀釋2倍，借助淋巴細(xì)胞分離液將淋巴細(xì)胞分離完全，提取細(xì)胞總RNA[3]。并設(shè)計(jì)CK19的引物和探針。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系50 μL，在分析儀上對(duì)標(biāo)本、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行擴(kuò)增和分析。采用Bieche的標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法，線性范圍：（1 022～1 066）/mL。儀器根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)計(jì)算出標(biāo)本中CK19的拷貝數(shù)/ mL，定量分析GAPDH的拷貝數(shù)/mL，CK19/GAPDH比值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，多組間計(jì)量資料比較采用方差分析,兩兩比較進(jìn)行t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn),P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1對(duì)照組與疾病組CK19測(cè)定結(jié)果

表1可見(jiàn)，CK19在乳腺癌組明顯高于良性乳腺疾病組（P < 0.05）；CK19/GAPDH在乳腺癌組明顯高于良性乳腺疾病組（P < 0.05）；GAPDH組間差異不明顯。

表1 對(duì)照組與疾病組CK19測(cè)定結(jié)果（x±s）

注：乳腺癌組與良性乳腺疾病組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（▲P ＜0.05）

2.2比較FQ-PCR和RT-PCR用于乳腺癌微轉(zhuǎn)移診斷的評(píng)價(jià)

我們比較了RT-PCR法和FQ-PCR兩種方法檢測(cè)乳腺癌靈敏度，表明FQ-PCR對(duì)乳腺癌診斷的靈敏度、特異性顯著高于RT-PCR法（P < 0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩種方法對(duì)乳腺癌靈敏度、特異性比較

注：兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（▲P ＜0.05）

3 討論

近年來(lái)分子生物學(xué)廣泛應(yīng)用，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為角蛋白19是一種酸性蛋白[4-6]。CK19在正常上皮和各種上皮來(lái)源的腫瘤中，均會(huì)有表達(dá)，但是在正常情況下，外周血、骨髓、淋巴結(jié)內(nèi)不會(huì)表達(dá)。CK19在甲狀腺癌、肝膽管細(xì)胞癌、肝細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌、肺鱗狀細(xì)胞癌等均有不同程度的表達(dá)，特別是在肺鱗狀細(xì)胞癌中的診斷、監(jiān)測(cè)、預(yù)后起重要作用。如果外周血中檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有CK19 mRNA，表明腫瘤細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)入血液，說(shuō)明腫瘤轉(zhuǎn)移。目前在臨床上已肯定CK19 mRNA表達(dá)水平在乳腺癌診斷及治療監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值[7,8]。

本研究結(jié)果顯示，CK19在乳腺癌組明顯高于良性乳腺疾病組，CK19/GAPDH在乳腺癌組明顯高于良性乳腺疾病組（P < 0.05），GAPDH組間差異沒(méi)有明顯差異（P ＞ 0.05）；表明CK19 mRNA表達(dá)水平明顯減弱。我們比較了RT-PCR法和FQ-PCR兩種方法檢測(cè)結(jié)果，表明FQ-PCR對(duì)乳腺癌診斷的靈敏度顯著高于RT-PCR法。

綜上所述，CK19的基因表達(dá)水平可有效監(jiān)測(cè)乳腺癌微轉(zhuǎn)移和療效，F(xiàn)Q-PCR法不僅具有普通PCR的高靈敏性，而且由于熒光探針的作用，可以獲得定量的結(jié)果，所以FQ-PCR還具有DNA雜交的高特異性和光譜技術(shù)的高精確性，結(jié)果更加可靠，檢驗(yàn)更加方便?？梢杂行У赜糜谌橄侔z測(cè)。健康人與乳腺癌微轉(zhuǎn)移患者之間CK19的基因表達(dá)水平具有明顯差異；同時(shí)，外周血CK19 mRNA的表達(dá)水平，為臨床判斷乳腺癌血行轉(zhuǎn)移的高危險(xiǎn)因素的患者提供參考指標(biāo)，也為患者的個(gè)體化治療提供依據(jù)。我們認(rèn)為CK19 mRNA表達(dá)水平對(duì)預(yù)測(cè)乳腺癌微轉(zhuǎn)移具有重要價(jià)值，值得推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2012-05-14）