周繼法 劉利根

（1 江蘇省中醫(yī)院，南京210029；2 中國藥科大學(xué)，南京210009）

鹽酸格拉司瓊是一種強效高選擇性5-HT3受體拮抗劑，臨床廣泛用于預(yù)防和治療腫瘤放、化療引起的惡心嘔吐，有療效好、半衰期長、劑量低等優(yōu)點[1-2]。市場有鹽酸格拉司瓊注射劑和口服固體制劑產(chǎn)品，雖然口服制劑與注射劑療效相同[3-4]，但臨床常用注射劑。有些放化療病人會因吞咽藥物引起咽喉刺激而誘發(fā)惡心嘔吐，因此不宜服用經(jīng)濟方便的口服止吐藥。我院研制了鹽酸格拉司瓊口腔噴霧劑（批準文號：尚未批準），服藥時將微量霧狀藥液噴入口腔隨唾液自然吞咽，提高患者依從性。本文研究了鹽酸格拉司瓊噴霧劑的質(zhì)量控制方法，為建立質(zhì)量標準提供技術(shù)依據(jù)。

1 儀器和試劑

島津LC-20A高效液相色譜儀，包括LC-20ADVP型泵、SPD-20AVP紫外-可見光檢測器和LC solution工作站；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

鹽酸格拉司瓊對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100558-200301）；鹽酸格拉司瓊原料藥（蘇州長征-欣凱制藥有限公司，批號：060901）；鹽酸格拉司瓊口腔噴霧劑（符合GMP要求的噴霧劑車間試制的樣品，批號：081129，081130，081201；每瓶30噴，每噴含格拉司瓊0.33mg）；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 鑒別 照含量測定項下，分別吸取20μL對照品溶液及供試品溶液注入液相色譜儀，供試品溶液主峰的保留時間與對照品溶液主峰的保留時間一致。

取供試品適量，按照《中國藥典》2010年版二部附錄III[5]項下氯化物的鑒別反應(yīng)進行試驗；另外，配制輔料溶液，同法試驗。結(jié)果表明，供試品顯氯化物鑒別反應(yīng)，輔料溶液不顯氯化物鑒別反應(yīng)，輔料對鹽酸格拉司瓊的氯化物鑒別沒有影響。

2.2 檢查

2.2.1 性狀、pH、最低裝量檢查 結(jié)果見表1。

2.2.2 每瓶總噴次 取供試品4瓶，照《中國藥典》2010年版二部附錄1L噴霧劑項下每瓶總噴次[5]檢查法檢查，3批樣品的檢查結(jié)果見表1，均符合藥典的規(guī)定。

2.2.3 每噴主藥含量 取供試品1瓶，照《中國藥典》2010年版二部附錄ⅠL噴霧劑項下每噴主藥含量[5]檢查法檢查，照“2.3.2”項下測定方法進行檢測，3批樣品檢測結(jié)果見表1。每噴主藥含量檢查結(jié)果均符合《中國藥典》2010年版二部的相應(yīng)規(guī)定，為標示含量的80%～120%。

表1 鹽酸格拉司瓊噴劑檢查結(jié)果 (n =4)

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil氰基硅烷鍵合硅膠柱（250mm×4.6 mm×5μm，美國賽分科技公司）；流動相：含0.25%（mL?mL-1）三乙胺的0.05 mol?L-1醋酸鈉溶液（用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至6.0）-甲醇（50：50）；流速：1.0 mL?min-1；柱溫：室溫；檢測波長：302 nm；進樣量：20 μL；理論板數(shù)按鹽酸格拉司瓊峰計算不低于2000；分離度為 ＞1.5 。

2.3.2 測定方法 精密吸取供試品適量，加流動相稀釋制成約含格拉司瓊80μg?mL-1的溶液，即為供試品溶液。另取鹽酸格拉司瓊對照品適量，精密稱定，用流動相稀釋到含格拉司瓊80μg?mL-1，為對照品溶液。分別精密吸取20μL的對照品溶液及供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法計算格拉司瓊量（峰面積乘以0.8955）。

2.3.3 線性關(guān)系考察 精密稱取鹽酸格拉司瓊對照品22.67 mg，流動相溶解并稀釋到100 mL，制得226.7 mg?mL-1的溶液；分別取上述溶液1、2、3、4、5 ml，用流動相稀釋至10 mL，即得22.67、45.34、68.01、90.68、113.35μg?mL-1的鹽酸格拉司瓊?cè)芤骸７謩e吸取上述5種濃度的供試品溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積A為縱坐標，以供試品濃度C為橫坐標進行線性回歸，得線性方程：

