齊忠志

當(dāng)歸是一種傘形科當(dāng)歸屬多年生草本植物，其干燥的貯藏根是我國(guó)傳統(tǒng)中藥，具有悠久的藥用歷史，歷代本草均有記載。中醫(yī)的傳統(tǒng)理論認(rèn)為，當(dāng)歸的不同藥用部位具有不同的功效。當(dāng)歸水提取物含有各種水溶性化學(xué)成分，近期研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸多糖除具有清除自由基、提高免疫力和抗腫瘤功能外［1］，還具有抗輻射損傷功能，對(duì)亞急性小鼠輻射損傷有良好的防護(hù)作用［2］。

DNA是多種誘變因子危害的主要目標(biāo)，許多誘變因子都可以引起DNA的損傷，導(dǎo)致基因突變和染色體畸變。DNA是否受到損傷取決于抗誘變物對(duì)誘變因子的拮抗作用。染色體畸變分析作為一種簡(jiǎn)便、快速的細(xì)胞遺傳學(xué)方法，正廣泛應(yīng)用于評(píng)價(jià)環(huán)境誘變劑以及放射損傷等因素對(duì)生物的危害程度。本文通過分析小鼠實(shí)驗(yàn)過程中的染色體畸變率，深入探討當(dāng)歸水提取物對(duì)放射損傷的防護(hù)效應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院實(shí)動(dòng)物中心提供的近交系昆明種小白鼠，體質(zhì)量18～20 g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(吉)2007-0003。

1.2 試劑 當(dāng)歸水提取物:中藥當(dāng)歸采購自吉林大藥房并經(jīng)鑒定。電動(dòng)粉碎機(jī)粉碎后，稱取當(dāng)歸粉末6 g，300 ml去離子水浸泡1 h，煎煮3次，初次30 min，后兩次各20 min，煎煮過程中根據(jù)情況添加適量去離子水，收集三次濾液，濃縮至20 ml，每毫升含當(dāng)歸相當(dāng)于生藥量300 mg，4℃暫時(shí)保存，實(shí)驗(yàn)前以無菌生理鹽水稀釋至所需濃度。

1.3 分組及實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常對(duì)照組(生理鹽水);照射對(duì)照組;當(dāng)歸抗照射實(shí)驗(yàn)組(當(dāng)歸各劑量+X射線全身照射)，每組6只動(dòng)物，雌性雄性各半。當(dāng)歸共分為三個(gè)劑量，分別為1.5 g/kg、3.0 g/kg、6.0 g/kg。生理鹽水、當(dāng)歸均灌胃給藥，每10 g體重0.2 ml，連續(xù)灌胃6 d。

除正常對(duì)照組外，照射對(duì)照組及當(dāng)歸各劑量組于第六天灌胃后，均接受一次性X射線全身照射，采用 SiemeneX射線治療機(jī)，將小鼠放入30 cm×30 cm×20 cm紙盒內(nèi)，小鼠在盒內(nèi)呈分散狀態(tài)，照射源距小鼠100 cm，射野為30 cm×30 cm，劑量率為1.5 Gy/min，總照射量為6 Gy。照射22 h后注入秋水仙素(4㎎/kg體質(zhì)量)，照射24 h后，頸椎脫臼殺死所有小白鼠，剝離股骨，用濾紙將肌肉剔除干凈，剪掉骨端，以1 ml注射器吸取37℃0.075 mKcl溶液，反復(fù)沖出骨髓，充分吸打混勻后，37℃低滲20 min，甲醇:冰醋酸 =3:1固定20 min，計(jì)3次，空氣干燥法制片，10%吉姆薩染色，選擇分散好、形態(tài)好的中期分裂相檢查染色體畸變情況，每組分析250個(gè)中期分裂相。統(tǒng)計(jì)不同類型的染色體畸變，計(jì)數(shù)后，計(jì)算染色體畸變率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用染色體畸變的百分率±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