結(jié)果表明，鹽酸格拉司瓊濃度在22～114μg?mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.4 中間精密度試驗 取供試品（批號：081129），按照不同時間、人員、設(shè)備的原則進行3d、2人、2臺儀器的中間精密度試驗，測定含量，計算含量平均值和SD、RSD。結(jié)果測得平均含量為99.7%，SD為0.22，RSD為0.22 %。

2.3.5 溶液穩(wěn)定性試驗 取供試品按含量測定的方法配制樣品，室溫放置，分別于0h、2h、4h、8h、12h取樣20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算平均峰面積、SD和RSD。結(jié)果平均峰面積為3762249.800，SD為5203.884，RSD為0.14%。從溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果可知，本品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定，能滿足測定需要。2.3.6 重復(fù)性試驗 取供試品，照含量測定方法制備6份供試品溶液，分別精密吸取20μL注入液相色譜儀，每份供試品重復(fù)進樣2針，記錄色譜圖，按外標法計算含量平均值和RSD。結(jié)果含量平均值為99.1%，RSD%為0.47%。

2.3.7 回收率試驗 按照含鹽酸格拉司瓊80%、100%、120%模擬處方，每個處方分別配制3批，分別取上述9個樣品各3 mL，用流動相稀釋至100 mL，作為供試品溶液。分別取各供試品溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法計算測得量，再分別計算各自的回收率，結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗結(jié)果

2.3.8 樣品測定 取3批供試品分別精密吸取適量，加流動相稀釋制成約含格拉司瓊80μg的溶液，為供試品溶液。另取鹽酸格拉司瓊對照品適量，精密稱定，用流動相稀釋到含格拉司瓊80μg?mL-1，為對照品溶液。分別精密吸取20μL的對照品溶液及供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，結(jié)果乘以0.8955計算格拉司瓊量，最后3批樣品測定結(jié)果分別為標示量99.5%，99.4%，101.4%。

3 討論

惡心嘔吐是腫瘤化療過程中最常見的副作用之一，發(fā)生率為65% ～85%。臨床上格拉司瓊聯(lián)合各種藥物治療嘔吐相關(guān)報道甚多。如王淑蘭[6]觀察中藥穴位貼敷聯(lián)合耳穴按壓治療順鉑引起延遲性嘔吐的療效，90例患者隨機分為治療組和對照組。對照組給予格拉司瓊3mg，靜滴，地塞米松5mg，靜滴，均每日1次，至化療結(jié)束；治療組在對照組方案基礎(chǔ)上加用自制中藥膏劑穴位貼敷聯(lián)合耳穴按壓，至化療結(jié)束后5天，共化療2個周期。結(jié)果治療組止吐有效率為93.3%，對照組為71.1%，兩組療效差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.01)。

多項臨床研究報道證實[7-9]，格拉司瓊口服與靜脈給藥同樣有效，口服后藥物更易通過近端腸黏膜吸收而接近外周5-HT3受體的位置，從而能更有效地發(fā)揮抗嘔吐作用。格拉司瓊靜脈給藥的常用劑量是每天3mg，而口服常用劑量僅每天2mg，但療效與靜脈給藥相當[10-11]。

市售鹽酸格拉司瓊口服固體制劑的劑量是每次1mg（以格拉司瓊C18H24N4O計），每天2次，化療前1 h和間隔12 h各服1次。鹽酸格拉司瓊口腔噴霧劑采用手動泵定量噴霧給藥，選用計量精密的藥用小轉(zhuǎn)臂噴頭噴霧瓶，設(shè)計為每噴0.13 mL，每次給藥3噴，每噴含格拉司瓊0.33mg，每瓶標示裝量3.9 mL（30噴）。研究顯示，鹽酸格拉司瓊口腔噴霧劑的每噴主藥含量和每瓶總噴次都能很好控制。供試品采用苯甲酸鈉為防腐劑，苯甲酸鈉在pH5.0以下抑菌活性強。有研究顯示[12-13]，鹽酸格拉司瓊注射液在pH值4.5～7.5之間穩(wěn)定，市售鹽酸格拉司瓊注射液的pH值范圍為4.0～6.0。因此，我們將鹽酸格拉司瓊口腔噴霧劑pH值調(diào)節(jié)為4.7左右，既可有效防腐，又能保證制劑的穩(wěn)定。

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