X射線全身照射可明顯誘發(fā)小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變，畸變率顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.01)，實(shí)驗(yàn)中當(dāng)歸三個(gè)劑量組加X射線全身照射，均可明顯降低X射線誘發(fā)的染色體畸變率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，說明當(dāng)歸水提取物對(duì)X射線誘發(fā)的遺傳損傷具有明顯的抑制作用。

表1 當(dāng)歸對(duì)小鼠骨髓淋巴細(xì)胞染色體畸變的影響

3 討論

放射輻射可以導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)多種損傷。隨著人們健康意識(shí)的不斷提高，臨床上放療的癌癥患者以及職業(yè)性受照人員的輻射性損害日益受到關(guān)注。尋找積極有效的防治藥物已成為一個(gè)迫切解決的問題。目前已知的一些具有輻射防護(hù)作用的藥物，多為含硫物質(zhì)，毒性較大，所以人們從天然的藥物入手以期待開發(fā)療效佳、毒性低，可用于臨床防治放射損傷的藥物。

DNA是放射作用最基本的靶分子，許多放射生物學(xué)效應(yīng)都是通過DNA損傷表現(xiàn)出來的。DNA不僅會(huì)受到放射粒子束的直接攻擊，而且還會(huì)受放射所致自由基的間接攻擊，從而引起DNA鏈斷裂、染色體重組、基因突變。

近年來，對(duì)放射損傷防護(hù)藥物的研究日益深入，研究顯示具有清熱解毒、活血化瘀、補(bǔ)血益氣、養(yǎng)陰升白的中草藥均有不同程度的抗輻射作用［3］。萬芬等發(fā)現(xiàn)刺五加能使胸腺細(xì)胞提前恢復(fù)正常而對(duì)輻射損傷有一定的保護(hù)和修復(fù)作用［4］。

文獻(xiàn)中對(duì)當(dāng)歸多糖抗輻射的研究報(bào)道較多，但因中藥成分復(fù)雜，對(duì)這類藥物的化學(xué)成分及活性成分的研究還不夠深入。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，當(dāng)歸水提取物可以有效地抑制X射線對(duì)哺乳動(dòng)物遺傳物質(zhì)的損傷。很多輻射防護(hù)劑通過清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化、保護(hù)免疫系統(tǒng)以及促進(jìn)受損DNA修復(fù)等途徑而發(fā)揮其抗輻射作用，而中草藥抗輻射作用的機(jī)制主要為提高生存率、清除自由基、保護(hù)DNA、保護(hù)造血系統(tǒng)及對(duì)細(xì)胞因子的誘生和調(diào)節(jié)等［5］。當(dāng)歸水提取物防護(hù)輻射的具體機(jī)制是否與這些因素有關(guān)，其作用的有效部位、靶點(diǎn)等還有待深入研究。

由于中草藥藥源廣，毒性低，易于接受，用中草藥防治因輻射造成的機(jī)體損傷可能成為抗輻射藥物的優(yōu)勢(shì)所在。加強(qiáng)這方面的研究工作，進(jìn)一步探討其作用機(jī)理，對(duì)開發(fā)新的抗輻射藥物具有重要意義。

［1］曹蔚，李小強(qiáng)，侯穎，等.當(dāng)歸多糖 APS-3 c的結(jié)構(gòu)特征及體外抗腫瘤作用的研究.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2008，20:217-222.

［2］孫元琳，湯堅(jiān)，顧小紅，等.當(dāng)歸多糖對(duì)亞急性輻射損傷小鼠的防護(hù)作用研究.食品科學(xué)，2007，28(2):305-308.

［3］陳建業(yè).中藥放射防護(hù)劑的研究進(jìn)展.癌癥，1999，18:229-231.

［4］萬芬，張世明，戎誠(chéng)興.刺五加對(duì)60Co-γ射線照射后小鼠胸腺效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.湖北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1989，10(3):226-228.

［5］梁莉，李新芳.放射防護(hù)藥物的研究進(jìn)展和機(jī)制探討.蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，28(3):90-92.